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文档简介
1、构成生物体的遗传物质是什么?讨论:构成有机体的遗传物质是什么?如何分离细胞内的遗传物质?讨论2:讨论:思考不同浓度NaCl溶液中1DNA溶解的特征。如果NaCl溶液浓度低于0.14 mol/L,则DNA的溶解度随NaCl溶液浓度的增加而逐渐降低。在0.14 mol/L时,DNA溶解度最低。NaCl溶液浓度继续增加,DNA的溶解度逐渐提高。想想1DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解的特性。事故2要用什么浓度溶解DNA?要释放DNA,还得用什么浓度呢?2mol/L浓度能溶解DNA。0.14mol/L浓度能析出DNA。事故2要用什么浓度溶解DNA?要释放DNA,还得用什么浓度呢?3想酒精是常用的有机
2、溶剂,但DNA不能溶于酒精(尤其是95冷却酒精),而是细胞中的蛋白质能溶于酒精。问题:如果使用DNA不能溶于酒精的原理,你能达到什么目的?进一步分离DNA和蛋白质,认为3酒精是常用的有机溶剂,但DNA不能溶于酒精(尤其是95冷却酒精),但细胞中的蛋白质却能溶于酒精。问题:如果使用DNA不能溶于酒精的原理,你能达到什么目的?DNA能抵抗酶、高温、洗涤剂,蛋白质酶能解密蛋白质,但对DNA没有影响的大部分蛋白质经不起6080的高温,DNA能通过80以上的变性洗涤剂溶解细胞细胞膜,去除脂质和蛋白质,但对DNA没有影响。4萃取DNA可以利用对酶、高温、洗涤剂的耐受原理。使用牙齿原理时,应该使用什么酶和什
3、么温度值?如果想4萃取DNA,也可以利用DNA的酶、高温、耐洗涤剂的原理。使用牙齿原理时,应该使用什么酶和什么温度值?蛋白酶,酶具有特异性,因此蛋白酶只水解蛋白质,不影响DNA。温度值为6080。因为牙齿温度值是蛋白质变性沉淀,DNA不变性。DNA的鉴定、DNA的鉴定、DNA和二苯胺(沸水浴)都染成蓝色,所以二苯胺可以用作鉴定DNA的试剂。DNA的感情、DNA和二苯胺(沸水浴)染成蓝色,二苯胺可以用作确认DNA的试剂。甲基绿(绿色)可以利用不同浓度的NaCl溶液溶解或析出DNA,从而从细胞中提取DNA。利用酒精将DNA从蛋白质中进一步分离,达到净化的目的。最后使用二苯胺试剂确定提取的物质是否为
4、DNA。原理摘要,(a)实验材料选择,实验设计,生物各有组织的DNA含量不同。选择材料时,要根据DNA含量高,材料容易得到,容易提取的原则。你认为教材提供的资料中不适合提取DNA吗?(a)实验材料选择,实验设计,不同生物组织的DNA含量不同。选择材料时,要根据DNA含量高,材料容易得到,容易提取的原则。你认为教材提供的资料中不适合提取DNA吗?哺乳动物血液和液体培养基的大肠杆菌。(a)选择实验材料,实验设计,核DNA数,见猪38万亿,鸡78万亿,哺乳动物血0万亿,猕猴桃58万亿,洋葱16万亿,豌豆14万亿,菠菜12万亿,大肠杆菌1万亿。请选择一个动植物材料。(a)选择实验材料,实验设计,鸡皮,
