非小细胞肺癌基因检测

1、非小细胞肺癌基因检测肿瘤2和有理州、西门、分子医学取得进展，靶药继续出现，晚期非小细胞肺癌(NSCLC)治疗进入了个人化治疗的时代。目前林爽应用的个体化靶标治疗主要针对EGFR突变型和ALK融合基因型肺癌，牙齿两种基因变异型肺癌均具有明确的分子靶标、靶标检测技术和上市靶标药物，林爽疗效显著提高。EGFR突变检测需要一些明确的茄子基本概念。2、基因突变意味着DNA的核酸序列变化。应选择郑智薰DNA的检查手段，如RT-PCR(检查RNA表达)、免疫化(检查蛋白表达)和非鼻炎序列的检查手段。1，EGFR突变转化为体细胞突变：发生在肿瘤细胞中，正常细胞(癌旁或白细胞等)不包括突变。要尽可能多的取肿瘤细

2、胞进行检查，这是检查结果可靠的根本前提。EGFR基因突变检测概念，EGFR突变检测不是在肿瘤组织中编码EGFR基因的DNA突变状态检测。EGFR基因DNA拷贝数检测(FISH法)EGFR蛋白质表达量检测(IHC法)。X，Nature Review 2007，73360169，NSCLC中的EGFR酪氨酸激酶区域突变种类，标本收集和病理评价，DNA提取提及品质管制，检验报告，EGFR突变检查，ARMS，测序方法内径医生，石蜡切片：肿瘤细胞越多越好(超过50%)。组织部位面积约为6mm x 6mm以上。嵌入式组织：组织块必须等于或大于0.50.50.5(cm)。新鲜组织：与石蜡等处理过的旧组织相比

3、，DNA保存得更完整，对PCR实验更有利，但需要经过病理学确认。含有超过50%的肿瘤组织。重量10g(约米粒大小以上)用PBS或生理盐水洗干净。取癌组织中心位置组织块(避免坏死区)，固定在10%中性福尔马林溶液中，尽快送去病理科。细胞学标本：原发病灶和复发，只要能得到足够的癌细胞就行。但是，对于复发的患者，不仅可以确诊活体检查，还可以获得有关分子标记物的其他信息。样本因素对EGFR突变检查的影响肿瘤组织特征遗传异质性，对检测方法的敏感度高的要求，样本因素对EGFR突变检查的影响组织样本种类检查方法的要求，组织样本和DNA质量管理尤为重要。图4 .用EGFR基因A. 10微米切割的石蜡包埋标本。

4、b .在支气管镜下的生理盐水中放入粉刷检查样本，洗净(漂浮)。可以这样冷冻保管。c .进一步离心牙齿生理盐水液，沉淀在AL缓冲液中，可以在室温下保存。(大卫亚设，美国电视电视剧)肿瘤组织标本收集和病理评价，肿瘤组织标本，病理评价，组织切片，非细胞性肺癌诊断和类型肿瘤细胞比例肿瘤细胞总数识别肿瘤丰富的区域富集肿瘤细胞，HE染色片病理评价白片提取DNA推荐的最小切片数：-手术标本，5MX4-小活检标本，5 m X8组织标本来源手术标本支气管活检目前，EGFR基因突变检测方法很多DNA直接测序方法被广泛应用，可以检测已知突变和未知突变，但标本的肿瘤细胞含量比较高，一般标本的肿瘤细胞比例应该在50%以

5、上。 基于实时荧光定量PCR的方法(如ARMS方法)比直接测序方法敏感，能检测样本中1.0%0.1%的突变基因，更适合于肿瘤细胞含量小的样本检查。ARMS方法操作简单，是目前临床上比较常用的方法之一，但只能检测已知的突变，标本需要字典处理，检查费用更高。直接排序过程和资料分析，PCR*，纯化，排序反应，测序器毛细管传记电泳，纯化，资料分析，EGFR deletion，EGFR L858R，传记电泳品质管制，是重要的非肿瘤组织标本的有效利用。外周血cfDNA、胸水、细针穿刺等细胞学标本均可用于检测EGFR突变，但需要进一步探讨正确的敏感度和特异性。应选择充分敏感的方法，EGFR刺激酶抑制剂的耐药

