一组织培养——培养基的配置ppt课件

1、植物组织培养,第一节 培养基的配置,一、定 义,人工配制的 微生物或动植物细胞 生长繁殖或积累代谢产物 营养基质,二、培养基的组成成份,无机成分： 大量元素：氮： 铵态氮、硝态氮混合 磷： 磷酸盐 钾： 钾盐 钙、钠、镁、硫 微量元素：铁、硼、锰、锌、铜、钼、钴、氯 有机成分 糖、 维生素、肌醇、氨基酸及有机附加物。 植物生长调节物质： 生长素类：NAA、IAA、IBA、2,4-D 细胞分裂素类：6-BA, KT，TDZ，ZT 其他类： GA3, ABA， PP333 琼脂、明胶、硅胶等 水,I.大量元素（mg/L）,NH4NO3 1650 KNO3 1900 CaCl22H2O 440 Mg

2、SO4 . 7H2O 370,常用的MS培养基配方：,II.微量元素（mg/L）,MnSO4 4H2O 22.3 ZnSO4 7H2O 8.6 H3BO3 6.2 KCI 0.83 Na2MoO4 2H2O 0.25 CuSO4 5H2O 0.025,III.磷盐,KH2PO4 170 IV. 铁盐 Na2 EDTA 37.5 Fe SO4 7H2O 27.8,V.有机（mg/L）,甘氨酸 2.0 盐酸硫胺素 B1 0.1 盐酸吡哆醇 B6 0.5 烟酸 0.5 肌醇 100,附加成分 ( g/L ),蔗糖 30 琼脂 8.0 PH = 5.86.2,1、母液的配制（储备液的配制） 2、培养基

3、的配制,三、培养基的配制,1、储备液配制,一般母液浓度是实验需要浓度的10-200倍。 母液配制时可分别配成大量元素、微量元素、铁盐、有机物和激素类等。 把几种药品配在同一母液中时，要注意各种化合物的组合以及加入的前后顺序，应该把钙离子、锰离子、钡离子与硫酸根和磷酸根例子错开，以免发生沉淀。把每种试剂单独溶解后再加入后一种化合物。 铁盐必须单独配制。将FeSO4.7H2O水溶液缓慢加入到Na2.EDTA.2H2O微沸水溶液中，并不断搅拌，最后定容。 母液配好后放入冰箱内低温保存，用时按比例稀释。,注意事项,激素溶解方法 IAA、IBA、GA 溶于少量的95的酒精 加水定容； NAA 热水或少量

4、95的酒精 加水定容； 2，4-D 少量95%的酒精和1M的NaOH溶解 加水定容； KT和BA 溶于少量1M的HCI 加水定容； 玉米素 溶于少量95的酒精 加热水定容。,2、培养基的制备,取母液,调pH值,培养基熬制,灭菌,称取蔗糖、琼脂,扎口,加适量水,分 装,定 容,接种,确定配方,其他物质,定容,1）将培养液倒入铝锅中，同时加入称好的蔗糖和琼脂，边煮边搅拌，防止糊底。注意：火不要太大，防沸出。,2）用旺火煮开，再用文火加热，直至琼脂全部融化。,3）取出培养基，并初步定容。,培养基熬制及初步定容,调pH值及分装,1）用1M NaOH或HCl调pH值为5.8。 2）趁热分装，装瓶量一般为

5、瓶容量的1/31/2；装试管一般为试管高度的1/51/4。 3）避免琼脂粘在管口或瓶口上，最好用漏斗。本实验中，请借助玻璃棒引流。,要求封口松紧适宜，系活扣，便于接种操作。,扎口,本实验中先套封口膜，用橡皮筋扎好，然后再套上牛皮纸，用橡皮筋扎好。,培养基用湿热灭菌,1）首先取出灭菌桶，向锅内加入适量的水。 2）放回灭菌桶，装入待灭菌物品。 3）加盖，以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓。 4）水沸腾以排除锅内的冷空气。待冷空气完全排尽后，关上排气阀。 5）当锅内压力升到所需压力时，控制热源，维持压力至所需时间。本实验用0.1Mpa，121，20分钟灭菌。 6）灭菌所需时间到后，切断电源或关闭

6、煤气，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力降至0时，打开排气阀，旋松螺栓，打开盖子。 7）将取出的灭菌培养基放入37温箱培养24小时，经检查若无杂菌生长，即可待用。,培养基高压蒸汽灭菌所必需的最少时间,本节课任务,1、器皿消毒（1人/组）,每组包2对培养皿，其中1个培养皿装3张滤纸； 包扎2个100mL烧杯，2个250mL三角瓶，每瓶装100mL蒸馏水 包扎刀柄，弯嘴镊子； 写上各组标记； 交给陈老师，统一灭菌。,MS基本培养基的配制 大量元素 30.0mL 微量元素 3.0mL 铁盐 3.0mL 有机 3.0mL 电磁炉加热煮沸融化琼脂后，加水定容至582mL（用量筒）。 加不同激素浓度(0.5、1、2mg/L)MS培养基的配制 取200mL烧杯3个，分别吸取0.1mg/mL 2,4-D溶液 烧杯1: 2,4-D溶液1mL+MS基本培养基194mL 烧杯2: 2,4-D溶液2mL+MS基本培养基194mL 搅拌混匀 烧杯3: 2,4-D溶液4mL+MS基本培养基194mL 用NaOH调pH至5.8,再加水定容至200mL(用量筒)。 分装：50mL三角瓶，约20-30mL/瓶，盖上封口膜，用牛皮纸包扎。 灭菌：标上激素浓度和姓名，统一放置灭菌。 保存：灭菌后，每组带托盘取培养基