病毒性肝炎标志物检测.ppt

1、病毒性肝炎标志物检测,A,病毒性肝炎 Hepatitis Virus,肠道传播,肠道外传播,F, TTV ? 其它,E,NANB,B,D,C,病毒性肝炎- 背景,传染源,粪便,血液/,血源性物质/,体液,血液/,血源性物质/,体液,血液/,血源性物质/,体液,粪便,传播途径,粪-口,经皮肤/ 经粘膜,经皮肤/ 经粘膜,经皮肤/ 经粘膜,粪-口,慢性感染,否,是,是,是,否,病毒性肝炎类型,A,B,C,D,E,基因组类型 ssRNA dsDNA ssRNA ssRNA ssRNA,Hepatitis B Virus,乙型肝炎的病原体 在全世界广泛流行，估计全球半数以上人口已被HBV感染过，5%的

2、人口为HBV慢性感染 中国：乙肝高发区，人群HBsAg的检出率达9.8%,Hepatitis B Virus,抗原组成(一)-HBsAg,位于病毒表面，是一种糖蛋白 4种亚型(adr,adw,ayr,ayw) 欧美国家: adw 我国汉族: adr 我国少数民族: ayw 判断HBV感染的指标之一 刺激机体产生保护性抗体即抗-HBs,抗原组成(二)- HBcAg,位于Dane颗粒核心部分和肝细胞核内，在血清中不易检出游离的HBcAg 主要成分是蛋白质 刺激机体产生抗-HBc(非保护性抗体) 在乙肝急性期、恢复期和HBsAg携带者中常可检出抗-HBc 抗-HBc IgM常提示病毒处于复制状态,抗

3、原组成(三)- HBeAg,位于HBV的核心,是一种可溶性蛋白抗原 HBeAg和Dane颗粒出现相平行，且与DNA多聚酶在血中的消长动态相符合 血中HBeAg的出现可作为HBV复制及血清有感染性的指标 刺激机体产生抗-HBe 抗-HBe能与受染肝细胞表面的e抗原结合,通过补体介导破坏受染的肝细胞,抗-HBe的出现是预后良好的征象,抗原组成(四)- Pre-S抗原,位于HBV的外衣壳上，有两种 刺激机体产生抗Pre-S1和抗Pre-S2，能阻断HBV与肝细胞受体结合，从而起到抵抗病毒的作用 抗Pre-S1和抗Pre-S2的出现，表示病情好转，趋向痊愈,传染源,患者 潜伏期 急性期 慢性期 无症状

4、HBsAg携带者,高,中等,低/不能检出,血液,精液,尿,血清,阴道分泌物,粪便,伤口渗出物,唾液,汗液,泪液,乳汁,各种体液中HBV的浓度,血源性传播 输血、注射、外科和牙科手术、针刺等 剃刀、牙刷和蚊虫叮咬等 母婴垂直传播 宫内传播 分娩时微小皮损处传播 产后母婴密切接触 性传播,HBV 传播途径,病原学诊断(一)-抗原抗体检测,项目：HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc以及抗-HBc IgM 方法 ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay，最常用，定性) 发光免疫分析(定量) 反相间接血凝试验(少用),ELISA的基本原理,利用

5、抗原和抗体特异性结合 主要的试剂 固相抗原或抗体 酶标记的抗原或抗体 酶的底物,病原学诊断(二)核酸检测,核酸杂交 探针 PCR 引物,HBsAg 感染的标志 Anti-HBs 既往感染/接种疫苗 Anti-HBc IgM 急性感染标志 Anti-HBc IgG 既往或慢性感染 HBeAg 急性病毒复制，有传染性 Anti-HBe 病毒不再复制 HBV-DNA 急性病毒复制，比HBeAg更准确；主要用于监测治疗反应,血清学检测的临床意义,HBsAg 抗-HBs HBeAg 抗-HBe 抗-HBc 临床意义,急性或慢性感染(大三阳),+,-,+,-,+,+,+,+,乙肝后期或慢性感染(小三阳),

