药物分析课件 第二章 药物的鉴别试验.ppt

1、第二章药物的鉴别试验,第一节 概述,药物分析主要有三大项：鉴别、检查和含量测定。 依据：根据药物的化学结构和它的理化性质，分别采用化学、物理化学或生物学方法来判断药物的真伪。 适用范围：已有标识的已知药物的真伪,第二节 鉴别试验项目,一、性状 1、外观：聚集状态、晶形、色泽以及臭、味等 例：药典对盐酸吗啡的描述为：本品为白色，有丝光针状结晶或结晶性粉末，无臭，遇光易变质 2、溶解性： 在一定程度上反映了药物的纯度,溶解度测定方法：,准确称取研成细粉的供试品或量取液体供试品（准确度为2%），加入一定量的溶剂，在252下，每隔5min强力振摇30秒，观察30min内的溶解情况，如看不到溶质颗粒或液

2、滴时，即视为完全溶解 药典中采用“极易溶解、易溶、溶解、略溶、微溶、极微溶、几乎不溶或不溶”描述药品在不同溶剂中的溶解性能。,3、物理常数,（1）熔点 定义：熔点是指一种物质按照规定方法测定，由固体熔化成液体的温度、熔融同时分解的温度、或在熔化时从初熔到全熔的一段温度。,重要的指标,适用范围：测定熔点的药品应该是遇热晶型不转化、它的初熔点和终熔点容易分辩的药品。 某些药品具有一定的熔点。 测定方法： 第一种：易粉碎的固体药品 第二种：不易粉碎的固体药品 第三种：凡士林或其他类似的物质 测定熔点的装置、升温速度、药品放入传温液中时的温度、熔点测定管内径的大小、药物的干燥程度、传温液、观察的要求等

3、不同都会影响熔点测定的结果。,未注明者指第一法,严格按药典规定要求操作,注意事项： 毛细管管径的影响： 测温用温度计要校正 注意加热方式 三个定义： 初熔供试品在毛细管内开始局部液化，出现明显液滴时的温度 全熔供试品全部液化时的温度 熔融同时分解指某一个药品在一定温度产生气泡、变色或浑浊等现象,（2）比旋度,基本概念 旋光度:直线偏振光通过含有某些光学活性的化合物液体或溶液时，能引起旋光现象，使偏振光的平面向左或向右旋转，旋转的度数，称为旋光度。 比旋度:偏振光透过长ldm且每lml中含有旋光性物质1g的溶液，在一定波长与温度下测得的旋光度称为比旋度。 比旋度的应用 A、用于鉴别药物或检查药物

4、的纯杂程度 B、用于含量测定,基本原理 中国药典 (2005年版)规定：采用钠光谱的D线 (589.3nm)测定旋光度，除另有规定外，测定管长度为1dm，测定温度为20。 公式一：对液体供试品，则: 公式二：对固体样品,则：,d：液体的相对密度,C：每100ml溶液中含有被测物质的中重量，g,测定方法 读数方法: 用相同法读取旋光度3次，取3次的平均数，按公式计算供试品的比旋度。 注意事项 重复校正 温度：调节温度至200.5 保证溶液澄清,（3）折光率测定,基本原理 i光的入射角 r折射角 可进行鉴别、检查纯杂程度或测定其含量。 测定方法 注意事项 采用钠光D线 (589.3nm)测定供试品

5、相对于空气的折光率 ，除另有规定外，供试品温度为20 折光计读数至0.0001，测量范围:1.31.7,(4)粘度测定,粘度：粘度系指流体对流动的阻抗能力。 中国药典把粘度分为以下三种: 动力粘度、运动粘度、特性粘数。 平氏粘度计：适于测定牛顿流体的 动粘度或动力粘度 测定方法 旋转式粘度计：适于测定非牛顿流 体的动力粘度 乌氏粘度计：适于测定高聚物溶液 的特性粘度,(5)吸收系数,在给定的波长、溶剂和温度等条件下，吸光物质在单位浓度、单位液层厚度时的吸收度称为吸收系数。 是吸光物质的重要物理常数 有两种表示方式:摩尔吸收系数和百分吸收系数,(6)pH值的测定,注意事项： （1）测定前，按各品

