微生物学检验厌氧性细菌及检验.ppt

1、厌氧菌,概念: 是一大群必须在无氧环境条件下才能生长繁殖的细菌 特点: 种类多 分布广 感染可发生于人体各个部位,厌氧菌特点,厌氧菌感染的临床及细菌学特征,感染发生于黏膜附近 深部外伤 感染局部有气体产生 分泌物有恶臭或暗血红色 某些抗生素治疗无效的感染 标本直接涂片细菌染色不均 镜检见细菌,需氧培养无细菌培养,厌氧菌感染的原因,局部形成厌氧微环境 局部或全身免疫功能下降 菌群失调 寄居部位发生改变,厌氧菌标本采集与送检,采集 部位恰当 正确采集 避免污染 严格厌氧 及时送检,运送 针筒运送法 无氧小瓶运送法 标本充盈运送法 组织块运送法 厌氧袋运送法 棉拭运送法,厌氧菌常用培养基,非选择性培

2、养基 心脑浸液5脱纤维羊血氯化血红素维生素K 选择培养基 七叶苷胆汁平板培养脆弱类杆菌 卡那万古冻溶血琼脂平板培养 FS培养基培养梭杆菌属 VS培养基培养韦容球菌 CCFA培养基培养艰难梭菌,厌氧菌厌氧培养法,厌氧罐培养法 厌氧器袋法 厌氧手套箱法 疱肉培养法,标本,增菌,分离培养,挑取菌落,肉眼观察 染色镜检,血标本,需氧培养,厌氧培养,厌氧培养,厌氧培养,生长,不生长,生长,专性厌氧菌,专性厌氧菌,形态染色 菌落特征 生化反应 药敏鉴定 气相色谱,厌氧菌标本观察和涂片镜检,肉眼观察：观察标本的性状（脓性、带血、气味、硫磺样颗粒、坏死组织等） 涂片染色镜检：估计细菌数量、观察细菌形态、染色性

3、，以便选择培养基和培养方法,厌氧菌分离培养,初代培养： 厌氧培养48h 次代培养：挑5个以上不同菌落做耐氧试验，每个菌落接种2个平板，分别进行需氧培养和厌氧培养，挑取有氧培养中不生长、厌氧培养生长的菌落进行鉴定,厌氧菌鉴定,菌体形态： 菌落性状：形状、色素、荧光、溶血 药敏鉴定试验： 卡那霉素：梭杆菌属多敏感，类杆菌属多耐药 聚茴香脑磺酸钠：快速鉴定厌氧消化链球菌 生化反应 气相色谱技术,破伤风芽孢梭菌主要性状,革兰阳性细长杆菌，有周鞭毛，芽孢位于菌体顶端，圆形大于菌体，呈“火柴棒状” 专性厌氧 在血平板上呈扩散生长，菌落边缘不整齐，呈羽毛状 在疱肉培养基中，肉渣变黑，有腐败恶臭味,破伤风芽孢

4、梭菌临床意义,致病物质： 破伤风痉挛毒素，属神经毒素，阻止中枢抑制性神经介质的释放，导致骨骼肌强制性痉挛 所致疾病：破伤风 感染途径：伤口 致病条件：伤口内形成厌氧微环境,破伤风芽孢梭菌检查方法,显微镜检查：菌体形态、芽孢特征 分离培养：厌氧培养，菌落特征 动物实验： 毒力试验： 毒素注射小鼠小鼠出现症状 保护试验： 毒素抗毒素注射小鼠小鼠无症状,产气荚膜梭菌形态与培养,革兰阳性粗大杆菌，有荚膜，芽孢位于菌体中央或次级端，小于菌体，无鞭毛 专性厌氧 血平板菌落特征：圆形、凸起、光滑、湿润，双层溶血环 卵黄琼脂平板：Nagler反应 牛乳培养基：“汹涌发酵”现象 生化反应：生化反应活泼，分解多种

