IRF-3简介.ppt

1、IRF-3干扰素调节因子3,1.IRF-3结构与功能,IRF-3基因定位于19q，编码427个氨基酸，分子量为55kD。IRF-3属于螺旋-转角-螺旋蛋白质，由不同的功能结构域组成。,从N端到C端依次为DNA结合结构域(DBD，第 1-134位)、转录活化结构域(TAD，第134-394位) 和反应结构域(RD，第382-427位)。,TAD包含核定位序列(NLS)、核输出序列(NES)、脯氨酸富含区 (Pro)和IRF相关结构域(IAD),TAD的两侧是2个能相互作用的自身抑制结构域(AID)，分别位于IRF-3 C端的第380-427位和第98-240位。在IRF-3未受刺激时，AID彼此

2、相互作用掩盖TAD，防止IRF-3移位至细胞核，并与核内的DNA结合。,IRF-3在非感染细胞中存在于胞内，在胞质中不与其他蛋白质结合，以单体非活化形式存在。一旦受到上游信号转导，如病毒感染、双链RNA的刺激，IRF-3被磷酸化激活，分子内部的自我抑制域被打开，形成同二聚体或与IRF-7形成异二聚体后进入细胞核，与共同活化因子CBP/p300结合发挥转录活性。磷酸化后的IRF-3与-干扰素启动子结合，可显著增高病毒介导的I型IFN的表达。,2.IRF-3的磷酸化,IRF-3的活化依赖于病毒诱导的磷酸化。 目前认为IRF-3 C末端的两个部位，即385和386位丝氨酸以及396-405位的丝苏氨

3、酸磷酸化与病毒诱导的IRF-3活化有关。若将385和386位的丝氨酸残基用丙氨酸代替，可导致IRF-3对刺激物的无反应性。,IRF-3磷酸化与其活性发挥密切相关。IRF-3 C末端的磷酸化可解除AID的相互作用导致IRF-3构型发生变化,暴露出lAD(自身抑制结构域)和DBD(DNA结合结构域),促进IRF-3二聚化和与IRF-3 DNA结合位点的5-GAAACGCCGAANT/C-3序列结合。同时,IRF-3 C末端的磷酸化也是IRF-3与CBP/p300结合所必需的。,Triggering the Innate AntiviralResponse through IRF-3Activati

4、on,文章重点介绍IRF-3、IRF-7的激活机制和生理功能。,IRF-3,型干扰素的诱导特异性是通过IRF转录因子家族成员实现的。 IRF-3转录活性受到病毒和dsRNA介导,C端磷酸化受到丝氨酸385和386位,以及丝氨酸/苏氨酸396和405之间的调控,通过IKK相关激酶TBK-1和IKK介导。,IRF-7,IRF-7基因定位于染色体11p，人IRF-7由503个氨基酸组成，是有转录活性的多功能蛋白，像IRF-3一样，依赖C 端磷酸化。 IRF-7的氨基端含有一个由115个氨基酸组成的可与DNA结合的结构域( DBD), 该结构域含有5个色氨酸的重复序列, 与Myb蛋白的DBD结构域相似

5、。除了DBD，IRF-7在C端区域有多个调节活性的区域。尤其是在C端氨基酸471和487之间是病毒诱导磷酸化的一个靶点。,在病毒感染的早期,IRF-7 C端磷酸化,磷酸化的IRF-7转移至细胞核内,与IRF-3共同诱导干扰素早期基因和迟到基因表达,最终导致IFN表达出各种活跃的生物活性; 在感染的晚期,IRF-7被磷酸化入核, 诱导 IFN-、IFN-的大量表达,从而激活抗病毒基因的表达, 起到抗病毒的作用。,IRF-3和IRF-7 靶基因激活,人IFN，IFN1和RAN-TES（激活正常T细胞表达和分泌的调节）启动子被IRF-3共表达刺激，然而IFN4，7和14启动子都优先的仅被IRF-7诱

6、导。 DNA结合位点选择研究显示 IRF-3和IRF-7结合在病毒诱导基因的5 -GAAAN-NGAAANN-3共有序列上。,用腺病毒作为载体，将IRF-3转导入巨噬细胞中可导致细胞快速死亡。 IRF-7转导入巨噬细胞可产生型干扰素并增强TRAIL, IL-12, IL-15, 和CD80基因编码的表达。说明IRF-7转导入巨噬细胞可在不同癌症细胞中突出抑制活性，显示IRF-3或IRF-7在原始巨噬细胞中有不同的分子凋亡和抗肿瘤基因程序。,IRF-3和IRF-7在IFN抗病毒应答体内的要求,实验显示：细胞缺乏IRF-3 和IRF-7的表达在很多病毒感染情况下型干扰素不能被诱导分泌；缺乏IFN的应答，要使其恢复，需要两种蛋白质的共表达，这显示 IRF-3 和IRF-7在确保IFN/基因转录的必要性。,用IRF-7-/-小鼠，通过病毒介导和TLR依赖的信号途径诱导型干扰素。显示在IRF-7-/-小鼠中，IFNmRNA的诱导完全被抑制，IFNmRNA水平降低，在IRF-3 /IRF-7都被敲除的MEFs中完全检测不到IFN 。同样，在IRF-7-/- MEFs血清中IFN水平严重降低。,IRF-3活性的负调节,IRF-3直接受肽基脯氨酰异构酶Pin1的负性调节。刺激dsRNA磷酸化的IRF-3丝氨酸339-脯氨酸340与P