开题---汤晓娟,蜂王浆中氟喹诺酮类抗生素的脱除技术.ppt

1、开题报告蜂王浆中氟喹诺酮类抗生素脱除工艺的研究,姓名:汤晓娟 专业：生物工程 指导教师：何荣军 时间:2008.12.10,一.课题研究背景和意义,1.1 课题研究背景： 蜂王浆有增强免疫力、防癌抗癌、抗衰防老、健脑益智、促进生长发育、抗菌消炎、抗辐射、促进组织再生、增强造血功能、调节血压、防止动脉硬化、保护肝脏、催眠、强化性功能以及美容润肤等多方面作用。 其中，尤其值得一提的是在抗衰防老、延年益寿方面的良好作用。,吸收好 组织浓度高 氟喹诺酮类 抗生素的特点 抗菌谱广 与其他抗菌药物无交叉 耐药性,1.2 课题研究的意义：,蜂王浆里含有氟喹诺酮类抗生素，氟喹诺酮类残留除了其副作用直接危害人类

2、外, 更严重的问题是食品中残留低浓度的药物可能使人的致病菌产生耐药性, 从而使氟喹诺酮类药物对人类疾病的疗效降低甚至失效,同时使新开发的氟喹诺酮类药品的市场周期大大缩短。 据相关报道所知，我国某些蜂王浆产品抗生素含量有超标现象,从而导致产品频遭退货，严重影响了蜂王浆的出口。因此, 脱除氟喹诺酮类抗生素是非常重要的！,二.研究内容 分别采用溶剂法和离子交换法脱除蜂王浆中氟喹诺酮类抗生素（主要指诺氟沙星、氧氟沙星、环丙沙星和恩诺沙星）； 评价两种方法对蜂王浆有效成分含量的影响； 研究脱除部分中有效成分的回收利用。,三.研究材料、方法和手段： 3.1 研究材料 3.1.1原料:蜂王浆 3.1.2试剂

3、: 乙酸乙酯、氢氧化钠溶液(0.1 mol/L)、乙醇、盐酸、羟基苯甲酸甲酯、考马斯亮兰溶液、磷酸盐缓冲溶液 3.1.3仪器： 台式离心机、离心机、紫外可见分光光度计、 液相色谱仪、减压干燥箱分、析天平、酸度计(pH值精度为0.1)、滴定管10ml、坩埚、干燥器、液相色谱仪,3.2 研究方法和手段：,抗生素的脱除的方法：溶剂法、离子交换法 抗生素测定方法：液相色谱法 有效成分含量的测定：脂肪和癸烯酸 脂肪的测定方法：凯氏定氮法（测绝对值） 考马斯亮蓝法（测相对值） 癸烯酸的测定方法：液相色谱法,3.3.2 抗生素的脱除,溶剂法（乙酸乙酯） 加萃取剂,蜂王浆,混匀充分震荡提取,萃余液,回收有效成

4、分,萃取液,合并,冷冻干燥得产品,离子交换法 用阴阳离子交换双柱脱除氟喹诺酮类抗生素 洗脱,蜂王浆加水稀释,依次用阴阳离子双柱 （拟采用膨胀床层析法）吸附,收集未吸附组分,冷冻干燥得产品,分级洗脱,分部收集,收集已吸附组分,3.4氟喹诺酮类抗生素含量的测定,液相色谱法测定氟喹诺酮类抗生素的含量 取样（调PH到2） 净化 (阳离子交换柱净化 , HLB固相萃取柱净化 ) 进样 空白实验,3.5 蛋白质的相对值的检测,考马斯亮兰法检测蛋白质的相对值 1.作标准曲线 取试管6支，编号16，按表顺序加入各试剂， 并于595nm处测定A值。 2.冰箱取出考马斯亮兰溶液，平衡至室温并混匀； 预热分光光度计

5、20分钟,3.备九支管，分别编号，按下列顺序加样。,3.6 癸烯酸含量测定,液相色谱法测10-羟基-癸烯酸的含量 样品配制 试样解冻至室温，用玻璃棒充分搅匀，称取0.5g样品，准确至0.0002g，加2mol/L盐酸溶液，搅匀，加7ml乙醇搅匀，移入50ml容量瓶中，加25ml乙醇，加10.0ml内标溶液（羟基苯甲酸甲酯溶液）用乙醇定容，立即在超声波浴上混合15min或在漩涡混匀器上混合15min，取出，在3000r/min离心10min或放置冰箱中过夜等测定。,条件 a）检测波长：210nm b）柱箱温度：40 c）流动相流速：1ml/min 标准曲线绘制 精确移取0.5，1.0，2.0，3

6、.0，4.0和5.0ml 10-HAD标准溶液至10ml容量瓶中，加2.0ml内标溶液，用无水乙醇溶液定容，分别进样2l，用峰面积比值计算，应呈线性，求出校正因子F。 样品测定 每个样品进样2L4L,结果计算 X=F（AiAs）(msmi)100 式中：X-10-羟基-癸烯酸含量，%； F-校正因子 As-试样中内标峰面积； Ai-试样中被测组分峰面积； ms-内标质量，g； mi-试样质量，g。,3.7其他含量测定,水分含量测定 水分干燥法测定 酸度测定 用酸碱滴定法测定酸度 灰分测定 用灼烧重量法测定,四.研究进度安排 08年11月25日-09年3月1日: 查阅各种文献资料，完成题录、摘文翻译、 文献综述及 开题报告。 3月2日-5月1日 完成对蜂王浆中氟喹诺酮类抗生素