5、糖,产气荚膜梭菌临床意义,致病物质：荚膜、多种毒素和侵袭性酶 所致疾病： 气性坏疽 食物中毒 坏死性肠炎,产气荚膜梭菌检查方法,标本涂片染色镜检：观察形态、染色性、荚膜 分离培养：注意观察双圈溶血环 生化反应：汹涌发酵现象 动物实验： 培养物小鼠腹腔注射处死小鼠培养解剖小鼠肉眼观察泡沫肝涂片染色镜检,肉毒梭菌形态与培养,革兰阳性粗大杆菌，有鞭毛，芽孢位于菌体次级端，大于菌体，呈“网球拍状”无荚膜 专性厌氧 菌落大而不规则；消化肉渣，肉渣变黑，有腐败恶臭,肉毒梭菌临床意义,致病物质：肉毒毒素，为神经毒素，引起肌肉驰缓型麻痹。 毒素分为8个型别，我国以A型最多见 所致疾病 肉毒食物中毒 婴儿肉毒病

6、,肉毒梭菌检验程序,标本,分离培养,可疑菌落,毒素测定,疱肉培养,革兰染色,生化反应,毒素测定,肉毒梭菌检验方法,标本采集：可疑食物、呕吐物等 分离培养：疱肉培养、分离培养 毒素测定 毒素定性检验： 毒素注射小鼠小鼠出现症状 毒素抗毒素注射小鼠小鼠无症状 毒素型别鉴定： 鉴定依据：形态、芽孢特征、疱肉培养物、肉毒毒素,艰难梭菌,革兰阳性粗大杆菌、芽孢位于菌体次级端，无荚膜 严格厌氧 在果糖卵黄琼脂平板上形成粗糙的黄色菌落 脂酶、卵磷脂酶 人和动物肠道中的正常菌群 肠道菌群失调时可引起伪膜性肠炎 粪便标本直接涂片检查见优势生长的革兰阳性粗大杆菌并有芽孢，具有诊断价值,革兰阴性无芽孢厌氧菌,类杆菌

7、属 肠道和女性生殖道主要菌群 临床最重要的无芽孢厌氧菌 普雷沃菌属 卟啉单胞菌属 梭杆菌属：菌体细长，两端尖细，中间膨大，革兰染色可见菌体中有紫色颗粒,革兰阳性无芽孢厌氧菌,丙酸杆菌属 痤疮丙酸杆菌寄居人和动物皮肤、皮脂腺等部位，与痤疮有关 优杆菌属 乳杆菌属：女性生殖道主要正常菌群 双歧杆菌属：人和动物肠道中重要的正常菌群，对维持人体内微生态平衡发挥重要作用,厌氧性球菌,消化球菌属：革兰阳性球菌 消化链球菌属：革兰阳性球菌 韦荣球菌属：革兰阴性球菌,测验1,正常人肠道中数量最多的细菌是 A 大肠埃希菌 B 乳酸杆菌 C 粪肠球菌 D 无芽孢厌氧菌 E 芽孢厌氧菌,测验2,在无芽孢厌氧菌感染中

8、，临床标本检出阳性率最高的是： A 脆弱类杆菌 B 双歧杆菌 C 丙酸杆菌 D 梭形杆菌 E 消化链球菌,测验3,下列对厌氧要求不严格的细菌是 A 双歧杆菌 B 产气荚膜梭菌 C 破伤风梭菌 D 艰难梭菌 E 产黑色素类普雷沃菌,测验4,下列哪种细菌是条件致病菌 A 脆弱类杆菌 B 淋病奈瑟菌 C 溶血性链球菌 D 肠产毒素性大肠杆菌 E 乙型副伤寒沙门菌,测验5,在牛乳培养基产生“汹涌发酵”现象的是 A 破伤风梭菌 B 产气荚膜梭菌 C 肉毒梭菌 D 艰难梭菌 E 诺维梭菌,测验6,关于艰难梭菌特点错误的是 A 革兰阳性粗大杆菌 B 为肠道内正常菌群 C 在组织和培养时不易形成芽孢 D 是伪

