钙、镁、磷的测定.ppt

1、Xi医学院血清钙、镁、磷的测定(1)血清钙、血浆钙的存在形式、血钙、扩散钙、非扩散钙、离子钙可溶性钙盐的测定，占血浆钙总量的60%，能穿透毛细血管壁并与血浆蛋白结合，占血浆钙总量的40%，但不能穿透毛细血管壁和血浆。总钙的测定方法包括同位素稀释质谱法、原子吸收光谱法、分光光度法和络合滴定法等。邻甲酚酞络合酮法(OCPC法)、甲基百里酚蓝比色法和偶氮胂比色法是分光光度法中最常用的方法。目前，临床上最常用的离子选择电极法测定离子钙。血清中总钙的测定邻甲酚酞络合酮比色法，Xi医学院实验室，硕士：OCPC法测定血清中总钙的基本原理和提高准确度的方法。熟悉：血清总钙测定的注意事项。为了了解总钙和离子钙之

2、间的关系，本实验的目的是，邻甲酚酞络合铜是一种金属络合染料和酸碱指示剂，它在碱性条件下与钙络合形成紫红色络合物。在600纳米处有特征吸收。8-羟基喹啉用于消除样品中镁离子的干扰，通过与相同的处理过的钙标准溶液进行比较，可以测定渗钙含量。原理、试剂和设备。R1:乙醇胺缓冲液。2.R2: OCPC，8-羟基喹啉3。氯化钙标准溶液：2.50摩尔/升工作溶液：将R1和R2等量混合，得到工作溶液。4.分光光度计，操作步骤，取3个试管，并按照下表操作。添加剂(毫升)空白管标准管测量管工作液3.0 3.0 3.0蒸馏水0.06标准物质0.06血清0.06、充分混合，37水浴5分钟，波长600纳米，用空白管调

3、零，读取吸光度值。计算、参考范围：2 . 032 . 54摩尔/升，用血清或肝素抗凝血浆；钙螯合剂和草酸盐不能用作抗凝剂；胆红素可产生负干扰，可通过血清控制消除。镁离子也能与OCPC试剂产生紫红色络合物，因此，在试剂中加入8-羟基喹啉起到络合镁离子的作用，消除镁离子的干扰。注：酸碱度对OCPC试剂的显色有很大影响。当酸碱度为10.512时，反应的灵敏度最好，所以最好选择11.0。这种方法对钙离子有很高的灵敏度，测量容器应干净，所有试剂应存放在聚乙烯瓶中。最好使用高质量的去离子水或蒸馏水来制备试剂。临床意义：高钙血症常见于以下疾病：甲状旁腺功能亢进、代谢性酸中毒、维生素D增加、多发性骨髓瘤、恶性

4、肿瘤等。低钙血症见于以下疾病：甲状旁腺功能减退、慢性肾炎、尿毒症、佝偻病和佝偻病、大量输入枸橼酸抗凝等。(2)血清镁的测定镁是人体内的第四种金属元素，其中50%以磷酸盐、碳酸盐和氟化物的形式存在于骨骼中，45%存在于细胞内液中，只有5%存在于细胞外液中。血清中55%的镁是离子型的，15%与磷酸盐和柠檬酸盐形成络合物，30%与蛋白质结合。镁测定的参考方法是原子吸收分光光度法，国内外大多数实验室使用金属显色染料进行直接显色和比色分析，其中甲基百里酚蓝和钙镁石广泛用于镁的自动分析或手工操作。Xi医科大学检验系，钙镁比色法测定血清镁，掌握钙镁比色法测定血清镁的基本原理。熟悉：相关试剂在反应中的作用。了

5、解：该方法过程中的注意事项及血镁检测的临床意义。为了实验的目的，在碱性环境中，血清中的镁与钙基染料形成紫红色络合物，其颜色与镁的浓度成正比。与相同的处理标准相比原理、试剂和设备，1R1:氢氧化钾、表面活性剂。2.R2:卡尔马吉特，EGTA 3。氯化镁标准溶液：1.0摩尔/升工作溶液：取R1和R2，混合均匀，得工作溶液。4.分光光度计，操作步骤，取3个试管，并按照下表操作。添加剂(毫升)空白管标准管测量管工作液3.03.03蒸馏水0.03标准物质0.03血清0.03、充分混合，在室温下放置3分钟，波长为546nm，用空白管调零，并读取吸光度值。计算，参考范围：0.71.2毫摩尔/升。溶血样品对该

6、测定有明显的正干扰；血脂样本应在测定前脱脂。2.试剂应储存在塑料瓶中。如果显影剂褪色，就不能使用。3.防止污染的试剂，如自来水和器具清洗不干净，试剂交叉污染等。4.溶液中的EGTA可以消除钙的干扰；表面活性剂可以消除蛋白质的干扰。5.适用于手动操作和大多数自动分析仪。注意事项、临床意义、血清镁增加：过度使用治疗剂、肾脏疾病、内分泌疾病(甲状腺功能减退等)。)、多发性骨髓瘤等。血清镁减少：镁摄入量减少、消化道镁损失、泌尿道镁损失、内分泌疾病(甲状腺机能亢进、醛固酮增多症等)。)，等等。Xi医学院实验科学系，(3)血清磷的测定。血清中无机磷主要包括两种磷酸根阴离子：H2PO4-和HPO42-。无机

7、磷酸盐的分子量不能精确地表示，因为这两种阴离子在不同的酸碱度环境下可以迅速相互转化。目前常用的无机磷测定方法包括磷钼酸还原法、染料结合法、紫外分光光度法、黄嘌呤氧化酶比色法、同位素吸收质谱法和原子吸收分光光度法。相关知识，磷测定的测定方法是同位素稀释质谱法。比色法是世界贸易组织推荐的常用方法。目前，国内推荐的常规方法是以硫酸亚铁或米吐尔(对甲氨基苯酚硫酸盐)为还原剂的还原钼蓝比色法。还原钼蓝法测定血清磷，Xi医学院教研室，掌握还原钼蓝法测定血清磷的基本原理。熟悉：血清磷测定的临床意义：本方法检测过程中的注意事项，实验目的，在酸性溶液中，磷与钼酸铵反应生成磷钼酸络合物，硫酸对氨基苯酚甲酯(米吐尔

8、)还原生成钼蓝，可与同等处理的标准溶液进行比较，得出血磷含量。原理、试剂和设备、1磷工作液：钼酸铵溶液、米吐尔溶液。2.磷标准溶液：磷酸二氢钾1.29摩尔/升3。分光光度计，操作步骤，取3个试管，按照下表操作。添加剂(毫升)空白管标准管测量管工作液4.0 4.0蒸馏水0.1标准物质0.1血清0.1、充分混合，37水浴5分钟，波长650纳米，用空白管调零，读取吸光度值。计算、参考范围：成人为0.971.62毫摩尔/升，儿童为1.452.10毫摩尔/升。1.血样应使用血清或肝素抗凝血浆。应避免使用柠檬酸钠、乙二胺四乙酸和草酸盐作为抗凝剂。2.标本应避免溶血，因为红细胞含有高浓度的有机磷酯，在储存过程中容易水解形成无机磷。3.米吐尔试剂应少量配置，储存时间不应过长。4.血清中的磷是稳定的，4可稳定数天，冷冻时可稳定数月。避免水分蒸发，注意事项，临床意义，血清磷增加：肾小