土壤中分解尿素的细菌的分离和计数_课件

1、课题2土壤中分解尿素的细菌的分离和修订数，课题2微生物的培养和应用，一、课题背景，一、尿素的利用，尿素是重要的农业氮肥。 尿素不会直接被农作物吸收。 土壤中的细菌将尿素分解成阿摩尼亚后再用于植物。 2 .细菌利用尿素的理由，土壤中的细菌分解尿素是由于合成乌土卫五酶，3 .常见的分解尿素的微生物、芽孢杆菌、小球菌、假细胞球杆菌、革兰氏杆菌、棒状芽孢杆菌、梭状芽孢杆菌，一些真菌和放线菌也可以分解尿素。 4 .课题目的：从土壤中分离可分解尿素的细菌，修订每克土壤样品中含有多少细菌.研究思维方法.筛选菌株.修订菌落数.设置对照.1.提示实例：寻找目的菌种时对生存环境要求DNA聚合酶链式反应是在体外大量

2、复制少量DNA的技术，要求使用耐高温(930C )的DNA多聚酶。 筛选菌株，分离一种微生物，必须根据该微生物的特点，包括营养、大姨妈、生长条件等在内配置适当的培养基方法：抑制多种微生物的生长成为有利于该菌生长的环境，结果培养一定时间后，该菌数上升，稀释涂布平板法2、实验室微生物的筛选原理：为人为目标菌株的生长提供有利条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物的生长。 3、分离和修订土壤中尿素细菌所必需的培养基：从物理性质来看，该培养基属于什么种类，在功能上属于什么培养基？ 固体培养基、该培养基中哪一种成为碳源、氮源碳源：葡萄糖、尿素氮源：尿素、选择培养基、培养基的氮源是尿素，只

3、有能够合成乌土卫五酶的微生物才能分解尿素，把尿素作为氮源。 因为缺乏土卫五酶的微生物不能分解尿素，氮源不足不能生长繁殖，受到抑制，所以在这个培养基上可以选择分解尿素的微生物。 4、培养基选择尿素分解微生物的原理，选择培养基：在微生物学，允许特定种类的微生物生长的同时，抑制或阻止其他种类的微生物生长的培养基。 1、显微镜直接修正数：用血细胞修正数板，在显微镜下修正一定容积样品中的微生物数量。 (1)常用方法：每克试样的菌落数(CV)M，但是，对于个体较小的细菌，需要较高的细菌浓度，不适用于不能区分死菌和活菌的运动细菌的校正数。缺点是，2 .间接校正数法(活菌校正数法) (1)常用方法：每克试样的

4、菌落数(CV)M，但是， c是以一定稀释度在平板上生长的平均菌落数，v是涂布平板时使用的稀释液的体积(ml )，m是表示稀释倍数的样品稀释度高的情况下，在培养基表面生长的一个菌落来自样品稀释液中的一个活菌，通过对平板上的菌落数进行计数，即可得到(2)原理：稀释涂布平板法。 注意事项为了保证结果正确，选择在30300平板上计数蚁群数。 为了使结果接近真值，将相同的稀释度加入3个以上的平皿中，涂布、培养，计算菌落平均数。 统一的菌落多比活菌的实际数量低。 用涂布平板法选择的稀释度很重要，一般3个稀释度中第2个稀释度中出现的平均菌落数最好是50个左右。 设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实

5、验结果的影响，提高实验结果的可靠性。对照：设定对照的方法：空白对照：不给对照组任何处理要素。 条件对照：对照组采用部分实验要素，但不是应探讨的处理要素。自我对照：对照组和实验组均在同一研究对象中进行。相互对照：不仅对照组，还有一些实验组相互对照。 a同学的结果与其他同学不同，可能的解释有2种。 一个是因为土的样品不同。二是由于培养基污染和操作错误引起的。 小结节：从这个事例可以看出，实验结果很有说服力，有对比的设置是不可缺少的。 方案1 :其他同学用与a同学相同的土样进行实验，方案2:a同学制备的培养基不加入土样进行培养，作为空白对照证明培养基是否被污染。 结果预测：如果结果与a先生一致，则证

6、明a没有错；如果结果不同，则证明a先生的操作错误和培养基的配制存在问题。 二、实验的具体操作.土壤采样来自肥沃湿润的土壤。 将表层土捞出3cm左右后进行采样，将样品放入事先准备好的信封中。 扫土铲和填土信封在使用前必须灭菌。 培养基的制备：制备以尿素为唯一氮源的选择培养基。 应该在火焰的旁边摄取10g土壤。 在稀释土壤溶液的过程中，在一头地一头地火焰旁进行，分离不同的微生物采用不同的稀释度原因：不同的微生物在土壤中的含量不同的目的：保证菌落数在30300之间，得到适合订正数的平板，三个样品的稀释， 为什么分离不同的微生物采用不同的稀释度来测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能够分解尿素的细菌数量与