9、膜性肠炎最常见的病原菌 E 所致疾病与长期使用抗生素有关,测验7,菌体细长，两端尖细，中间膨大，菌体中常有紫色颗粒（革兰染色），可能的细菌是 A 产气荚膜梭菌 B 具核梭杆菌 C 放线菌 D 双歧杆菌 E 脆弱类杆菌,Nagler反应,在卵黄琼脂平上，产气荚膜梭菌产生的卵磷脂酶分解卵磷脂，菌落周围出现白色混浊圈；若培养基中加入相应抗体，则不出现混浊。此现象成为Nagler反应。,“汹涌发酵”现象,产气荚膜梭菌在牛乳培养基中分解乳糖产酸使酪蛋白凝固，同时产生的大量气体使凝固的酪蛋白冲成蜂窝状，气势凶猛，成为“汹涌发酵”现象。,破伤风梭菌,双圈溶血环,产气荚膜梭菌革兰染色,肉毒梭菌革兰染色,气性坏

10、疽,破伤风,支 原 体,概念：支原体是一类缺乏细胞壁、形态上呈高度多形性、可通过滤菌器，并能在无生命培养基中生长繁殖的最小的原核细胞型微生物。,形态染色,无细胞壁，能通过滤菌器 高度多形性 革兰阴性，不易着色 常用吉姆萨染色，呈淡紫色,培养特性,细胞膜含胆固醇 营养要求高 二分裂繁殖为主 生长缓慢 “荷包蛋”样菌落,生化反应,分解葡萄糖糖：生殖道支原体、肺炎支原体 不分解葡萄糖、利用精氨酸：人型支原体、口腔支原体等,肺炎支原体,其顶端结构能黏附宿主上皮细胞 从宿主细胞膜获取营养，并产生有毒代谢产物，或引起超敏反应，使细胞损伤 多经呼吸道感染 引起原发性非典型性肺炎,泌尿生殖道感染支原体,种类：

11、 人型支原体、生殖道支原体、溶脲脲原体 传播途径： 性传播 垂直传播 所致疾病： 非淋病性尿道炎 早产、流产,微生物学检查,分离培养：菌落特征、形态观察、生化反应 冷凝集试验：检测冷凝集素 PCR技术：采用基因扩增技术检测支原体的DNA,支原体与细菌的区别,立克次体,立克次体是一类严格细胞内寄生的原核细胞型微生物。 是引起斑疹伤寒、恙虫病、Q热的病原体。,立克次体共同特点,大小介于细菌和病毒之间，革兰染色阴性，多呈球杆状 专性细胞内寄生 以节肢动物为传播媒介 多引起人畜共患病 对抗生素敏感,生物学特性,形态染色：球杆状、常用Giemsa染色，在感染的细胞中排列不规则 培养方法：动物接种、鸡胚接

12、种、细胞培养 抗原构造：与变形杆菌OX菌株有共同抗原（用于外斐反应）,致 病 性,致病物质 内毒素：与细菌内毒素毒性作用相似 磷脂酶A :溶解宿主细胞膜和溶酶体膜 致病机制:侵犯小血管内皮细胞，,节肢动物叮咬,侵犯小血管 内皮细胞,第一次菌血症,侵犯全身 小血管内皮细胞,第二次菌血症,高热 头痛 皮疹,所 致 疾 病,普氏立克次体,所致疾病：流行性斑疹伤寒 传染源：病人 传播媒介：人虱 传播方式：,人虱,人虱,人,人,流行性斑疹伤寒传播方式,所致疾病：地方性斑疹伤寒 传染源：鼠等 传播媒介：鼠蚤 传播方式：,莫氏立克次体,鼠,鼠,鼠蚤,鼠蚤,人,地方性斑疹伤寒传播方式,鼠虱,免疫性,以细胞免疫

