微生物学检验志贺菌属.ppt

1、肠道杆菌,志贺菌属,志贺菌,培养特性,兼性厌氧、营养要求不高 在肠道选择培养基上呈无色半透明S型菌落菌落 SS平板无色菌落 Mac平板无色菌落 EMB平板无色菌落 宋内志贺菌多呈扁平、R型菌落，个别菌株可迟分解乳糖,生化反应,氧化酶试验（） 分解葡萄糖、不分解乳糖，（个别菌株迟分解乳糖或不分解乳糖） KIA：KA MIU： / IMViC：/ 除A群外，均能发酵甘露醇,抗原结构,只有O、K抗原，无H抗原 K抗原可阻断O抗原与相应抗体的凝集 根据O抗原分4群和44型,志贺菌抗原分类,抵抗力,对理化因素抵抗力弱 尤其对酸敏感 对消毒剂敏感 易产生耐药性,变异性,S-R变异 耐药性变异 毒力变异,临

2、床意义,致病物质： 菌毛 内毒素 志贺毒素：属外毒素，由A群志贺菌产生，具有肠毒、细胞毒、神经毒作用 所致疾病：经肠道传染，引起细菌性痢疾，有3种临床类型，即急性菌痢、慢性菌痢、中毒性菌痢 免疫性： 主要依赖局部SIgA， 病后免疫力不迟久,微生物学检验,标本采集 粪便或肛拭 新鲜脓血便 立即送检或床边接种 保存于30甘油盐水或卡-布培养基,检验程序,粪便或肛拭,肠道选择平板,可疑菌落,KIA MIU、IMViC,报告结果,增菌,菌落涂片染色,多价血清玻片凝集,初步鉴定,最终鉴定,系统生化反应,因子血清凝集,检验方法,将待检标本接种肠道选择平板，35培养1824小时。 若标本含菌量少，可先增菌

3、（GN增菌液）46小时再分离培养。 挑取无色半透明菌落，进行初步生化反应鉴定。 符合志贺菌生化反应特征可进行血清学鉴定 血清学鉴定先用志贺氏多价诊断血清作玻片凝集试验，若凝集再用A、B、C、D群诊断血清鉴定到种、型。 血清学鉴定需注意K抗原的阻断作用，并应考虑是否为EIEC。,志贺菌鉴定,初步鉴定 挑取可疑菌落接种KIA、MIU培养基 若符合KIA：KA；MIU： / ，再作志贺菌多价诊断血清玻片凝集试验 最后鉴定：全面生化反应和单价血清玻片凝集试验 若出现生化反应符合，血清学不凝集现象，应考虑K抗原的阻断作用，可将菌液加热1001530min后，重复凝集试验，仍不凝集可考虑EIEC，需进行鉴

4、别。,志贺菌鉴别,与EIEC的鉴别 与类志贺菌的鉴别 与动力不明显、不产H2S的沙门菌的鉴别,志贺菌血清学鉴定,先用志贺菌多价诊断血清鉴定群，再用A、B、C、D群单价血清鉴定血清型。 A群以1、2型为主，多有K抗原 C群型别多 D群只有1个血清型 B群型别多，抗原结构复杂，多无K抗原。 我国以B群为主,不典型菌株的鉴定,在鉴定中如遇生化反应符合，血清学不凝集；血清学凝集，生化反应不符合，可考虑不典型菌株。 将不典型菌株在肉汤中反复传代，促其恢复典型性状,志贺菌快速鉴定试验,直接凝集试验 免疫荧光菌球法 协同凝集试验 乳胶凝集试验 分子生物学方法,志贺菌鉴定依据,肠道选择平板上无色半透明菌落 K

5、IA：KA MIU： / 与志贺菌多价诊断血清和各群血清凝集 注意与EIEC、类志贺邻单胞菌、动力不明显的沙门菌鉴别,与EIEC的鉴别,与类志贺邻单胞菌的鉴别,与动力不明显、H2S阴性沙门菌的鉴别,大肠埃希菌生化反应结果,肠道杆菌,沙门菌属,沙门菌属,是寄生于人类和动物肠道中，生物学性状相似的革兰阴性杆菌,沙门菌属,肠道沙门菌,邦戈沙门菌,肠道亚种 萨拉姆亚种 双亚利桑那亚种 亚利桑那亚种 豪顿亚种 英迪加亚种,致病沙门菌多为 肠道亚种,形态染色,革兰阴性杆菌，无芽孢、无荚膜、有周鞭毛，多数菌株有菌毛,沙门菌,培养特性,兼性厌氧、营养要求不高 在肠道选择培养基上呈无色半透明S型菌落菌落，与志贺

