新生隐球菌的致病机理.ppt

1、CHANGZHENG HOSPITAL, SHANGHAI,隐球菌病的致病菌,C,C,.,a,Life Cycle,MATa X MATa,Blood stream,Brain,Cryptococcosis: Route of infection and dissemination,隐球菌病,病原菌:,新生隐球菌,感染途径 :,吸入，皮肤，胃肠道？,分布 :,世界范围,脑、肺、皮肤、骨和关节,HIV, 淋巴瘤, 激素治疗, 器官移植 原发性CD4 淋巴细胞减少,未治疗的脑膜炎死亡率为100%,易感因素 :,易感器官：,预后 :,新生隐球菌的毒性因子,荚 膜 黑 素 磷脂酶 37 下生长良好,新

2、生隐球菌致病机理中几个关键问题,新生隐球菌是如何穿过血脑屏障后进入中枢神经系统的？ 为什么新生隐球菌易于感染中枢神经系统？ 新生隐球菌进入机体的途径是否只有吸入肺部后入血一个？,新生隐球菌通过血脑屏障的机制研究,人脐静脉内皮细胞（HUVEC）建立血脑屏障模型，观察新生隐球菌对HUVEC的影响 新生隐球菌静脉感染C57BL/6小鼠后，检测大脑皮质内新生隐球菌感染情况，大脑皮质内细胞凋亡及大脑皮质中特异蛋白的表达,Mouse model of cryptococcosis,血脑屏障模式图,紧密连接,血脑屏障,病原体,1,2,3,1: 细胞内侵袭,2: 细胞旁通过打开紧密连接,3:,木马机制：通过巨

3、嗜细胞穿越,ECM,巨嗜细胞,病原体穿越血脑屏障的方式,HBMEC 单层,半通透膜,Filter- insert,脑侧,血液侧,新生隐球菌,检测新生隐球菌通过血脑屏障的体外模型,新生隐球菌对血脑屏障内皮细胞凋亡的影响,A: 对照组 B: 2h C: 6h D: 12h 新生隐球菌侵袭血脑屏障EC细胞的凋亡率,新生隐球菌侵袭血脑屏障透射电镜,A: 对照组 B: 0.5h C: 0.5h D: 0.5h E: 0.5h F: 6h G: 6h H: 12h,新生隐球菌侵袭血脑屏障EC扫描电镜结果,A: 对照组 B: 2h C: 6h D: 12h,HUVEC Bcl-2(抑凋亡基因)的表达被抑制,

4、A：对照组 B：2h C：6h：D：12h,HUVEC Bax (凋亡基因)的表达被启动,A：对照组 B：2h C：6h：D：12h,新生隐球菌对血脑屏障紧密连接通透性的影响,HUVEC 紧密连接相关蛋白表达,紧密连接胞质附着蛋白 ZO-1,血管渗透因子VEGF,IL-6,新生隐球菌对C57BL/6小鼠大脑皮质作用研究,大脑皮质PAS染色 A：C group B：CTX group C：0.5h D：2h E：6h F：12h G：24h H：72h,大脑皮质透射电镜 A：C group B：24h C：72h D：C group E：24h F：72h,新生隐球菌对C57BL/6小鼠大脑皮质

5、作用研究,小鼠大脑皮质Bcl-2在不同时相点的比较,不同时相点的小鼠大脑皮质凋亡细胞比较,不同时相点的小鼠大脑皮质Bax比较,新生隐球菌对C57BL/6小鼠大脑皮质作用研究,初步结论,新生隐球菌入血后到达血脑屏障， 通过相关细胞因子如IL-6和VEGF等作用引起脑微血管内皮细胞的凋亡， 紧密连接开放，细胞间隙增大，并可能使血脑屏障完整性被破坏， 穿越血脑屏障，感染宿主脑组织,隐球菌脑膜炎发病机制,新生隐球菌的跨膜作用 穿越脑微血管内皮细胞紧密连接 脑微血管内皮细胞凋亡 其它相关因子导致的通透性的增加,新生隐球菌嗜中枢性的研究,利用蛋白质组学技术分析新生隐球菌与血管内皮细胞共孵育后血管内皮细胞蛋

6、白质谱的变化 筛选差异表达蛋白，并在基因的转录层面进行验证,血管内皮细胞总蛋白差异表达谱,实验组蛋白二维凝胶电泳图谱,对照组蛋白二维凝胶电泳图谱,实验组与对照组细胞蛋白表达差异,共找到可信差异表达蛋白点19个 5个蛋白点仅在对照组细胞中表达 3个蛋白点仅在实验组细胞中表达 10个蛋白点在实验组细胞中表达降低 1个蛋白点在实验组细胞中表达升高,差异表达蛋白点肽指纹谱鉴定,S100A10 Prx Prohibitin (PHB) HSP27 Malate dehydrogenase CacyBP PSA7_HUMAN cofilin,隐球菌嗜中枢性可能的相关机制,增强细胞骨架活动能力，促进细胞胞吞

7、胞吐活动 减少HUVEC对氧应激的耐受能力，细胞损伤增加，增殖能力下降 促进细胞凋亡 影响了HUVEC正常的细胞内信号转导过程 抑制细胞能量代谢,皮肤隐球菌感染的研究,小鼠原发性皮肤隐球菌感染模型的建立 宿主免疫状态、隐球菌变种和荚膜与皮肤隐球菌感染的关系 小鼠隐球菌皮肤感染后是否发生播散 人角质形成细胞株HaCat体外与新生隐球菌相互作用,小鼠原发性皮肤隐球菌感染模型,传染性软疣样皮损,溃疡,结节样皮损,PAS染色,小鼠隐球菌感染后的血行播散,免疫抑制与免疫正常小鼠各个脏器及血液真菌培养均为阴性 免疫抑制小鼠血清乳胶凝集试验阳性 乳胶凝集试验是目前比较成熟的技术，在去除试验本身因素影响后，其阳性率接近100 免疫严重受损的患者，皮肤局部创伤后大剂量接种隐球菌还是可能引起播散性的隐球菌感染,隐球菌皮肤致病性中的影响因素,免疫抑制的作用可以使隐球菌感染皮损出现时间提前，感染加重。 无荚膜株与父代有荚膜株在皮肤的致病力方面没有明显差别 两个变种之间的致病力没有显著差别,新生隐球菌与角质形成细胞的体外相互作用,透射电镜观察新生隐球菌与角质形成细胞的作用,角质形成细胞中的B3501， 可见菌体正在出芽。,角质形成细胞中的cap64， 可见菌体中出现空泡。,新生隐球菌触发角质形成细胞表面蛋白酪氨酸残基磷酸化,空白