6、种项下的规定，选择两种pH 值约相差3 个pH 单位的标准缓冲液，并使供试液的pH 值处于两者之间。 （2）取与供试液pH 值较接近的第一种标准缓冲液对仪器进行校正（定位），使仪器示值与表列数值一致。 （3）仪器定位后，再用第二种标准缓冲液核对仪器示值，误差应不大于0.02pH 单位。 若大于此偏差，则应小心调节斜率，使示值与第二种标准缓冲液的表列数值相符。 重复上述定位与斜率调节操作，至仪器示值与标准缓冲液的规定数值相差不大于0.02pH 单位。,（4）每次更换标准缓冲液或供试液前，应用纯化水充分洗涤电极，然后将水吸尽，也可用所换的标准缓冲液或供试液洗涤 （5）配制标准缓冲液与溶解供试品的水

7、，应是新沸过并放冷的纯化水，pH 值应为5.57.0 （6）标准缓冲液一般可保存23 个月，但发现有浑浊、发霉或沉淀等现象时，不能继续使用,二、一般鉴别试验,一般鉴别试验：是依据某一类药物的化学结构或理化性质的特征，通过化学反应来鉴别药物的真伪。 特点为： 是证实药品是某一类药物的依据 是根据药物所具有的性质或结构进行药物的真伪鉴别 例：无机药物根据其组成的阴、阳离子的特殊反应 有机药物采用典型官能团反应,只能确定供试品为某一类药物，而不能证实它是哪一种药物,一般鉴别试验的项目,丙二酰脲类、托烷生物碱类、芳香第一胺类、有机氟化物类、 无机金属盐类（钠盐、钾盐、锂盐、钙盐、钡盐、铵盐、镁盐、铁盐

8、、铝盐、锌盐、铜盐、银盐、汞盐、铋盐、锑盐、亚锡盐）、 有机酸盐（水杨酸盐、枸橼酸盐、乳酸盐、苯甲酸盐、酒石酸盐）、 无机酸盐（亚硫酸盐或亚硫酸氢盐、硫酸盐、硝酸盐、硼酸盐、碳酸盐与碳酸氢盐、醋酸盐、磷酸盐、氯化物、溴化物、碘化物）,有机氟化物的鉴别,第一步：有机氟化物无机氟化物 第二步：无机氟化物+不同试液呈色的配位化合物 例：F- + 西素氟蓝 + 硝酸亚铈 蓝紫色配位化合物（pH4.3） 注意：必须做空白对照试验，消除干扰。,氧瓶燃烧法,碱性溶液吸收,茜素氟蓝、硝酸亚铈,有机酸盐：（1）水杨酸盐（两种方法）,第一法：三氯化铁的呈色反应 鉴别方法 注意： A.该反应极灵敏 B. pH值对反

9、应的呈色有影响,中性时呈红色 弱酸性时呈紫色 强酸性溶液中， 溶液褪色。,有机酸盐（1）水杨酸盐（两种方法）,第二法：沉淀生成反应 反应原理：利用水杨酸盐和水杨酸溶解性质的差异来鉴别 提示：苯甲酸盐和水杨酸盐属于同类药物，试验方法相似。,有机酸盐（2）酒石酸盐,反应原理: 鉴别方法:取供试品的中性溶液，置洁净的试管中，加氨制硝酸银试液数滴，置水浴中加热，银即游离并附在试管内壁成银镜。,中性,芳香第一胺类,反应原理：,-奈酚试液要现用现配,不同的供试品，会生成橙黄色到猩红色沉淀,无机金属盐-钠盐、钾盐、钙盐的鉴别试验,(1)焰色反应 测定原理：不同的金属离子的火焰光谱的谱线不同，所以呈色有所区别

10、：,鉴别方法:取铂丝，用盐酸湿润后，在无色火焰中燃烧不呈色后，再蘸取供试品，燃烧，火焰即显各离子的特征颜色,无机金属盐（2）其它鉴别试验, 钠盐： 供试品 + 醋酸氧铀锌试液 黄色沉淀 钾盐 供试品 + 0.1%四苯硼钠溶液与醋酸 白色沉淀 钙盐 供试品 + 草酸铵试液 白色沉淀 不溶于醋酸 溶于盐酸,中性溶液,炽灼，以除去可能含有的铵盐,甲基红指示液2滴，用氨试液中和，再滴加盐酸至呈酸性分离，pH4,三、专属鉴别试验,根据每一种药物化学结构的差异及其所引起的物理化学特性的不同，选用某些特有的灵敏定性反应，来鉴别药物真伪的。 是证实药物是某一种药物的依据 能区别同类药物或具有相同化学结构部分的