6、菌菌落相似。 SS平板无色菌落，产H2S菌株，菌落中心呈黑色 Mac平板无色菌落 EMB平板无色菌落,生化反应,氧化酶试验（） 分解葡萄糖、不分解乳糖 KIA：KA（伤寒沙门菌产酸不产气KA） MIU： IMViC： 赖氨酸脱羧、鸟氨酸脱羧：,抗原结构,O抗原：化学成分为脂多糖；耐热；与相应抗体结合出现颗粒状凝集；沙门菌分群依据。 H抗原：化学成分为蛋白质；不耐热；与相应抗体结合出现絮状凝集；沙门菌分型依据。 Vi抗原：位于菌体外层；抗原性强，相应抗体可作为筛选带菌者指标；不耐热；能阻止O抗原与相应抗体结合；伤寒沙门菌和丙型副伤寒沙门菌有Vi抗原，有VW变异。,几种沙门菌的抗原组分,变异性,S

7、-R变异： H-O变异： V-W变异： 相位变异： 耐药性变异：,抵抗力,对理化因素抵抗力弱 尤其对酸敏感 对消毒剂敏感 易产生耐药性,临床意义,致病物质：菌毛、内毒素、Vi抗原 所致疾病： 肠热症 食物中毒 败血症 慢性肠炎 免疫性：病后免疫力牢固，以细胞免疫为主,肠热症发病过程,伤寒杆菌和副伤寒杆菌,小肠黏膜,经口,肠壁淋巴组织,被吞噬细胞吞噬,进入血液,菌血症,骨髓,脾,肝,胆囊,肾,小肠,随尿液排出,随粪便 排出,再次侵入 肠壁，引 起并发症,潜伏在胆囊中,随粪便排出,带菌者,沙门菌感染的预防,加强饮食卫生，切断传播途径 发现并及时隔离病人 接种伤寒和副伤寒沙门菌疫苗进行特异性预防,微

8、生物学检验,标本采集：根据不同疾病采集不同标本 肠热症的标本采集 发病第12周：血液 发病第23周：粪便、尿液 肠热症全程：骨髓,检验程序,粪便、尿、残余食物,SS、Mac、血平板,可疑菌落,KIA MIU、IMViC,报告结果,增菌 （GN、SF）,菌落涂片染色,A-F多价血清 玻片凝集,初步鉴定,最终鉴定,系统生化反应,因子血清凝集,血液、骨髓,增菌 （胆盐葡萄糖肉汤）,检验方法培养,血液、骨髓：将待检标本接种胆盐葡萄糖肉汤增菌培养，每日观察，出现浑浊等现象，及时转种 血平板和肠道选择平板。 粪便：接种SS、Mac或EMB分离培养，若标本含菌量少，可先增菌。 尿液：尿液离心后，取沉淀物接种

9、血平板和肠道选择平板。,检验方法生化反应初步鉴定,触酶、氧化酶、硝酸盐还原 苯丙氨酸、葡萄糖酸盐 KIA：K A +/- +/- MIU： 赖氨酸脱羧、鸟氨酸脱羧,检验方法血清学鉴定,首先用A-F多价O诊断血清进行初步鉴定； 再用O因子血清鉴定到群（A、B、C、D、E、F群）； 再用H因子第2相血清辅助鉴定型； 若生化反应符合沙门菌，A-F诊断血清不凝集，应考虑是否有Vi抗原，将待检菌液加热后，再进行A-F多价O血清凝集试验。,A-F多价O诊断血清 凝集试验,凝集,O因子诊断血清 凝集试验,H因子诊断血清 凝集试验,凝集,初步鉴定,鉴定血清群,鉴定血清型,沙门菌鉴定需注意的问题,玻片凝集试验需

10、注意菌液浓度、反应温度 生化反应符合，玻片凝集试验阴性，应考虑是否有Vi抗原的存在 抗原结构相同，生化反应不同，应加做生化反应 生化反应符合，玻片凝集试验阴性，无Vi抗原，应：重新观察生化反应；传代以恢复原有抗原性。,肠热症不同标本细菌培养情况,血清学诊断肥达反应,原理：用已知伤寒沙门菌O、H抗原和甲型副伤寒沙门菌、乙型副伤寒沙门菌、丙型副伤寒沙门菌H抗原与病人血清作半定量凝集试验，以测定受检血清中有无相应抗体及其效价。 意义：协助诊断肠热症（伤寒与副伤寒）,肠热症病人血清抗体出现情况,肥达反应结果判定： O效价1：80 H效价1：160 副伤寒H效价1：80 O与H抗体的诊断意义： O、H效

11、价均升高：已感染伤寒 O、H效价均低于正常值：未感染沙门菌或免疫力低下 O升高、H正常：某型沙门菌感染早期 H升高、O正常：以往接种过疫苗或非特异性回忆反应 双份血清的肥达反应： 后一次较前一次抗体效价增高四倍以上，有诊断价值,血清学诊断肥达反应,生理盐水, 待检血清,诊断抗原,1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640,伤寒O效价 1:160 伤寒H效价 1:320 甲型副伤寒H效价 1:20 肖沙门菌H效价 1:20,诊断意义：感染伤寒沙门菌,伤寒O效价 1:80 伤寒H效价 1:20 甲型副伤寒H效价 1:160 肖沙门菌H效价 1:20,诊断意义：感染甲型副伤寒沙门菌,沙门菌鉴定