细胞形态结构观察

1、第三章细胞形态结构观察技术，1，生物细胞观察及照片技术，1。反向显微镜：P60度应用3-3(提问光光使用主义):拍照时将观察物稍微远离焦点，照片会更加清晰。负片使用正片打印，对比度大。2.应用差异显微镜P62图3-4:增强活细胞与背部底部形成对照，有助于看清细胞的轮廓和细胞内的微小结构(如核、染色质、线粒体等)。结构特性：有两个茄子附加组件。也就是说，差分透镜：光学系统具有环形透镜差分电容器。内部有多个相位板。使用时与泡沫排水一致的技术：细胞培养瓶的质感均匀透明。建议使用塑料瓶。观察照片的时候，瓶壁要擦干净。光轴配合，照明也合适，摸索调节最佳，3。应用荧光显微镜P67图3-6:观察细胞内天然荧

2、光物质(如维生素、脂褐素、核黄素等)，同时观察可与荧光染料结合的细胞成分。结构特征：与普通光学镜面不同，高压通过照明，波长刺激荧光物质，产生荧光。过滤器不同。技巧：观察必须是经过自发荧光或荧光染色的标本。请选择效果最佳的过滤器。荧光标本容易褪色，不能长期保存，观察工作要迅速做好记录。仪器的高压汞灯光源启动后15分钟内关闭渡边杏，关闭后等冷却后才能重新启动。否则寿命会大大缩短，在长时间观察标本的时候要戴护目镜。(威廉莎士比亚，护目镜，护目镜，护目镜，护目镜，护目镜)，4。暗视野显微镜P64图3-5适用：观察活细胞或细胞器的运动轨迹，提高分辨率结构。只有集中装置不同于普通显微镜，安装了中央遮光板，

3、以防止光线直接照射。标本进入目镜，使标本散射光进入视觉镜技巧。水镜的数值孔径必须小于聚光器的数值孔径。清洁封面幻灯片、幻灯片时，不要有痕迹。在集中镜和幻灯片之间加入沥青，以确保效果。2 .显微摄影技术p68，1。概念：显微摄影技术是利用显微摄影设备拍摄显微镜视野物像的技术。2.技术类型：胶片相机数码相机相机CCD图像采集三种茄子字典操作一致，但成像和图像存储原理不同。3 .图像记录原理：胶片照相机照相机：在显微镜拍摄时，光线从标本碎片的小物体发射到物镜，然后制作倒置的放大实像，通过目镜进一步放大，然后投影到照片胶片上，使胶片感光，在显微镜视野下记录事物。数码相机相机：以数字格式将图像存储到电子

4、设备中。拍摄照片后，可以通过数据线将拍摄的图像传输到计算机，也可以取出相机的存储卡，通过读卡器将拍摄的图像传输到计算机。数码相机相机原理与CCD图像采集器相同。CCD图像传感器：更改复制设备(CCD)CCD的配置结构包括三个茄子级别。上图：电容器(光镜)中图：镶嵌式网络(分色网络)下图：铺在下面的电子线矩阵(外部添加电压)，牙齿电子和电泳将转移到徐璐其他极性的其他硅区域。电子的量与露点接收的光量成正比。图像最亮的部分可以积累10万电子。、CCD图像传感器外观、彩色CCD的组件映射、CCD的三层结构：上：光泽镜头、中：颜色块栅格下：传感线由微镜头、镶嵌分色栅格和底部电子线矩阵组成。4.拍摄技术阶

5、段：胶片照相机拍摄：p69-74(生物实验室以上委)数码照相机拍摄：p74-75(同一本书)CCD图像收集： (病理实验室姚海涛(实验中心柳军城)，5)。缩小时应用显微陈述的原则：缩小间隔时间：对象的实际活动时间X 1/24电影排队，放大镜时间=3600秒10秒x 124=15秒，因此每15秒摄取一张照片。3，光光下固定细胞观察法(造倍、病理)细胞机盘子内床上用品单层培养对盖细胞悬液离心沉淀固定染色观察照片(固定剂、染发剂知识介绍)固定剂的作用：渗透、固定、保形、防腐固定剂选择：P83，防腐固定剂本书P84 FeulgenDNA紫红色细胞质绿色。E P141橙色RNA红色，DNA亮绿色。牙齿书

