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文档简介

1、学习实验二细菌的简单染色和革兰氏染色，主要学习：徐尔尼生命学学院生物技术系，一、目的和要求1，微生物涂膜染色的基本技术，掌握细菌的简单染色和革兰氏染色方法。 2 .了解革兰氏染色法原理及在细菌分类鉴定中的重要性。 3 .掌握无菌操作技术，加强油镜的使用。 二、基本原理1、简单染色法简单染色法是用染料染色细菌的方法。 我经常用碱性染料染色。 因为当碱性染料电离时，该分子的染色部分带有正电荷，与带有负电荷的细菌细胞球结合，容易使细菌着色。 碱性染料有美蓝、结晶紫、盐化学基性复红等。 细菌产酸降低培养基的pH值时，细菌带正电荷增加，可以使用酸性染料。 酸性染料有伊红、酸性复红、刚果红等。 2、革兰氏

2、染色革兰氏染色用两种染料染色细菌细胞球，初染采用结晶紫，再染采用番红。 g菌：细胞贴壁厚，肽聚葡萄糖含量高，几乎不含脂质，肽聚葡萄糖分子交联度密，经乙醇处理后，肽聚葡萄糖的网眼经脱水明显收缩，降低墙壁的通透性，留下结晶紫碘复合物，细胞呈紫色。 g菌：由于细胞贴壁薄，肽聚葡萄糖含量低，脂质含量高，肽聚葡萄糖分子稀疏，经乙醇处理后，墙壁出现大缝隙，细胞球通透性增大，结晶紫碘元素复合体易溶出，并用番红染色后，细胞变成红色。 三、实验器材1、菌种：普通变形杆菌、表皮葡萄球菌2、染色剂：简单染色液(吕氏盐化学基性美蓝染液)革兰氏染色液(草酸铵结晶紫染色液、卢戈碘元素液、95%乙醇、番红染色液) 3、仪器

3、或其他用具：载玻片、生理盐溶液、酒精灯、接种环、沥青胶、二甲苯， 显微镜、擦镜纸、滤纸等四个，操作步骤1，简单染色涂片干燥固定染色1min水洗干燥镜检查2，革兰氏染色涂片干燥固定结晶紫初染1min水洗碘元素液媒染1min水洗95%乙醇脱色30sec水洗番红复染1min水洗镜检查操作要点：掌握乙醇脱色时间。 基于、葡萄球菌、杆菌、五、实验数据及处理结果1、油镜观察结果，描绘普通变形杆菌和表皮葡萄球菌的简单染色形态图。 2 .将普通变形杆菌和表皮葡萄球菌的革兰氏染色油镜观察结果(菌的形态、颜色、革兰氏染色反应)归纳如下。 六、思考和讨论1、如果你的涂膜没有被加热固定，会发生什么样的问题？如果加热温度过高或时间过长，会发生什么样的情况2、革兰氏染色时、初染前可以加入碘元素液吗？ 乙

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