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文档简介
1、第37讲克隆技术考试标准知识含量附加测试要求第二,克隆技术1.植物克隆2.动物克隆ba在试验中心1克隆一株植物1.植物组织培养(1)理论基础:植物细胞的全能性。(2)程序:制备半固体培养基切割小组织块获得愈伤组织再生新植株。2.植物细胞培养和器官培养的措施它由平衡的植物激素比例调节。(1)适当比例的激动素和细胞分裂素可以诱导芽分化。(2)适量的吲哚乙酸和其他激素能诱导生根。3.原生质体培养与植物细胞工程(1)原生质体获得方法:在0.5 0.6摩尔/升甘露醇溶液环境(高渗透压)下,用纤维素酶和果胶酶的混合溶液处理根尖、叶片、愈伤组织或悬浮培养细胞,去除细胞壁,获得球形原生质体。(2)植物细胞工程
2、的操作流程具有外源遗传物质的转基因细胞的新植株(3)细胞产品的工业化生产:生产一些重要的细胞次生代谢产物(如一些中药)。诊断和思考1.判断下列陈述是对还是错(1)可以诱导棉花根尖细胞形成幼苗,反映细胞全能性()(2)植物的每个细胞都可以在体内和体外显示细胞的全能性()(3)在诱导菊花茎段形成试管苗的过程中,不会发生细胞增殖和分化()(4)愈伤组织是由外植体的去分化和再分化形成的()(5)用纤维素酶和果胶酶水解获得的植物原生质体失去其全能性()2.改善植物组织、细胞、器官培养和原生质体培养之间的关系3.改进植物细胞工程的操作流程图主题群植物的组织培养和克隆技术的应用1.以下关于植物克隆的叙述是错
3、误的()A.单倍体可以通过离体花药培养获得B.器官发生可以通过平衡植物激素种类来实现C.中药成分如人参皂苷可以通过细胞培养产生d .诱变、培养和筛选植物愈伤组织,获得新品种回答乙据分析,器官发生和形态发生可以通过平衡植物激素来调节。2.下图显示了植物组织培养的过程。根据图分析,下列说法是正确的()A.植物根尖细胞的全能性强于植物根尖细胞B.试管培养基含有植物生长调节剂,不含有机物C.试管中的细胞具有细胞质丰富、细胞核大、空泡多的特点D.可以通过调节培养基中植物生长调节剂的比例来诱导不同的植物器官答案D分析因为是由上的组织形成的个体,两者的全能性应该是相同的,而A是错误的;在从到的过程中,植物细
4、胞不能进行光合作用,所以试管中含有蔗糖等有机物,所以B是错误的;试管中的细胞是小液泡的愈伤组织细胞,所以C是错误的。无所不能的,体现(实现)无所不能的(1)全能性:理论上,活细胞是全能性的。(2)体现全能性:只有发展成为完整的个体,才能实现细胞的全能性。在测试中心2克隆动物1.动物细胞和组织培养(1)动物克隆的技术基础是动物细胞和组织培养。(2)动物细胞培养过程:动物细胞培养包括三个阶段:切割组织块、分散组织细胞和细胞培养。机械消化和胰酶消化通常用于分散组织细胞。(3)初级文化和亚文化的含义原代培养:从体内取出后立即进行细胞和组织培养的过程。传代培养:将原代培养的细胞分成几部分,接种到几部分培
5、养基中,使其能够继续生长和增殖。(4)动物成纤维细胞的培养过程:组织切片胰蛋白酶酶解原代培养传代培养。2.细胞系和细胞株(1)细胞系类型:连续细胞系(恶性细胞系:同种异体致瘤性;永生细胞系:保持接触抑制现象,不致癌)和有限细胞系。(2)细胞株:通过某种选择或纯化方法从原代培养物或细胞系中获得的具有特殊性质的细胞。它可以分为连续细胞系和有限细胞系。3.克隆培养法(1)概念:将单个细胞从群体中分离出来,并分别培养,使其繁殖成新的细胞群体的技术。(2)基本要求:必须确认克隆来自单个细胞。(3)提高细胞克隆形成率的措施如下:(1)选择合适的培养基;加入血清;用滋养层支持生长;激素刺激;使用CO2培养箱
6、;调节酸碱度.4.动物细胞融合技术及其应用(1)细胞融合概念:指在一定条件下,将两个或多个动物细胞融合成一个细胞的过程。原理:细胞膜流动性。诱导融合的方法A.物理方法和化学方法:电激发法、聚乙二醇等。生物方法:灭活病毒(如仙台病毒)。(2)细胞杂交概念:不同基因型细胞间的融合是细胞杂交。过程应用:由于染色体在细胞杂交中容易丢失,基因定位可以通过检测特定染色体丢失与杂交细胞特定基因产物(蛋白)减少之间的对应关系来进行。(3)杂交瘤技术及单克隆抗体制备工艺(1)根据上图改进以下流程:为什么选择B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合?答:选择B淋巴细胞:如果采用单个B淋巴细胞进行无性繁殖形成一个细胞群,这样的细
