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文档简介

1、生物制药技术，基因工程制药何，学习要求：1 .掌握基因工程药学的基本概念，以及基因克隆、外源基因鉴定、表达产物分离纯化的基础知识和技术。2.熟悉度：基因工程药物的特点和质量控制技术，基因工程药物的改造和转化思路。3.了解：国内外基因工程制药技术的发展及趋势。第一部分是基因工程药学的基本概念概述。基因工程药学的研究成果。基因工程制药技术的发展及趋势。第二节。基因工程制药基础知识。1.基因工程菌的构建与筛选。(1)向量1。质粒2。噬菌体；(2)目标基因的常用制备方法；1.化学合成方法。2.聚合酶链反应方法。3.基因文库法。4.cDNA文库法，(3)载体DNA与靶基因的连接，(1)粘端DNA片段与载

2、体DNA的连接。影响目的基因与载体连接效率的主要因素有：(1)DNA片段之间的连接方式。(2)靶基因和载体的浓度和比例。(3)连接温度、时间、连接酶活性和缓冲体系。将重组DNA导入宿主细胞1。宿主细胞分类：真核细胞：酵母、哺乳动物细胞、植物细胞、昆虫细胞等。原核生物：大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、链球菌等。2.将重组NDA导入宿主细胞的方法：转化、转染、显微注射、电穿孔等。(5)重组体的筛选和鉴定。在将重组DNA导入宿主细胞的实验中，因为重组率不能达到100%，所以有必要从这些细胞中筛选所需的重组体，将转化的细胞包被在特定的固体培养板上，并进一步筛选和鉴定产生的单个菌落或斑块(单克隆)。目标基因表达

3、产物的测定。核酸分子杂交3。限制性内切酶图谱4。脱氧核糖核酸序列测定。载体遗传标记。原核表达的特点和选择科恩等人于1973年首次成功地在大肠杆菌中表达了外源基因，并在随后的40年中这一领域取得了快速进展。目前，原核表达系统包括大肠杆菌、芽孢杆菌、链霉菌等。(7)真核表达的特征和选择。原核表达系统缺乏蛋白质翻译后加工和修饰系统，影响外源蛋白的生物活性。目前，基因工程中常用的真核表达系统包括酵母表达系统、昆虫细胞表达系统和哺乳动物细胞表达系统。重组蛋白的分离纯化，重组蛋白的分离纯化是根据产品性质和杂质状态，将各种分离纯化步骤结合起来，从而达到去除杂质的目的。分离纯化技术要求。(5)第3节。基因工程药物的改造。突变体的构建。融合蛋白，4。基因工程药物的质量控制。蛋白质含量的测定。蛋白质纯度的检测。蛋白质的测定Mr，4。蛋

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