6、-,-,+,+,-,-,-,潜伏期或急性乙肝早期,-,-,+,+,+,痊愈或恢复期,有免疫力,-,-,-,-,-,+,+,+,-,-,痊愈,有免疫力,疫苗接种或曾经感染过,有免疫力,蛋白质代谢功能的检查,肝合成白蛋白、脂蛋白、凝血因子、纤溶因子、各种转运蛋白等，肝脏受损时，这些蛋白下降 球蛋白（非肝脏合成）在肝实质细胞受损、间质细胞增生时，球蛋白生成增加,肝功能,1.代谢功能： 1) 蛋白质、脂肪的同化、储存、异化等 2) 核酸代谢、维生素的活化和储藏 3) 胆红素、胆酸的生成分泌、排泄功能 如对胆红素的排泄 2.分泌、排泄功能：如对胆红素的排泄 3.生物转化功能：氧化、还原、水解、结合,实验

7、室检查的目的,了 解： 肝脏有无损伤及损伤的程度 监测肝功能状态 协助病毒性肝炎和肝癌的诊断 评价肝脏的储备功能 其他,一）血清总蛋白、白蛋白、球蛋白A/G比值测定,1）血清总蛋白（TP，serum total protein） 是血清所含各种蛋白的总称,包括血清A和G，各占60%和40% 2）白蛋白（A，albulin)为血液中主要蛋白质。由肝脏合成，其半衰期为15-19天,3）球蛋白 (G，globulin)：为血清总蛋白中除去白蛋白以外的蛋白质,是多种蛋白质的混合物，包括：免疫球蛋白和补体、各种糖蛋白、脂蛋白、金属结合蛋白和酶 球蛋白主要是由单核-吞噬细胞系统合成,与机体免疫有关 4）A

8、/G比值： 1 ，如1 称A/G比值倒置,参 考 值,TP 60-80 g/L A 40-50 g/L G 20-30 g/L A/G 1.5-2.5 : 1,临床意义,1. 总蛋白增高 1）血液浓缩：见于重度腹泻、呕吐、高热、 休克等 2）蛋白质合成：主要是G，如多发性骨髓 瘤、肝硬化、淋巴瘤 总蛋白降低 1）血液稀释，各种原因所致的水盐潴留 2）各种原因的A降低,临床意义,2、白蛋白降低 1) 合成不足：常见肝脏损害(慢性肝病 时,A下降比急性肝炎明显;失代偿期肝硬化低于代偿期肝硬化） 2) 原料不足：长期饥饿、腹泻、消化道肿瘤和 消化不良等 3)去路增加 丢失过多：肾炎、肾病综合征、大量

9、胸腹水 严重烧伤和失血消耗过多：甲亢、糖尿病、恶性肿瘤等 白蛋白增高 ：少见，脱水致血液浓缩,临床意义,3、球蛋白增高 1）感染、免疫反应，如TB、疟疾和血吸虫等 2）多发性骨髓瘤 3）自身免疫性疾病,如SLE、风湿热、类风湿 性关节炎等 球蛋白降低 ： 合成降低,如肾上腺皮质功能亢进,先天性免 疫缺陷,临床意义,4、 A/G比值 A/G比值反映A、G浓度变化的关系 正常值1.5-2.5/1 肝功损害严重时，A下降，G上升，使A/G比值变化 当A/G 1时，称A/G比值倒置,（二）血清蛋白电泳,原 理： 在碱性环境中,血清蛋白均带阴电荷，在电场中向阳极泳动，因各蛋白等电点和分子量各异，分子量小

10、，阴电荷多者泳动快，分子量大，阴电荷少者泳动慢，电泳后从阳极开始，依次为、1-G、2-G、-G及-G五个区带，此种检查法称血清蛋白电泳,正常血清蛋白电泳图,参 考 值, 0.61-0.71 1-G 0.03-0.04 2-G 0.06-0.10 -G 0.07-0.11 -G 0.09-0.18 (醋酸纤维膜电泳法）,临床意义,肝受损时，、1-G、2-G、-G 均降低 自身抗原刺激淋巴系统-G升高 1）肝炎 急性（轻症）无变化 加重时 、1-G、2-G、-G 均降低 -G升高,临床意义,2）肝硬化 、1-G、2-G、 -G 均降低 -G 升高 3）肝癌 降低 1-G、2-G、-G升高 偶见甲胎

