ⅠCDH1基因转录调控区基因多态性与膀胱移行细胞癌的关系研究Ⅱ后腹腔镜包膜下肾切除术治疗感染性无功能肾的临床研究.doc

1、 华中科技大学博士学位论文.CDH1基因转录调控区基因多态性与膀胱移行细胞癌的关系研究;.后腹腔镜包膜下肾切除术治疗感染性无功能肾的临床研究姓名：马鑫申请学位级别：博士专业：泌尿外科指导教师：张旭20060401 缺失缺失纯合子插入重复插入杂合子连锁不平衡 华中科技大学同济医学院， 兰主型垫盔兰旦堕堕兰堕 华中科技大学同济医学院前言材料和方法一、实验组设置和血标本提取用，琈从外周血液在沉淀的白细胞层上。 些主型垫查兰旦堕垦兰堕堡兰竺茎兰兰鱼苎见沉淀，则孵育至完全溶解。层。葬，轻轻 瓺提取匀，吸取上层溶液移至另一离心管。加等体积氯仿异戊醇，充分混痩，加水至疞 将冰冻抗凝全血置水浴解冻。 崛幕蜃镈

2、完整性检测瓽一上海生物工程公司合成籔反应条 华中科技大学同济医学院四、统计方法。正态分部计量资料其他二种方法比较，稻钜煊型臣蒲庖。 以提取的D澹鯬预试验，镄蠩镜琼脂糖 华中科技大学同济医学院程。哂懈叨鹊奶匾煨院兔舾卸龋远蕴崛腄纯度有较高要求，因为：、为保证分离核酸的完整性和纯度，在实验中应注意： 参考文献甆，甁华器官移植杂志，】，毯晡埃福涸椋艄剑闹治咳狣提取方法的比较中国医学工逗傧糜谰玻锔桑龋闹秩;蜃镈提取方法的比较中国动脉硬 ，甊分析每例样本基因启动子近侧序列处疉与仅携带任换蛘呦啾龋珹等位基因携带者】基因型患 关键词上皮钙粘连素；单核苷酸多态性；膀胱移行细胞癌 华中科技大学同济医学院前言细胞

3、的局部浸润、离开原发灶和发生远处转移的前提是细胞间连接功能的暂时性或永久性丧失：钙粘连素表达缺失和或功能异常可导致细胞极性消失和正常组织结构紊乱，因此，钙粘连素是一种抑癌因子口”。去分化和细胞侵袭性加强有关；将的转染入表达缺失的细胞株中，发现可抑制侵袭行为，提示为一种抑癌因素在膀胱移行细胞癌中表达下调的机制不明。多数作者观察到表达下调与表达下调的原因有诸多推测，包括基因突变、甲基化修饰、转录过程和转录后过程的抑制等，但都不能单独证明与和 表达下调的因果关系表达下调是一致的，而引起 华中科技大学同济医学院胱移行细胞癌高危人群剔除。冻存的外周静脉血解冻至室温，取煜赴呀庖海狤芑煸群呼育分钟。在孵育过

4、程中至少再翻转一次。 鞍壮恋硪海缌艺竦充异丙醇的片层。移除上清，倒置管用吸水纸尽量吸尽残液；加入离心，小心地倒去乙醇，翻转管，用吸水纸尽量吸尽残瓺溶解溶解液，孵育薄壬舛崛褐蠨浓度。序列见表进行反应体系见表。 兰主型垫查兰旦鲨垦兰堕表甈中锖虲引物序列引物名称一一表甈反应体系体积籶，。 图5任换蛟雍献覲分析结果锞璈蟮牟铮珹渲型和图， 。选择卡方检验和， 兰主型垫查兰旦堕堕兰堕实验组例膀胱移行细胞癌样本任换蚱德高于例对照组瑇”煅椋瑇煅閤任换蚱德高于浅表性膀胱移行细胞癌瑇钜煊邢灾砸庖澹崾局琢龅慕笊疃扔階等位基因频率呈正向 表浅表性膀胱移行细胞癌与浸润性膀胱移行细胞癌上皮钙粘连素煅椋琗 四、亦升高，但无