7、胞群可以产生化学性质单一、特异性强的抗体。b .选择骨髓瘤细胞:在体外培养条件下,肿瘤细胞(如骨髓瘤细胞)具有无限增殖的特点。5.动物的克隆和繁殖(1)动物细胞全能性的表达程度受精卵是全能的。多能细胞只有分化成各种组织细胞的潜力。单基因细胞只能分化为一种细胞。高分化细胞不再分化为其他细胞。(2)动物难以克隆的根本原因在动物个体发育过程中,细胞分化导致细胞中基因的差异表达,细胞基因组中基因的活性非常不完全。(3)核移植实验和动物克隆与繁殖核移植:用一个细胞的细胞核代替另一个细胞的细胞核,形成一个重建的“合子”。动物的克隆和繁殖诊断和思考1.判断下列陈述是对还是错(1)连续细胞系的大多数细胞具有二
8、倍体核型()(2)制备肝细胞悬液时,首先用剪刀切割肝组织,然后用胃蛋白酶处理()(3)在肝细胞培养过程中,通常向培养基中引入5%的CO2以刺激细胞呼吸()(4)与克隆羊等哺乳动物相关的技术包括胚胎移植、细胞培养和核移植()(5)植物原生质体融合和动物细胞融合的原理相同()(6)在体内培养杂交瘤细胞,以获得能够产生单克隆抗体的胚胎()2.比较细胞系和细胞系的列表方法类型来源特征克隆有限细胞系通常通过二倍体细胞的传代培养来建立接触抑制;无法持续培养连续细胞系通过传代细胞的连续培养构建发生了转化,且大多数具有非整倍体核型。有些具有同种异体致瘤性;有些是不朽的,但不是致癌的细胞系有限细胞应变通过某些选
9、择或纯化方法从原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质的细胞通道数量有限一般来说,它具有恒定的核型、同工酶类型、病毒敏感性和生化特性连续细胞系它可以连续传递多次3.在动物细胞培养过程中,也有必要分散动物细胞,这类似于观察植物细胞在有丝分裂中的解离。这两种治疗方法的最大区别是什么?在动物细胞培养过程中,动物细胞经处理后仍保持活性。然而,在植物细胞的解离过程中,细胞被解离液杀死并失去活性。4.通过动物体细胞核移植获得的克隆动物的遗传物质与供体细胞的遗传物质完全相同吗?提示并不完全一样。核遗传物质是相同的,但是细胞质遗传物质几乎与提供去核卵的个体相同(在分析遗传物质的来源时,我们必须注意核遗传物质和细胞
10、质遗传物质之间的区别)。动物细胞培养分析、单克隆抗体制备及动物克隆和繁殖过程1.以下关于动物细胞培养的说法是正确的()A.大多数连续细胞系的细胞具有二倍体核型B.在适当的条件下,一些癌细胞可以转化为正常细胞通过培养多个祖细胞形成的细胞群是克隆没有克隆培养的细胞系的细胞具有相同的特征回答乙连续细胞系的大多数细胞具有非整倍体核型;癌细胞仍可逆转为正常细胞,如小鼠致畸癌细胞可分化为各种正常体细胞;普通祖细胞培养形成的细胞群为克隆;未经克隆培养的细胞系是异质的。2.以下对制备单克隆抗体过程示意图的描述不正确()A.表示免疫的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞是从小鼠脾脏中提取的B.促进细胞融合的方法可由聚乙二醇介
11、导中的筛选是通过抗原抗体反应进行的D.可以无限增殖回答一免疫B淋巴细胞可从小鼠脾脏或血浆中提取,骨髓瘤细胞可从小鼠骨髓中提取。单克隆抗体是用免疫的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合形成的杂交瘤细胞获得的,融合方法可以是化学法聚乙二醇、生物法灭活病毒等。如果我们想筛选能产生特异性抗体的细胞群,我们可以检测抗原抗体反应,如果有反应,就意味着抗体产生了。融合细胞具有亲本的特征,不仅可以无限增殖,还可以产生单个抗体。3.这张照片显示了哺乳动物的生殖过程。其中b是卵细胞,c是体细胞。以下陈述不正确()A.动物 的形成过程分别属于有性生殖和无性生殖B.基因突变、基因重组等。可能发生在生产动物的过程中C.动物的产生表明动物细胞核是全能的D.在甲、乙、丙细胞的形成过程中,只有丙细胞是有丝分裂的回答乙分析动物由受精形成,属于有性生殖,动物通过核移植技术的形成和利用原理是动物细胞核具有全能性,动物的形成过程属于无性繁殖,A和C是正确的;a细胞和B细胞分别由精原细胞和卵原细胞减数分裂形成,C细胞是体细胞,由有丝分裂形成,D细胞是正确的。在生产动物的过程中没有基因重组,所以B是错误的。单克隆抗体制备中几个问题的分析(1)对动物免疫的原因:B淋巴细胞必须经历一个免疫过程,即与抗原接触,增殖并分化为具有特定免疫功能的B淋巴细胞,然后才能产生相应的抗体。因此,与骨髓瘤细
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