11、蛋白带出现,血清前蛋白测定,定 义： PAB(prealbumin)是一种载体蛋白,在电泳图谱上位于白蛋白前方看到一条染色很浅的区带，这就是前白蛋白 前白蛋白在肝脏合成，其半寿期短（约2天),比白蛋白更能早期反映肝脏损害情况，为肝细胞损害早期灵敏的指标,PAB的意义,急性肝炎:PAB无下降 慢性肝炎、肝硬化、肝癌、重症肝炎: PAB平均下降 50% 慢性肝炎PAB的监测PAB持续降低：肝硬化 PAB升高：预后较好PAB持续降低:预后较差 肝移植病人的监测：反映移植肝的合成功能,凝血功能检查,肝脏严重受损时，肝脏合成凝血因子功能下 降，故凝血时间延长1) 凝血时间（CT）延长 VII、IX、XI

12、 明显减少2) 血浆凝血酶原时间（PT）延长 I、II、V、VII、X 缺乏3) 活化的部分凝血活酶时间（APTT）延长 XII、XI、IX、VIII、X、V、II 等缺乏,胆红素代谢功能检查,胆红素种类,1)未结合胆红素（间接胆红素）:即UCB，指游离胆红素和胆红素-白蛋白统称未结合胆红素 2)结合胆红素或直接胆红素:即CB,指胆红素葡萄糖醛酯或其硫酸酯称结合胆红素 3)总胆红素（STB):为非结合胆红素和结合胆红素的总量,UCB和CB的特点和理化性质,UCB CB 结构特点 游离胆红素 与葡萄糖醛酸结合 或胆红素-白蛋白 分子量 585 重氮反应 间接反应 直接反应透过生物膜 易，有毒性

13、不易 水溶性,参考值,总胆红素 1.7-17.1 umol/L结合胆红素 0-6.8 umol/L非结合胆红素 1.7-10.28 umol/L,临床意义,1）总胆红素判断有无黄疸及黄疸的程度 隐性黄疸 17.1-34.2 umol/L 轻度黄疸 34.2-171 umol/L 中度黄疸 171-342 umol/L 重度黄疸 342 umol/L,临床意义,2）根据黄疸程度判断黄疸原因 （总胆红素水平）完全阻塞性黄疸 342 umol/L不完全阻塞性黄疸 171-342 umol/L肝性黄疸 17.1-171 umol/L溶血性黄疸 85.5 umol/L,临床意义,3）根据STB、CB及U

14、CB判断黄疸类型 STB + UCB 溶血性黄疸 STB + CB 阻塞性黄疸 STB + CB + UCB 肝性黄疸,正常人及三种黄疸的胆红素代谢检查结果,血清胆红素（umol/L） 尿 STB CB UCB CB/ STB 尿胆原 胆红素 正常人1.7-17.1 0-6.8 1.7-10.2 20% （-） 弱阳性（-） 溶血性 明显 20，60 强阳性,血清酶学检查,1、血清转氨酶测定,1）转氨酶：是将氨基酸的氨基转移到-酮 酸的酮基上的一种酶 用于肝功能检查的主要是谷氨基丙酮酸转移酶（GPT）和谷氨酸草酰乙酸转移酶（GOT）,2) GPT经WHO命名为丙氨酸氨基转移酶(ALT),存 在

15、于肝细胞胞浆中，因肝内该酶活性较血清 约高100倍，故只要有1%肝细胞坏死,即可使 血清中的ALT增高1倍,因此,它是最敏感的肝 功能检测指标之一,3) GOT现名天门冬氨酸氨基转移酶（AST）。此酶在心肌含量最高，肝脏为第三，在肝损害时，其漏出量也较ALT低,临床意义,（1）急性病毒性肝炎转氨酶阳性率80-100%A、在发病前，ALT与AST即有升高，最高值 500U,随病情好转逐渐下降至正常 B、病情恶化，转氨酶反下降，是肝细胞广 泛坏死的表现 C、在急性肝炎的恢复期，如转氨酶在100U 左右波动或再上升,提示急性转为慢性,临床意义,（2）慢性肝炎和脂肪肝 : 轻度上升（100-200U）

16、或正常 （3）肝硬化、肝癌 : 轻度上升（100-200U）或正常,2、-谷氨酰转移酶（-GT）,1）-G活性 肾胰肝 2）在肝-GT广泛分布于肝细胞毛细胆管 侧和整个胆管系统，在胆汁淤滞时,肝 内-GT合成亢进，肝癌可合成- GT 3）参考值 男 11-50U/L 女 7-30U/L,意义,1）肝癌 肝癌合成 A、肝内阻塞 胆汁淤滞 -GT 肝癌细胞产生 B、阳性率95%2）阻塞性黄疸:-GT（上升幅度与黄疸程度平 行）,意义,3)急性肝炎:中度升高 ， 1000U,肝癌标志物的检查,在肝细胞癌时,由于肝细胞功能异常，产生出一些与肝细胞癌密切相关的蛋白质,称为肝癌的肿瘤标志物，对肝癌的诊断有