7、选择的稀释范围相同？ 原因：土壤中各种微生物的数量(单位：株/kg )不同。 例如，在干旱土土壤中的上层样品中，好氧及兼性厌氧性细菌数约为2 185万，放线菌数约为477万，霉菌数约为23.1万。 结论：为了得到不同种类的微生物，必须以不同的稀释度进行分离，同时还必须为选择培养提供性别条件。 取样涂抹、实验时请在培养皿上做上标记。 标明培养基的种类、培养时间、稀释度、培养物等。 另外，如果得到2个以上的菌落数为30300的平板，则表示稀释操作比较成功，可以进行菌落计数，如果相同稀释倍数的3个重复菌落数有很大不同，则表示实验不正确，需要再实验。 微生物的培养和观察在菌落修订数时，每24h修订一次

8、菌落数。 结果选择菌落数稳定时的记录，防止因培养时间不足而遗漏菌落数。 培养微生物常常需要不同的培养温度。 细菌： 3037培养12d放线菌： 2528培养57d霉菌： 2528的温度下培养34d。 微生物的培养和观察，3 .结果分析和评价1 .对照实验显示，如果培养物中有杂菌污染，则菌落数高的培养物混入其他的氮气源时，菌落的形态变得多种多样，菌落数变高，难以选择分解尿素的微生物。 2提示：选择各平板上有30300个菌落的稀释倍数，校正每克样品菌数最佳。 相同稀释倍数的3个重复菌落数不能有差异，差异大表明实验不准确。 四、在以操作提示、无菌操作、标记、修订时间、5 .课外延长尿素为唯一氮气源的

9、培养基中加入酚红指示剂。 培养了某种细菌后，PH值越高指示剂越红，表明可以分解尿素。 测定饮用水中大肠菌群数的方法是将一定体积的水用细菌过滤烟嘴过滤后，将过滤烟嘴膜放置在伊红美蓝培地进行培养，得到大肠菌群的菌落呈黑色，通过记述得到水样中的大肠菌群数。 大肠菌群呈黑色中心，有无金属光泽，大肠菌群以伊红美蓝琼脂(EMB )为典型特征，本课题知识总结为：6，例题分析，例1细菌群生长规律测定的正确表现为a向液体培养基接种至少一种b，即时补充和分析消耗的营养物质。这些个条件为细菌、一定容积的培养基，液体培养基、定时测定细菌总数。 在这些个条件下，才能测定细菌的生长规律。 测定时只能用一种细菌子细胞球群的

10、变化规律来表达微生物生长的一定容积为微生物提供一定的生存环境液体培养基可以从样品中推测细菌总数。 如果接种多种细菌，就会发生种间斗争，不能测定一种微生物的生长规律。 在接种时，必须确保一定的接种量。 答：在a、例2微生物群体生长规律的测定中，种内斗争最显着的时期是a调整期b指数期c稳定期d衰退期，解析：种内斗争是生态因素。 种内斗争反应了种内生物的生存空间和生活资源的争夺。 当生活空间充裕，营养在一盏茶时，种内斗争程度较低。 随着微生物个体数的增加，个体的生存空间越来越少，营养物质也越来越少，个体对生存空间和资源的争夺也越来越激烈，种内斗争也愈演愈烈。 由此可见，稳定期的种内斗争最为激烈。 衰

11、退期微生物的数量开始减少，pH极不适合微生物的生存，次级代谢产物积蓄到高水平，此时微生物的生存斗争主要是与无机环境的斗争。 答： c 1 .细菌群体生长规律测定的正确表达是() a .用液体培养基接种b .至少一种细菌c .接种细菌d .及时补充所消耗的营养物质2 .使用选择培养基的目的是() a .培养细菌b .培养真菌c .培养大量繁殖必要微生物d .表达某些微生物的必要碳源和氮源分别为() A.CO2、N2 B .葡萄糖、NH3 C.CO2、尿素d .葡萄糖和尿素，实践训练，a、c、d，4 .以下说法不正确的是a .将科学家从7080度热泉分离的M3作为该样品的菌落数的估计值c .设置对照实验的主要目的是排除实验组中的非实验要素对实验结果的影响，提高实验结果的可靠性d .土壤中的微生物数量与其他生物环境相比最多，种类最多5 .培养、分离酵母菌，淘汰杂菌，在培养基中添加() a .多氮源物质b .多碳源物质c .青霉素类药物d .高浓度食盐b，c，例3(2005年江苏)抗生素作为治疗细菌感染的药物，其高效率和巨大经济性中青霉素