11、各药物单体，达到最终确认药物真伪的目的,例：巴比妥类药物的鉴别： 一般的鉴别试验：利用药物所具有丙二酰脲母核 专属的鉴别试验：各种药物的取代基不同，可用于鉴别 苯巴比妥含有苯环，可以和NaNO2-H2SO4反应 司可巴比妥含有双键，可以使碘液褪色 硫喷妥钠含有硫原子，有硫元素的反应,第三节 鉴别方法,一、化学鉴别法 1、干法鉴别 焰色反应： 利用药物中所含有的某些元素所具有的特异焰色，使火焰显出特殊的颜色。 加热分解:在适当的温度条件下，加热使供试品分解，生成有特殊气味的气体。,2、湿法鉴别,（1）利用呈色反应鉴别 三氯化铁呈色反应:含有酚羟基或水解后产生酚羟基的药物 异羟肟酸铁反应: 芳酸及

12、其酯类、酰胺类药物 茚三酮呈色反应: 化学结构中含有脂肪氨基药物 重氮化-偶合反应: 含有芳伯氨基或能产生芳伯氨基的药物 氧化还原显色反应及其它颜色反应。,2、湿法鉴别,（2）沉淀生成反应鉴别法 与重金属离子的沉淀反应: 与硫氰化铬铵(雷氏盐)的沉淀反应: 其它沉淀反应,2、湿法鉴别,（3）利用气体生成反应鉴别 可经强碱处理后加热产生氨气：用于胺类、酰脲类以及某些酰胺类药物 可经强酸处理后加热产生硫化氢气体：用于化学结构中含硫的药物 经直火加热，可生成紫色碘蒸气：含碘有机药物 经硫酸水解后加醇可产生醋酸乙酯的香味：含醋酸酯和乙酰胺类药物,2、湿法鉴别,(4)荧光反应鉴别法 药物本身可在可见光下

13、发射荧光 药物溶液加硫酸使呈酸性后，在可见光下发射荧光 药物和溴反应后，于可见光下发射出荧光 药物和间苯二酚反应后，发射出荧光及药物经其它反应后，发射荧光。,二、光谱鉴别法,1、紫外光谱鉴别法 (1)测定最大吸收波长，或同时测定最小吸收波长（max=？min=？） (2)规定一定浓度的供试液在最大吸收波长处的吸收度（在C和max处，A应为某一值） (3)规定吸收波长和吸收系数法;（在某处，E或应为某一值） (4)规定吸收波长和吸收度比值法;（A1/A2应在某一范围内） (5)经化学处理后，测定其反应产物的吸收光谱特性,2、红外光谱鉴别法,红外光谱法专属性高、特征性强，是用于鉴别单一组分、结构明

14、确的原料药的首选方法。尤其适用于同类药物的不同药物单体的鉴别 标准图谱对照法：中国药典（2005年版） 制样方法：压片法、糊法、膜法、溶液法,三、色谱鉴别法,原理：利用不同物质在不同色谱条件下，有各自不同的特征色谱行为(保留时间或保留体积)进行鉴别试验。 （1）薄层色谱鉴别法： （2）高效液相色谱和气相色谱鉴别法 （3）质谱法 （4）高效毛细管电泳法,四、生物学法 生物学法是利用微生物或实验动物进行鉴别的方法。,第四节 鉴别试验条件,1、溶液的浓度 例：对离子反应颜色： 如被测离子的浓度太低，与试剂作用产生的颜色太浅，不易鉴别 可以浓缩 如供试品的浓度太高，与试剂作用产生的颜色过深，也不易鉴别

15、 可以稀释 水杨酸及盐与三氯化铁反应，供试品浓度过大时，颜色不易判断，要稀释。,2、溶液的温度 温度对化学反应的影响主要通过改变反应的速率产生的。 一般温度每升高10，可以使反应速度增加24倍。,3、溶液的酸碱度 适宜的酸碱度的目的是使反应物处于反应的活化状态，而生成物处于稳定和易于观测的状态。 例：沉淀反应 从酸性溶液中不可能析出能溶于酸的沉淀 从碱性溶液中不可能析出能溶于碱的沉淀 对于一些能溶于酸、碱溶液中的生成物，只能在中性条件下测定,4、试验时间 无机反应：是离子反应，依靠离子间的静电引力，所以结合比较快 有机反应：一般是分子间的反应，反应速度决定于分子间不规则的碰撞，所以比较慢。除此之外，有机反应比较复杂，有时要加催化剂才能完成。 5、干扰