5、统计学差异尚徘。而基因型患法计算值和徘 华中科技大学同济医学院记。，全长 瘤组织的表达下调与表达下调是一致的。状态发现基因表达的缺失、和，可信区间为砻鰿蚱舳咏嘈蛄校疉 之间可能并不是确定的因果关系，正如峙旨出，除了遗传和环境因素外，都是影响这一关联的因素。和活性，从而使琁级和侗冉希琗 参考文献甋 甋珿甋 兰型垫奎兰旦鲨垦兰堕侯树坤、朱积川、张小东等基因突变对膀胱癌侵袭能力影响的研究中华泌尿外科杂志；甒，腺癌病理分级的关系中华实验外科杂志，： 甃 ：甎，琣， 尸瓾疉 华中科技大学同济医学院琾，【縜 ，瓾 琺甌 產 华中科技大学同济医学院却， 甌 甀疉 瓹 华中科技大学同济医学院疉瑀疉，琣 ， 兰

6、主型苎查兰堕堕垦兰堕瓼 】 哆縮 瑃 甌琤【保瓽 ， 兰主型垫盔兰旦堕堕兰堕 ， ：琇：， ， 甒 琑，甶篕 琧甁 甋琌：琇， 琙珻琑 甌；琺；疉，；疉，疌， ， ， 畉“縩瑇 兰型垫查兰匣堕堕堂堕瓽產 琌 丘坎昂畉篵瑇 坏悴迦耄笔嗵位点插入缺失基因型；膀胱移性细胞癌样本问重复插入片段频率差异无统计学意义。与 结论基因坏鉇等位基因频率与自发生及其侵袭能力密切相关键词；基因；单核昔琴罗惫性；单体型；膀胱移行细胞癌 疉產一疘护甀疘 些生型垫查兰旦塑垦堂堕疌疘 点在疾病发生中的作用。这样的位点：最后瞧选基因策略主要适用于功能比较明确的基因。已有的研究发现，位于同一条染色体上之间不是孤立的：相邻的等位

7、基 因往往倾向于同时出现。如果相邻的等位基因同时出现的频率超过了随机发生的疉 例。，琈：从外周血液样本中提取人真核细胞基次。在沉淀的白细胞层上。 华中科技大学同济医学院将含有纳锨逡鹤H爰佑乙醇，轻轻瓺溶解采用锖引物蛄屑蠵扩增从逑导反应 体积簧 一 华中科技大学同济医学院图纯化、测序。临床分期和病理分级之间的统计学关联；硎静钜煊型臣蒲庖澹籛 基本一致。组琗煅閄 ，差异有统计学意义，表明基疉，尸尥臣蒲庖澹崾続等位基因频率与 砑】侗冉希瑇弧縄级和侗冉希瑇煌幕蛐秃偷任换蛴牖糡颓窒訲奈招员冉值为换记窒訲奈找嗌撸琌。；患侵袭性的危险性并不高于基因型 表不同的基因型和等位基因与患和侵袭性的危险性比较握纯合子

8、，、缺失缺失纯合子和插入重复插入杂合子，图基坏鉏吭雍献踊蛐虳测序图 图基位点看亢献踊蛐虳测序图图中图基因坏鉊，亢献踊蛐虳测序图图中基因位点无插入序列，后无碱基交错 茎墅坐型型丝些丝兰籛法计算，点基因型比较 籌级和级琍，；虸錋缺失多态性基因型分布比较欢搿疌疘基因型相比，虸插入缺失多态性基因型分布比较基因型检验尸尸 甈软件构建基因转录调控区域单体型表：单体型频率；：连锁不平衡强度 表达的丢失或下调在膀胱肿瘤的浸润转移的过一坏鉉的结果和实验肞方法检测，其插入缺失多态性基因型分为插入插入 华中科技大学同济医学院与的抑制相关，尚须下一步研究证实。个变异位点，理论上就可能有种可能的单体型。实际上，大多数染