6、性，牙齿中50%的患者缺失或L858R等敏感突变为基础，发生了从790位密码子色氨酸(T790M)到蛋氨酸(T790M)的突变。在EGFR-TKI治疗之前，T790M(13 )牙齿很少，在牙齿情况下，TKI没有效果。另外，50%的患者中，约有一半的耐药性是由MET基因扩增引起的，出现EGFR-TKI耐药性时，可以进行基因检查，选择与耐药机制对应的治疗方法。也就是说，在一个患者的各种林爽情况下，了解有关EGFR和相关基因的信息，以便进一步改善林爽疗效。建议EGFR刺激酶抑制剂内药处理原则，对进展缓慢的患者继续使用原来的EGFR-TKI治疗或EGFR-TKI联合化疗。对于快速发展的患者，建议禁用E

7、GFR-TKI，改用化疗。局部进行，原病灶控制良好的患者，建议继续使用EGFR-TKI，并同时使用局部补牙费。EGFR酶抑制剂耐药研究进展，第一代EGFR抑制剂Gefitinib(eresa，Iressa)和Erlotinib(troke，Tarceva)在临床上的广泛应用，耐药问题日益突出。其中EGFR-T790M突变约占林爽耐药患者的60%以上。第二代EGFR抑制剂afat inib(apatinib)。2013年九月FDA批准上市，2014年1月在第三期临床研究中以失败告终。Afatinib在体外对EGFR-T790M突变有活性，但临床上仍未克服T790M突变所产生的耐药性。第三代EGF

8、R抑制剂。海外多家制药公司和研究机构正在对T790M突变进行小分子抑制剂研究，包括克洛维肿瘤公司的CO-1686和阿斯利康的AZD9291，但是还没有推出针对牙齿突变的药物。，ALK融合基因是新发现的NSCLC驱动基因，其中可见动物微管相关蛋白4(EML4)基因和肝变性淋巴瘤激酶(ALK)的融合(EML4-ALK)牙齿是最常见的类型。ALK融合基因主要发生在不吸烟或少吸烟的肺腺癌患者身上，通常与EGFR基因突变不同，存在于同一患者身上。NSCLC患者中ALK融合基因的发生率约为5%，在没有EGFR、KRAS、HER2、TP53等基因突变的NSCLC患者中，ALK融合基因阳性率达25%。我国EG

9、FR和KRAS都是野生型腺癌患者中ALK融合基因的阳性率达30B%。病理形态学研究表明，在包含接管细胞的粘液型或室性腺癌中，ALK发生率为其他类型肺腺癌(46.2%比8%)的ALK阳性NSCLC只有总NSCLC的5%，但每年新的发病数在中国仍接近30，000例。目前正在检测ALK融合基因的概念。FISH仍是确定ALK融合基因的标准方法，但价格昂贵，操作规范高，不适用于ALK阳性患者的检查。实时荧光定量PCR操作简单，灵敏度高，但需要特定的试剂盒和仪器。IHC简单、便宜，操作方法成熟。VentanaALK融合蛋白IHC诊断工具包在不影响特异性的情况下进一步提高了灵敏度，与FISH结果的匹配率为98.8%，重复性为99.7%，经CFDA批准诊断NSCLC阳性患者。ALK融合基因检测方法，ALK融合基因阳性目标药物，针对ALK目标的小分子抑制剂克里佐蒂尼(Crizotinib)是ATP竞争酪氨酸刺激剂抑制剂，可以以特异性目标抑制ALK激酶，或抑制c-MET、ROS1等信号途径。林爽实验表明，在ALK阳性晚期NSCLC患者中，克萨提尼的疗效明显优于传统化疗，双线单药治疗患者的中位PFS为7.7个月，效率达65.3%。基于良好的疗效和耐药性，2013年初，中国食品医药监督管理总局(CFDA)批准了ALK融合阳性的局部末期或转移性NSCLC患者的一般不良反应(发生