6、P86小木精-李红(HE)细胞核蓝，细胞质红，本书P85过碘酸席夫细胞内党员细胞紫红色。肠P58苏丹红III细胞含有脂肪区橙色。张P59幽灵笔环肽丝染色。肠P59免疫荧光管染色。张P60联苯胺H2O2过氧化氢染色。小肠P37贾纳斯格林b活细胞线粒体。小肠P43，4，激光扫描共聚焦显微镜技术(实验中心)1。概念和原理P76 Laster Scanning Confocal Microscope LSCM激光共聚焦显微镜是20世纪80年代以来发展起来的细胞生物学和高分子材料科学领域的高科技分析仪器。在传统光学显微镜的基础上，使用激光作为光源，形成通过照明针孔照射荧光样品的点光源。生成的光斑将探测器

7、针孔作为轭接收在同一焦平面上。计算机控制显微镜的移动，允许在同一焦平面(x-y)上进行逐点扫描。计算机像点一样在电脑屏幕上形成图像。同时，可以沿Z轴逐渐改变焦平面，扫描样本厚度的多个方面，执行无损伤连续光学切片(例如CT断层扫描)，并通过电脑3D重建形成观察样本的3D结构图形。2 .LSCM的主要组成部分和工作原理激光光源：氢离子激光器，同时/顺序/输出紫外线和可见光照明针孔3360使激光通过照明针孔后形成点光源。物镜焦点平面：激光点光源照亮样品，刺激样品发射荧光，形成焦点光斑，焦点平面聚焦成像。探测器针孔：充当空间过滤器。阻止聚焦不准的平面散射和聚焦平面上聚焦不准的光斑散射。确保样本扩散的焦

8、点光斑和探测器针孔的成像光斑包含相同的信息。(两点共焦焦点)光电倍增：接受通过探测器针孔的光信号，将其转换为传记信号，然后传送到计算机。通过在屏幕上形成焦平面图形多荧光通道：可以同时对样品进行多个茄子荧光标记的信号检测电脑控制系统：控制阶段电动机使显微镜移动，可以逐点扫描相同的焦平面(x-y轴)。共聚焦系统控制；沿z轴更改焦平面以控制采样厚度的连续光学切片和采样结构的3D重建。控制信号的收集、传输、分析。，3 .LSCM相对光学显微镜的优点LSCM中的图像被记录为传记信号，使用电子电脑技术模拟数字处理，可以有效消除焦外信号干扰。除了提高x-y轴焦平面分辨率和清晰度外，还可以对观察样本执行Z轴无

9、损光学切片。将三维结构的位置图像与活细胞的形态、结构、定量、定量荧光探针技术相结合，可以进行单细胞分类和多种细胞分子生物学研究及细胞功能学研究。4.LSCM的应用贴纸细胞的分线数较多的细胞群的分线：在特殊Petri盘上的细胞群中进行荧光染色，其他种类的细胞群可以在不染色的情况下杀死高能激光荧光染色的细胞群，另一种保存可以继续培养。小体积或单克隆细胞分类：对于选定的突变细胞、杂交细胞或肿瘤转移细胞，可以利用带有特制膜的培养皿，在选定的细胞克隆周围进行八角形切割，然后用高能激光杀死八角形外的细胞。细胞形态学研究：可行的X-Y焦平面形态研究，特别是可行的工作Z轴3D形态结构研究。也可以描述细胞形状、周长、面积、平均荧光强度、细胞内溶酶体、线粒体、内质网、细胞骨架、结构性蛋白质形态、数量和位置。细胞内部分大分子组分析：结合免疫荧光技术和荧光探针技术，可以对细胞内蛋白质、DNA、RNA、酶、受体等组成部分进行定性定量定时位置分析，并对细胞内PH及细胞内部分离子进行分析。用于细胞功能学研究。细胞通讯研究。细胞功能学研究及细胞通讯研究细胞显微外科手术：可以在LSCM镜下使用激光作为光子刀进行细胞穿孔、染色体贞节、细胞机燃烧、神经