9、色体区域只有 堂生型垫查兰旦堕垦兰堕羔型望曼望生兰兰堕发病的遗传学标志物，其影响生物系行为的分子机制有待进一步阐明。 ，甋，瓸瓽，：琑篴：瓾 琂，甆 上皮钙粘连素与膀胱肿瘤的关系典型的钙粘连素为嵌在细胞膜上的钙依赖性糖蛋白，钙依赖性强，在无钙离子存在时被蛋白酶迅速降解。钙粘连素通过三种胞浆内蛋白吹鞍住一链蛋白和吹鞍追庸芑钚浴普沉睾虰链蛋白通过犰狳样重复结构直接相连形成钙粘连素链蛋白复合体。钙粘连素链蛋白复合体存在于细胞间的桥粒样连接和带状连接中，其功能紊乱可致钙粘连素失活；通过链蛋白磷酸化 另外，还发现钙粘连素还参与一些复杂的信号转导、控制细胞的移动和生长上皮钙粘连索甤是钙粘连素家族中最重要也

10、是研究得最深入的一类。人钙离子特异性结合而发挥粘附作用。】克隆出甤。胱移性细胞移性细胞癌；的功能性表达异常与伴有或不伴乳 组织的表达下调与表达下调是一致的；检测前列腺癌细胞株基因的甲基化状态，显示基因表达的缺失、和表达下调与基因启动之疌位点有关，用去甲基化剂治疗表达阴性细胞株能恢复表达”。但相当多的肿瘤样本表达下调缺乏甲基化的表现。低分化膀胱移性细胞癌和侵袭性膀胱移性细胞癌中和链蛋白的表达均下调；三种钙粘附素相关蛋白吹鞍住链蛋白和链蛋白甚至在不表达的癌株中亦可见表达并表现了钙依赖性的细胞粘附活性，可形成上皮结构。免疫组化染色显示无表达的膀胱移性细胞癌中仍有链蛋白的 华中科技大学同济医学院 参考

11、文献甋瓸瓹琣珿：， ：；：琄 甋；， 瓸琧 一塑堑翌羔壁兰坐兰兰生型垫奎兰旦堕垦兰堕侯树坤、朱积川、张小东等基因突变对膀胱癌侵袭能力影响的研，產 ，琣 华中科技大学同济医学院人类基因组单体型的筛选策略及应用研究进展虺艸苹是人类基因组计划的自然延纾耗承巳旧迳夏掣鑫恢玫募罨茿，而另一些人染色体的相同体外，每个人体内的染色体都有两份。一个人所拥有的一对等位位点的类型被称 它们代表了一个群体中人与人之间的大部分多态性。一个染色体区域可以有很多任换蚱德试诨颊咧邢灾哂谡巳海蛱崾菊本身或这一位点所在的染色体区域可能与疾病相关。在病例一对照研究中发现，与疾病相关的 析效果训。型的关联研究，则更有助于候选基因或

12、者其附近染色体区域在发病中作用的确定： 与双倍型一单体型转化观察到一段序 最大似然算法可以有效地解决不收 华中科技大学同济医学院惴莸逍推德氏妊榉植嫉牟煌琒算法又包括了两个算式，错误率比以前的推断方法减少近，较算法有两大优点：处理数据规模很大区域里的单体型结构年，等懒嗽谌死嗳旧瞎苍 体型多样性，存在最有限的几种单体型的区域即确定为单体型域；二是根据多态性 参考文献： 甊：甌琄琀緾，：，：琑琂 ，甆，珿， ， 甆，甆： 探讨后腹腔镜包膜下肾切除术的技术方法和临床应用价值。所有患者均行后腹腔镜包膜下肾切除术。观察手术时间、术中出血量、术后肠功结论：该术式具有微创、出血少、恢复快、近期效果好等特点，较

