抗生素备课 第六章 种子制备和菌种保藏.ppt

1、第六章种子准备和菌种保存，第一节概述1，种子准备种子准备是抗生素发酵生产的第一个工序。种子准备：利用生产菌种在一定条件下扩大繁殖，成为具有一定质量和数量的纯种，用于生产抗生素。第二，菌种保存要适当保存菌种，以保持菌种的优良性能和菌种生产能力。沙孢子，冷冻孢子，斜面孢子，种子(液体)，种子(固体)，种子罐，发酵罐，种子罐，第二节种子准备包括两个茄子过程：1，孢子准备：大孢子生产2，奶昔，培养时间：取决于菌种，一般有4-7天，14天。孢子成熟后，5在冰箱里保存备用品。存档时间：通常在一周内，小数可以存档13月。b，真菌：孢子培养大部分使用大米、小米、麦麸等天然培养基。首先，在斜面上恒温培养保存在冷

2、冻管或沙土管中的孢子，等孢子成熟后，制作孢子悬浮液，然后接种到大米或小米培养基中，成熟后成为“亲美”，从“亲美”转移到大米或小米培养基中，成熟后成为“生产美”。用“大米生产”连接到种子桶。培养温度：25-28培养时间：4-14日，准备的大米或小米孢子，5保存在冰箱或从大米或小米孢子中提取水分，保存在水分含量10%以下。C，细菌类在斜坡上培养培养温度：37小时：12天以上，野菜56 (2)影响牙齿孢子质量的因素和A原材料的质量影响(产地、品种、加工方法、成分用途等)B培养条件的影响(如温度、相对湿度)C为了缩短种子桶培养周期，稳定种子质量，可以摇动孢子，用菌丝培养，然后进入罐内。这是奶昔烧瓶的种

3、子。第三，种子罐种子在种子罐中制造孢子悬浮或奶昔烧瓶种子，然后在罐中繁殖，用大量菌丝过程繁殖，缩短发酵罐中菌丝的生成时间，增加合成抗生素时间。在生产现场准备种子时，要考虑以下几点。1、种子桶级数的确定种子桶级数是指准备种子需要逐步培养的次数。种子罐供水取决于以下事实：(1)菌种生长特性(2)孢子数(3)孢子萌发和菌丝繁殖速度(4)发酵罐容积二次发酵，即一级种子扩大青霉素、四环素等培养。三级发酵，即次种子扩大红霉素、庆大霉素等培养。4级发酵，即3级种子扩大链霉素等培养。种子供水越少，有助于简化工艺和控制，多次接种，减少造成污染的机会。2.接种年龄是指从种子桶中培养的菌丝体转移到下一等级的种子桶或

4、发酵桶中的培养时间。接种年龄适合于菌丝处于生命力很旺盛的代数生长期，培养液中菌体还没有达到最高峰的时候。3.接种量是指移动的种子液体积与接种后培养液体积的比例。最佳接种量为715%。4，培养条件好的培养条件，如培养基营养成分齐全，使用方便，N元丰富，P含量高于发酵剂，糖要略低。在培养过程中，通气搅拌，溶解氧控制都很重要。第三节菌种保存1，目的(1)维持菌种活力(2)维持菌种优良特性2，原理根据菌种的生理生化特性创造条件，使细菌的代谢活动不活跃。，保存时(1)选择优秀的服从，一般选择休眠体(如孢子、孢子等)。(2)然后创造最有利的环境条件，例如低温、干燥、缺氧、营养物质不足等。好的保存方法：器官

5、保存菌种的优良特性方法经济简便，方法(1)定期移植保存1，原理营造低温环境，减少菌种的新陈代谢活动能力，使菌种的特性在一定时间内基本保持稳定。2、方法在5，70%湿度下保存干燥的菌种。间隔再培养一次。3.优点和缺点(2)液体石蜡封口法将杀菌的液体石蜡放入良好细菌的斜面管试管，防止培养基内水分蒸发，切断培养物和氧气的接触，减少微生物的代谢活动，减缓细胞老化，延长保存时间。(c)真空董洁干燥保存1，温度低，即-15以下的原理，快速冻结细胞，使用保护剂使细胞保持完整，然后在真空中升华水分。在这种环境下，微生物的生长和代谢都暂时中断，很难发生变异。因此，微生物一般可以保存大约5年。2、方法首先将微生物

6、制成悬浮液，然后与保护剂(如脱脂牛奶)混合，然后放入安丘管内，在低温下快速冷冻，低温下用真空泵抽出，最后将安丘管熔化，低温保存。保护剂：一般使用脱脂牛奶或血清。在冷冻干燥脱水过程中，代替结合水稳定细胞膜的结构，防止细胞膜因冻结而破坏。3，优点和缺点保存效果好，不易发生变异，能长期维持菌种。需要一定的设备要求，操作要严格。否则操作不当会导致菌体死亡。(4)液氮低温保存法近年来发展起来的方法是适用范围最广的保存方法，保存时间最长。1.原理微生物在-130的低温下所有代谢活动中断，生命延续，微生物菌种长期保存。保留期：515年。2.方法以510%的甘油DMSO制作孢子显液或菌显液。将牙齿显液注入安瓿

7、管密封。使用专用制冷温度调节器，将每1min 1的速度从0降低到-35，然后取出，直接放入液氮内。必要时，将安瓿从液氮中取出，立即放入38-40温水浴中，轻轻摇动直到融化，迅速接种。3，优缺点，一般保存经济价值高的菌种。(5)砂土管保存法1，方法按1: 2混合处理的砂和土，砂土管中1厘米高，分棉塞121灭菌1h，间歇灭菌3-5次。把孢子挂在沙土管里抽真空。干燥后4在冰箱里保管。适用于芽孢杆菌、放线菌和丝状真菌。四节菌种保存机构的介绍菌种是一个国家的重要生物资源，因此菌种保存是重要的菌物学工作。随着科学技术的发展和生产的发展，菌物资源的利用不断扩大，菌种保存工作显得更加重要。为此，一些发达国家设有相应的菌种保存机构。其任务是广泛收集实验室和生产菌种，便于不朽、不枯萎、无序、研究、更换和使用。以下是国际上规模较大的菌种保存机构。美国典型的培养物保存所(ATCC，American Type Culture Collection，Maryland，USA)美国农业部北方地区研究中心(NRRL，North Ron Regen)。ag