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文档简介
1、酵母核糖核酸的分离和组份鉴定,目的和要求,1。稀碱提取RNA的原理,方法2。掌握核酸中三大成分的鉴定方法、原理、核糖核酸RNA:从核和细胞质中分离出的化学物质。在蛋白质合成和其他生化反应中起着重要作用。RNA的结构类似于DNA的结构,都是核苷酸按一定顺序排列的长链。RNA可以分为信使RNA、转运RNA、核糖核酸和其他类型的RNA。磷酸,碱,戊糖,酵母菌的主要成分是RNA(2.6710.0%),DNA很少(0.030.516%)。总RNA提取:可以水解稀碱分解法、乙醇沉淀RNA、洗涤杂质去除RNA组鉴定3360硫酸RNA,并单独鉴定。1.核糖识别苔藓黑酚(3,5二羟基甲苯)方法,浓绿色,2 3。
2、磷酸测定法(NH4)2 moo 4 H2 so 4 H2 mooo 4(NH4)2 so 4 h3po 4 12 H2 mooo 4 H3P(MO3O10)4 12 H2 o 12 H2 oh3 p(mo3o 10)4 mo2o 3酸性乙醇溶液,mo3o 10浓氨,0.1米硝酸银;氯化铁精矿盐溶液,青苔黑酚乙醇;磷试剂、设备研究碗、平衡;沸水浴,低速台式离心机。材料干酵母,1 .变更萃取程序:在5g酵母中加入30 ml 0.04M NaOH,在莲脚中均匀研磨,移至大试管,沸腾的水浴移至20 min,3000离心机10min,清理干净,放弃沉淀。上清液慢慢倒入10毫升酸性乙醇,加搅拌,沉淀RNA
3、,将5min,3000转到离心力10min,抛弃上清,沉淀。3 .用95%乙醇冲洗沉淀物两次,用约6毫升/管去除表面杂质。捣碎沉淀物后首次离心5min;第二,将沉淀物粉碎,过滤,移动沉淀物,放在滤纸上,冷干,称重。(威廉莎士比亚,温德夏,书籍) (威廉莎士比亚,温德夏) (减去法计量,滤纸要提前唱)4。将所有提取物移至小三角瓶,加入硫酸水解后,分别鉴定成分。2 .感情1。鉴定人造可以适当增加,效果更好。氨太多可能会使沉淀物消失。先加硝酸银,再加氨的效果明显。苔藓黑酚发色的特异性不好,凡戊糖都有牙齿反应。准微量DNA没有影响,存在更多的DNA,也有干扰。离心主义:1。把样品倒入玻璃离心管是不能太紧的。2.把离心玻璃离心管(塑料管罩)放在秤上平衡。对称放置在离心机上;4.开机前,确认速度旋钮为0,调整计时旋钮设置时间,按开始按钮开始离心力,将速度慢慢调整到
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