17、重要意义,1.AFP测定,1）AFP是胎儿性蛋白，为胎儿所特有，出生后 不久转为阴性,或仅含微量 在原发性肝癌时升高 因而，测定AFP在血中的浓度，对此类疾病的诊断有重要意义,2）来源:胎肝和卵黄囊与肝再生时，分裂细胞数量呈正相关,3）参考值: 成人 25 ug/L 3周 6个月的小儿 39/L,4) 意 义,（1）原发性肝癌 定性 （+） 定量 500 ug/L持续1个月以上,能排除妊娠、活动性肝炎、幼儿性睾丸或卵巢、畸胎瘤等可确诊肝癌 （2）肝炎 病毒性肝炎肝细胞重新具有了产 生AFP的能力.急性、慢性肝炎均可升高， 但 300ug/L，随着肝细胞的修复，AFP 下降，为一过性的升高,4)

18、 意 义,（3）妊娠 3-4月以后AFP升高 7-8月高峰 ,但 400 ug/L 分娩后约3周降至正常 （4）其他 肝硬化（活动期）、先天性胆管闭锁等AFP升高,2、癌胚抗原（CEA）测定,1）癌胚抗原是一种存在于成人癌组织中的胎儿性蛋白，可根据免疫学原理检测 2）参考值 0-5 ug/L,2、癌胚抗原（CEA）测定,（1）消化道肿瘤 A、无助癌的早期诊断 B、观察术后过程,判断预后,预测再发 的指标 （2）原发性肝癌与转移性肝癌的鉴别价值： 较大转移性肝癌CEA阳性率高达90% （3）溃疡、肝硬化、阻塞性黄疸及吸烟者 和老人 CEA可轻度升高,肝病检查项目的选择,选择原则,1、肝功检查无特

19、异性强的检查方法，而且检查项目繁多，选择项目应考虑的选择原则： 1）病情需要2）敏感性、特异性高3）实验室条件允许,2、选择项目,1）健康查体:ALT、肝炎病毒标志物 2）肝炎诊断： 急性：ALT、肝炎病毒标志物 慢性: ALT、肝炎病毒标志物加上AST、ALP、TP、A/G、-GT、血清蛋白电泳,2、选择项目,3）黄疸 ： 一般总胆红素、ALT 加上 AFP 4）原发性肝癌： 除一般肝功,加测AFP、-GT、CEA等,血气分析,1、酸碱度(pH)，参考值7.357.45。7.35为酸血症，7.45属碱血症。 但pH正常并不能完全排除无酸碱失衡。 2、二氧化碳分压(PCO2)参考值4.655.

20、98kPa(3545mmHg)乘0.03即为H2CO3含量。 超出或低于参考值称高、低碳酸血症。55mmHg有抑制呼吸中枢危险。是判断各型酸碱中毒主要指标。 3、二氧化碳总量(TCO2)，参考值2432mmHg，代表血中CO2和HCO3之和，在体内受呼吸和代谢二方面影响。 代谢性酸中毒时明显下降，碱中毒时明显上升。,4、氧分压（PO2）参考值10.6413.3kpa（80100mmHg）。 低于55mmHg即有呼吸衰竭，30mmHg可有生命危险。 5、氧饱和度(SatO2)，参考值3.5kPa(26.6mmHg)。 6、实际碳酸氢根（AB），参考值21.427.3mmHg，标准碳酸氢根（SB）参考值21.324.8mmol/L。 AB是体内代谢性酸碱失衡重要指标，在特定条件下计算出SB也反映代谢因素。二者正常为酸碱内稳正常。 二者皆低为代谢性酸中毒（未代偿），二者皆高为代谢性碱中毒（未代偿），ABSB为呼吸性酸中毒。,7、剩余碱（BE）参考值3+3mmol/L，正值指示增加，负值为降低。 8、阴离子隙（AG），参考值816mmol/L，是早期发现混合性酸碱中