《疫学检测方法》PPT课件.ppt

1、免疫学检测方法、免疫学检测方法主要包括酶联免疫吸附检测和放射免疫技术。牙齿方面的研究取得了长足的发展。牙齿方法操作简单，字典处理简单，检测快速、准确、灵敏，检测成本低，检测容量大，可以同时进行批量样品检测。因此，具有潜在的广泛应用价值。免疫学检测技术是近年来发展起来的新技术，主要应用于放射免疫技术、免疫酶技术、免疫荧光技术、免疫前景技术等多个领域。10多年前，一些研究者开始将放射免疫和免疫酶技术用于食品农药残留检测，取得了巨大成功。、3在这些检查技术中，核心反应都是抗原抗体反应。抗原是指所有具有抗原性的物质。抗体(又称免疫球蛋白)是抗原刺激机体而产生的李晟球蛋白。抗原(完全抗原)应包括免疫原性

2、和反应原性两个茄子特征。免疫原性是指能刺激机体产生抗体或诱导机体形成免疫反应反应的特性。反应原性是指能与诱导的抗体或致敏淋巴细胞反应的特性。完全抗原是蛋白质等大分子物质(分子量大于L万)。一种抗原只有反应原性，没有免疫原性，就称为不完全抗原(抗原)，这通常是一些小分子物质(分子量低于1000)，与其他大分子物质结合才能具有免疫原性。各种农药属于这种物质，没有免疫原性，因此农药残留免疫学方法比在医学等领域检查致病微生物等完全抗原的免疫学方法复杂得多。农药残留酶联合免疫，首先连接农药和载体蛋白，形成农药1体蛋白结合物免疫源，才能为免疫动物准备抗体。因此能否合成稳定、免疫原性好的农药一体蛋白结合物是

3、整个农药残留免疫学检测技术研究的关键。农药免疫学检测技术的原理、农药免疫学检测中最常用的两种茄子固相免疫技术是固相放射免疫技术和酶联免疫检测技术。固相放射免疫技术采用显示抗原和未知抗原竞争限量的固相抗体结合点，然后测量抗原-抗体结合物的放射性强度变化，确定未知抗原的存在和含量。酶联免疫(ELISA)，ELISA在适当的载体中通过酶标记量抗原和未知抗原竞争固相抗体结合点或固相抗原和未知抗原竞争限量的标记抗体结合点形成抗体复合物。在特定基质的参与下，复合物中的酶催化基质，将其还原为水解、氧化或其他着色物质。酶的分解基质与发色成正比，因此用眼管或分光光度法测定，以确定是否存在未知抗原或含量。但是辐射

4、免疫技术包括使用辐射物质和经常准备辐射标记物，检查设备也比较昂贵，因此被比较安全和方便的ELISA方法代替的情况越来越多。、利用免疫技术进行农药定量检测时，需要准备标准曲线，之后可以根据准备的标准曲线定量农药残留。免疫原的合成及酶表抗原的制备、农药作为抗原没有免疫原性，因此在准备抗体之前，必须先合成农药一体蛋白结合物免疫酶源。由于各种农药分子结构不同，研究人员使用的方法也不同，但大多数情况下，农药分子没有连接反应团，因此农药分子必须先诱导，然后通过连接物与载体蛋白连接。常用的体蛋白包括牛血清白蛋白、人血清白蛋白、卵清蛋白等。农药衍生和连接的化学反应条件不能导致反抗源分子结构发生明显变化。否则抗

5、原性会发生变化。另外，准备的反抗源结合物要在免疫动物面前测定结合物中的反抗源数。结合中抗原分子数量太多或太少，导致抗体的能力很差。用于合成农药中蛋白质结合物的方法不引起酶不活性，一般用于连接酶和农药分子，准备酶标记农药抗原。(威廉莎士比亚、农药、农药、农药、农药、农药、农药、农药、农药)抗农药抗体的制备，抗农药的多克隆抗体利用农药单体蛋白结合物、直接免疫兔子等动物，每月增强免疫，获得6个月左右能获得满意效价的抗血清。结合物免疫原性弱的话，要免疫一年才能得到满意的效价抗血清。多克隆抗体的特点是生产成本低，生产方法简便，但其特性随动物种类和个人差异而变化，生产数量也受到限制，不利于大量商品试剂盒的

6、生产。单克隆抗体可以用毒素载体蛋白结合物对老鼠免疫，然后制造杂交细胞系进行生产。单克隆抗体的生产成本高，技术复杂，但特性稳定，交叉反应少，可以大量生产，在产品试剂盒中很有价值。食品农药残留免疫学检测技术的应用，10多年前开始尝试将免疫学技术应用于食品农药残留检测后，食品农药残留免疫学检测技术研究取得了很大进展，报道了大量检测农药(杀菌剂、除草剂、杀虫剂)的研究文献。检查的食品范围包括水果、蔬菜、饮料、啤酒、葡萄酒、鱼、肉、猪油、牛奶、植物油、蜂蜜、豆类、谷物和谷物加工产品等。牙齿方法不仅可以用于定性筛选，还可以用于定量分析。其检查水平在很多农药中可以达到纳克(ng)或皮克(pg)的水平。另外，

7、还开发了其他经检验的商品试剂盒，可以用于食品中部分农药的残留检测。美国相关官方机构(如环境保护局(EFA)、农业部食品安全检查师(PSISUSDA)和AOAC制定了工厂农药残留免疫学检查商品试剂盒评价和认可的建议指南。随着农药残留免疫学检测技术的不断改进和商品化，免疫学检测技术成为食品农药残留和食品安全质量控制的有效快捷的检测手段。关于除草剂农药残留免疫学检测技术研究的文献报告(国内尚未看到相关研究报道)简述了方法类型、检测限制、抗体类型、食品范围检测、农药种类检测等相关情况，还列举了已经应用的商品试剂盒。农药残留免疫学检测技术与传统的色谱、质谱方法相比，所需的设备很简单(例如，ELISA方法

8、需要一个酶标)。或者，添加检查设备后，直接用眼睛判定就可以了。适合现场应用，字典处理程序简化(不需要净化)，检查快，检查容量大的检查成本低。液体食品(如牛奶、果汁、蔬菜果汁等)一般不需要字典处理，可以直接进行抽样检查。检查工作可以在几十分钟到几小时内完成，净化和浓缩可以进一步提高检查限制。固体食品(如谷物等萃取剂的萃取、浓缩、溶于水溶液)可以进行取样检查，净化检查工作(字典处理除外)可以在几十分钟到几小时内完成。检查容量，试管法一次最多可以同时分析10个以上的样品，使用磁铁技术，一次可以同时折叠3040个样品微量酶标记法(96孔)，同时折叠44个样品，形成曲线。在免疫学检测技术中，农药和抗农药抗体反应很特殊，但牙齿反应敏感性特别高，有时气质成分会稍微妨碍农药和抗农药抗体的结合。这时参考缓冲溶液准备的标准曲线，会产生低假阳性反应，妨碍检查结果。这种情况可以用不含农药的样品提取物制作标准曲线，消除干扰，或通过高倍数稀释样品提取物来消除，但后者同时可以降低检查敏感性。免疫学检测系统中的抗农药抗体对与结构无关的靶抗原农药有很高的特异性，但与农药结构检测密切相关的农药或正在检测的农药的代谢产物可能与抗宿主农药抗体有不同程度的交叉反应。如果样品中存在牙齿物质，农药的定量检测将下降到半量或定性酒剑。但是从另一个角度来看，牙齿相互反应特别有用。使用牙齿交叉反应，可以使用抵抗杀虫剂的抗体