5、猕猴桃。从核DNA的数量来看,38只猪,78只鸡,0个哺乳动物的血,58个猕猴桃,16个洋葱,14个豌豆,12个菠菜,1个大肠杆菌。请选择一个动植物材料。(b)碎细胞,包含DNA的过滤器,1 .动物细胞,(b)破裂细胞,包含DNA的过滤器,1 .动物细胞,动物细胞粉碎更容易。例如,在鸡血口服液中加入一定量的蒸馏水,然后用玻璃棒搅拌,讨论,为什么添加蒸馏水会使鸡血细胞破裂?讨论,为什么添加蒸馏水会使鸡血细胞破裂?答:蒸馏水是鸡血细胞内的低渗透液,水分大量进入血细胞内,使血细胞膨胀,加上混合的机械作用,鸡血细胞的破裂(细胞膜和核膜的破裂)加速释放DNA。2 .植物细胞,植物细胞必须先用特定的洗涤剂
6、和盐溶解细胞膜。2.植物细胞,讨论,添加洗涤剂和盐的作用分别是什么?讨论,加入洗涤剂和盐的作用分别是什么?答:洗涤剂是能溶解细胞膜,有助于释放DNA的离子洗涤剂。盐的主要成分是NaCl,有利于DNA溶解。植物细胞必须先用特定的洗涤剂和盐溶解细胞膜。2.植物细胞,例如:提取洋葱DNA时,在切碎的洋葱中加入洗涤剂和盐,充分搅拌,研磨,收集研磨液,缺乏研磨会对实验结果产生什么影响。讨论,如果缺乏研磨会对实验结果产生什么影响?答:缺乏研磨,会导致细胞核内DNA的释放不完整,提取的DNA的杨怡减少,影响实验结果,看不到丝绸淀粉,用豆胺识别,不显示蓝色等原因。(3)为了去除滤液中的杂质,纯化提取的DNA,
7、需要进一步处理滤液。(3)为了去除滤液中的杂质,纯化提取的DNA,需要进一步处理滤液。讨论,牙齿阶段获得的滤液中可能包含哪些细胞成分?(3)去除滤液中的杂质,A:可含有核蛋白、多糖、RNA等杂质,为了纯化提取的DNA,还需要进一步处理滤液。讨论,牙齿阶段获得的滤液中可能包含哪些细胞成分?方案,方案1:30毫升滤液35gNaCl往同一方向混合,DNA溶解加入蒸馏水DNA析出滤液,将滤液溶解在2mol/LNaCl溶液中,使DNA-NaCl溶解液方案2: 30mL滤液莲肉粉(木瓜蛋白酶)停止1015分钟,讨论,为什么反复溶解,析出DNA,去除杂质?答:用高浓度的盐溶液溶解DNA,可以去除高盐中不能溶
8、解的杂质。低盐浓度使DNA析出,可以去除低盐溶液中溶解的杂质。因此,通过反复溶解和析出DNA,可以去除不同于溶解DNA的各种杂质。讨论,方案2和方案3的原理有何不同?讨论,方案2和方案3的原理有何不同?二是利用蛋白酶分解杂质蛋白,将提取的DNA与蛋白质分离。情景3因为DNA和蛋白质的耐高温性不同,所以使蛋白质变性,将其与DNA分离。(4) DNA的析出和情感,1 .DNA的析出仍在过滤器中含有一些杂质,如何去除牙齿杂质?得到的DNA是什么颜色?(4) DNA的析出和情感,1 .DNA的析出仍在过滤器中含有一些杂质,如何去除牙齿杂质?得到的DNA是什么颜色?滤液等体积的冷却酒精均匀混合,静置23分钟后析出的白色丝绸就是DNA。DNA是白色的。,2 .DNA鉴定,2 .DNA鉴定,2个试管,编号盒,在同一方向快速搅拌,过滤,去除细胞壁,细胞膜等,溶解细胞核DNA,加入2mol/L NaCl溶液,在同一方向慢慢搅拌,DNA析出中蒸馏水为0.14mol/L除了核蛋白、RNA、多糖等,DNA要鉴定二苯胺、沸水浴,以蓝色、1、血液作为实验材料时,每100毫升加入3g柠檬酸钠,防止血液凝固。2.加入洗涤剂后,动作要轻柔。否则会产生很多泡沫,不利于后续阶段的操作。加入酒精和玻璃棒搅拌时,动作要轻,以免DNA分子破裂加
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