13、为主 病后免疫力牢固,微生物学检查,标本采集：血液 分离培养: 接种豚鼠 血清学试验：外斐反应,衣原体,是一类能通过细菌滤器、严格的细胞内寄生、有独特发育周期的原核细胞型微生物。,衣原体共同特征,革兰阴性、圆形或椭圆形 有细胞壁 有独特的发育周期，二分裂繁殖 细胞内寄生 对抗生素敏感 种类：,沙眼衣原体 肺炎衣原体 鹦鹉热衣原体,生物学特性,形态染色与发育周期： 原体（感染型） 始体（繁殖型） 培养特性： 专性细胞内寄生 鸡胚卵黄囊接种,致病性与免疫性,致病物质 内毒素 、外膜蛋白 所致疾病 沙眼 包涵体性结膜炎 非淋病性泌尿生殖道感染 性病淋巴肉芽肿 呼吸道感染 免疫性：病后免疫力不牢固,微

14、生物学检查,直接镜检: 结膜病灶刮片Giemsa染色，查包涵体 免疫荧光染色查衣原体 碘液 分离培养 鸡胚卵黄囊接种 核酸检测,螺旋体,是一类细长、柔软、弯曲呈螺旋状、运动活泼的原核细胞型微生物。 种类： 钩端螺旋体 疏螺旋体 密螺旋体,特 征,有细胞壁 有DNA 和RNA 以二分裂方式繁殖 对抗生素敏感,钩端螺旋体,引起钩端螺旋体病,生物学性状,形态染色 细长、螺旋细密、两端弯曲如钩 常用Fontana镀银染色，染成棕褐色 运动活泼 培养：适宜温度2830，常用柯氏培养基，生长缓慢 抵抗力：一般，对青霉素敏感，在水中存活时间长,致病性,致病物质： 溶血素、细胞毒因子、内毒素样物质 所致疾病：

15、 钩端螺旋体病人畜共患疾病 传染源：鼠类、猪 传播途径：经粘膜或破损皮肤 经胎盘传播,临床特征: 钩体血症：“眼红腿疼淋巴大；寒热酸痛一身乏” 临床类型： 流感伤寒型 黄胆出血型 肺出血型 肾功衰竭型等,免疫性,病后对同型钩体有牢固免疫力 以体液免疫抗感染为主,尿、血标本,镜检,分离培养,血清学鉴定,动物试验,检测核酸,微生物学检查,微生物学检查,血清学诊断 检测特异性抗体,显微镜凝集溶解试验,酶联免疫吸附试验,防治原则,防鼠、灭鼠，加强对带菌家畜的管理 流行地区易感人群接种疫苗 治疗首选青霉素,梅毒螺旋体,是引起梅毒的病原体 梅毒属性传播疾病,生物学性状,形态染色:两端尖直、螺旋细密规则、运

16、动活泼 培养特性：不易人工培养 抗原性： 特异性抗原:刺激机体产生特异性凝集抗体 复合抗原：刺激机体产生梅毒反应素 抵抗力:极弱，对青霉素、四环素等敏感,致病性,致病物质：荚膜样物质、粘多糖酶 所致疾病梅毒 后天梅毒经性接触传染 临床分期 一期梅毒：外生殖器硬性下疳 二期梅毒：全身梅毒疹 三期梅毒：皮肤粘膜溃疡、侵犯内脏器官或组织 先天梅毒经胎盘传给胎儿 胎儿表现为流产、死胎 出生后表现为锯齿形牙、鞍形鼻等,免疫性,以细胞免疫为主 抗磷脂抗体（梅毒反应素）对机体无保护作用，仅供血清学试验。,微生物学检查,硬性下疳、梅毒疹 渗出液,镜检梅毒螺旋体,血清标本,非特异性试验,查梅毒反应素,特异性试验,测定梅毒螺旋体 特异性抗体,防治原则,加强性卫生教育和严格社会管理。 梅毒确诊后