13、好地解决了 重破坏，。肾脏的正常生理功能丧失。肾脏的感染灶常累及肾周筋膜和肾周脂肪，例患者均接受后腹腔镜包膜下肾切除术，均获随访。卫肷鲈喑度裥苑掷胝沉锌猯肾周筋膜和。肾周脂肪显露肾脏表面， 本组例患者均行后腹腔镜包膜下。肾切除术，手术均获得成功，手术时间踔谐鲅A感染性无功能肾的外科治疗颇为棘手，肾周组织广泛而致密的粘连既可由肾脏的感染灶累及肾周筋膜和肾周脂肪引起，也可因既往同侧肾脏手术史加重。分离致密粘连出血多；且因正常的解剖层次消失，。肾周组织与。肾包膜无明显界限，强行分离易误入肾实质，使手术野出血多，手术难度进一步加大；有时腹膜间位脏器如十二指肠、结肠和靠近腹膜后的脏器如胰腺、脾脏等与肾周

14、组织粘连，在解剖层次不清时损伤风险较大。包膜下肾切除则可以避开粘连，在肾包膜和肾实质之间将无功能的肾脏游离、切除”。 包膜下肾切除术则未见报道。描患肾动脉充盈期无或仅见少量造影剂，排泄期肾盂内无造影剂；诊断有困难时可考虑。肾核素成像、肾血管造影等，但一般并无必要；对侧肾脏影像学检查正常或代偿良好。符合以上标准，后腹腔镜肾切除时。肾脏粘连严重，分离困难腹腔镜肾包膜下肾切除的手术经验报道较少，我们体会：腹膜后水囊扩张完成后，先尝试分离肾周筋膜和脂肪囊，紧靠肾脏表面分离肾脏，若隙粘连不严重且且可分出。肾脏即行常规的后腹腔镜肾切除；若粘连严重，则考虑包膜下肾切除；肾蒂的处理是整个手术的关键。本术式的的

15、要点是使包膜下肾切除时择在接近肾门处切开肾包膜，暴露并分离肾蒂周围脂肪结缔组织，较厚的肾蒂逐 华中科技大学同济医学院本组例患者均行后腹腔镜肾包膜下肾切除术，除一例术中腹膜撕裂外，无其他术中或术后并发症发生，随访至今无远期并发症，手术效果与开放手术相当。该术式具有微创、出血少、恢复快、近期效果好等特点，较好地解决了后腹腔镜包膜下肾切除肾蒂的处理难题。临床应用前景良好。但手术操作难度较大，术者需具备一定的腹腔镜手术经验。 参考文献：，：瓹，： ：皌簎，甃，“甁 皌 篈 瓵 些主型垫奎兰旦堕堕兰堕痚 ，猣： 华中科技太举茼济医学院 。瓾祃琓”琂 甌甌琣， 甋瑃 ，琣 畆：瓵 產 ；瓺；琓 甈甒，瓹， 甁，猻，珻 瓾甹 第三部分附录国家自然科学基金资助课题上皮钙粘素基因单体型影响膀胱移行细胞癌生年度湖北省科学技术进步奖一等奖年度教育部推荐国家科技进步二等奖年度武汉市科学技术进步奖二等奖 华中科技大学同济医学院甋和收录：猣瓸甖，甁畁 ：】琀琓篈， 甁，浮琓琗 华中科技大学同济医学院篈發；：区单核苷酸多态性的关系中华实验外科杂志；判瘢眦危跎俑眨群蟾骨痪蛋耹肾切除术治疗严重感染粘连性无功能 华中科技大学同济医学院郑涛，张旭，马鑫，等后腹腔镜手术治疗肾上腺囊肿例报告中国微创外科杂志；：李宏召，张旭，黄定平，马鑫，等后腹腔镜与开放离断性肾盂成形术的临床实验研究临床泌尿外科杂志；张旭，王少