AKTA-Primer-层析系统在天然产物分离中-实验.ppt

1、AKTA Primer 层析系统的应用技术,专业基础实验,Principles of Operation for Chromatography Techniques,现代柱层析技术的原理,Gel Filtration,Ion Exchange,Hydrophobic Interaction,Affinity,Reversed Phase,基本知识,层析介质,硅胶 氧化铝 聚酰胺 大孔树脂 分子筛凝胶 离子交换凝胶 亲和层析介质 反相层析介质,基本知识,AKTA-分离和纯化各类生物分子,天然蛋白质 重组和融合蛋白质 肽类 寡核苷酸 质粒 病毒 抗生素 生物碱, TCM 。等等,基本知识,AKTA

2、 Primer 系统组成,AKTA Prime + PrimeView,AKTA Primer,AKTA Prime 主机,AKTA Primer,AKTA Prime 主机,AKTA Primer,AKTA Prime 流程图,AKTA Primer,AKTA Prime 流程图,面板操作按钮及简要操作命令,面板操作按钮,面板操作按钮,按OK进入子菜单； 按ESC退到上级菜单； 按上下箭头，可选择菜单命令、调整参数等。,面板操作按钮,分布收集器前进一管,停止程序或方法运行,梯度运行过程中，按此键，系统将保持当前浓度运行，而流速和分步收集继续，再按一下，继续梯度运行,按此键，系统暂停运行，包括

3、泵和收集，再按一下，继续,操作命令简介,主菜单,预编好的方法模板,运行保存的方法,手动运行,编辑方法,将方法拷入电脑或拷回,检查系统状态,设定系统参数,子菜单 以Manual Run为例：,操作命令简介,单位 ml、min,浓度 %B,收集单位 ml、min、drop,收集数量 （每管）,限压 （保护层析柱） MPa,缓冲阀位 1-8,样品阀位 waste、load、inject,开始,梯度 （长度ml/目标浓度%B）,流速 ml/min,PrimeView软件系统-数据采集,AKTA Primer,运行曲线图谱（Curve）： 记录系统采集到的全部数据，系统开始运行后，自动开始记录，结束后，

4、自动保存。,运行日志（Logbook）： 记录系统收到的所有指令,AKTA Primer,PrimeView数据采集,选择浏览曲线及设定曲线颜色,设定X，Y轴的坐标范围,AKTA Primer,实验题目蛋白质脱盐,实验目的 1.了解层系技术的理念，基本操作和应用 2.掌握分子筛层析的原理，了解其用途； 3.熟悉AKTA Prime 的操作。 实验原理,实验的基本内容,实验材料,层析介质 葡聚糖凝胶G25 分离对象 脱除含1M硫酸铵的小牛血清中的盐 实验试剂 0.15M的氯化钠溶液,实验注意事项,设置限压0.3MPa。 排尽注射器内的空气，从上样阀注入样品环，注射器放在原位不拔出。,实验思考题,蛋白质分离纯化的方法有哪些？请列举2种以上，并阐述其原理。 利用凝胶层析法分离混合样品时，怎样才能得到较好的分离效果？ 现有含谷氨酸(Glu)、甘氨酸（G