病毒检验技术.ppt

1、，微生物学检查，第17章病毒检查技术，内智妍上海健康职业技术学院，返回总目录，本章内容，学习目标和重点，学习目标：了解病毒标本收集和传递检查应遵循的原则病毒检查鉴定共同技术是熟悉病毒血清学诊断的常用方法理解病毒感染的实验室快速诊断学会病毒培养的基本操作本章重点：病毒标本收集和运输原则。病毒学诊断和感情共同方法。病毒培养的基本操作。第一节标本收集、处理和运输，1，标本收集和处理1。采集时间：发病初期或急性期尽快采集。2.采集部位：取决于临床症状和疑似感染。例如：流感病毒感染-郑智薰咽拭子日本脑炎病毒感染-脑脊液轮状病毒感染-粪便乙型肝炎病毒感染-血液3。收集方法及治疗改善病毒分离率、处理、采集时

2、无菌操作、放入抗生素，可以杀死杂菌。2.标本的运输和保存1。标本的运输，尽快冷冻，防止冷藏运输泄漏，专家，段宜恩2。标本的保存-70可以通过加入甘油或二甲基亚砜(DMSO)、汉克液、小牛血清等来预防病毒1。病毒的分离培养2。鸡胚胎培养，第二节病毒的分离和鉴定，第一次细胞培养二倍体细胞培养，羊膜腔接种尿囊接种卵黄囊接种，组织细胞培养，鸡胚胎培养，动物接种，1。组织细胞培养，鸡纤维细胞一般选择914d的鸡胚胎，来源充足，组织分化度低，本身很少携带病毒和细菌，对接种病毒不产生抗体，病毒容易增殖等2。胚胎培养，优点：第二节病毒的分离和鉴定，选择其他接种部位是病毒分离成功的关键，尿囊河接种，羊膜腔。第二

3、节病毒的分离和鉴定，第二节。鸡胚胎培养、尿囊河接种、羊膜腔接种、尿囊河、羊膜腔、羊膜腔、羊膜腔、常用接种途径：尿囊河接种、羊膜腔接种、卵黄囊接种、绒毛尿囊膜接种、流感病毒、流行性腮腺炎病毒、新城疫病毒的适应和传代培养，牛痘病毒，天花病毒，单纯疱疹病毒的分离，卵黄囊，2节病毒的分离和鉴定，3。动物接种，常用的实验动物包括老鼠、奶鼠、豚鼠、兔子、猴子、鸡等常用的接种途径包括避免、皮内和其他。2.病毒增殖的观察(1)病毒在细胞内增殖的鉴定指标1细胞形态的变化2红细胞吸附3细胞培养液pH值的变化(2)病毒数和病毒感染性测定1血细胞凝固实验2和实验3空腔形成实验4半感染量(ID50)和组织培养半感染量(

4、TCID50)，2节病毒的分离和鉴定2。病毒增殖观察(1)病毒在细胞内增殖的鉴定指标1细胞形态的变化(1)细胞病变效果(cytophathic effect，CPE)，双节病毒的分离和鉴定，正常细胞病变细胞，特定病毒，特别是无胞膜病毒感染组织细胞后，细胞积累为葡萄状，第2节感染的细胞融合成多核巨细胞，两节病毒的分离和鉴定，(3)包涵体，1细胞形态的变化一般是完整的病毒粒子或尚未组装的病毒婴儿聚集形成，这称为包涵体。2节病毒的分离和鉴定，2红细胞吸附3细胞培养液pH值的变化，2，病毒增殖的观察，病毒感染细胞后，可以改变细胞代谢，导致培养液pH值的变化。2节病毒的分离和鉴定，(2)病毒数量和病毒感

5、染性的测定，2，病毒增殖的观察，1血细胞凝固实验，病毒颗粒，红细胞，一些病毒(如流感病毒)表面的血凝块(HA)，可以凝聚人或某些哺乳动物的红细胞。血细胞聚集现象，双节病毒的分离和鉴定，红细胞完全聚集的病毒的最大稀释倍数为一个血凝单位(HAU)，4半衰盐量(ID50)和组织培养半衰盐量(TCID50)测定病毒感染鸡胚胎、动物或细胞后死亡或病变的至少50%。用于估计病毒感染的强弱，但不能准确测量感染性病毒颗粒的数量、肠的内容返回、双节病毒的分离和鉴定、三节病毒学检查和诊断。一、形态学检查和诊断1。光学显微镜检查：*更大的病毒体(如痤疮病毒)*包涵体狂犬病病毒感染-嗜酸细胞巨细胞病毒感染-“猫头鹰眼

6、睛”形状的嗜酸细胞包涵体，2 .电子显微镜检查：*透射电子显微镜用于观察病毒的大小、形态、结构、细胞内超微结构等。*电子显微镜检查：用于观察病毒和细菌表面结构和附属结构等。1、形态检查和诊断，电子显微镜检查，3节病毒学检查和诊断，3节病毒学检查和诊断，(1)超滤法超速离心法接种细胞快速增殖法免疫凝集法，(2)经常观察方法负染色法超薄切片法免疫电镜法，病毒颗粒有亮度，在周围的黑暗背景下亮点，过程类似于病理切片过程，免疫组织学检测病毒抗原：用荧光素、酶、胶体金等标记物标记病毒抗体，检测标本中相应的病毒抗原。例如ELISA检查HBsAg，第3节病毒学检查和诊断，2 .病毒抗体检查：已知的病毒抗原大部分是通过基因工程准备的重组抗原，其次是从患者标本中分离纯化的抗原。检查抗体类型，确定患者的感染阶段。急性期单血清的IgM测定是诊断原发性感染和早期感染。-IGG含量测定应采取患者急性期和恢复期双重血清。含量提高4倍以上表