hbv基因与耐药检测临床版

1、产品经理 吴 勇,HBV分型和耐药突变基因检测,产品经理 吴 勇,一、慢性乙肝患者抗病毒治疗的临床现状 二、基因芯片原理、亚能HBV分型与耐药突变基因检测 三、HBV分型与耐药突变基因检测的运用与临床意义,目 录,一、乙肝患者抗病毒治疗的临床现状,耐药 指南 策略,干扰素：普通干扰素（2a、2b、1b）、 聚乙二醇干扰素（2a、2b） 核苷（酸）类药物：拉米夫定、阿德福韦酯、 恩替卡韦、替比夫定,药物种类有限,我国CHB治疗现状,2012年EASL、APASL乙肝防治指南建议: ETV或TDF作为单药一线用药 国内难以普及： 强调根据情况个体化选药，患者依从性差,国情 差异,干扰素：PegIF

2、N 1年病毒学应答率25%，HBeAg血 清学转换率30%，血清HBV DNA阳性率高； 耐药问题:核苷（酸）类药物,疗效 有限,慢性乙型肝炎联合抗病毒治疗专家共识，中国肝脏病杂志，2011，3（2）：38-45,耐药的危害,导致疾病进展（病毒学反弹、生化突破等）,肝硬化和肝癌发生率高,使已取得的疗效（如组织学改善）丧失,后续治疗更复杂、困难，增加医疗成本,耐药毒株的传播可能导致公共卫生问题,警惕 耐药,HBV耐药,EASL Clinical Practice Guidelines :Management of chronic hepatitis B virus infection. Jour

3、nal of Hepatology 2012 vol.57|167-185,核苷（酸）类药物耐药的预防和治疗,慢性乙型肝炎防治指南（2010年）,严格掌握治疗适应症,谨慎选择核苷（酸）类药物,高危患者及时联合治疗,治疗中密切监视，一旦耐药尽早救援治疗,尽量避免单药序贯治疗,生物化学检查：血清ALT和AST、胆红素、白蛋白等,乙肝实验室检查,HBV血清学检查：HBsAg、抗HBs、HBeAg等乙肝两对半,HBV DNA、基因型和变异检测,生物化学检查：血清ALT和AST、胆红素、白蛋白等,HBV血清学检查：HBsAg、抗HBs、HBeAg等乙肝两对半,HBV DNA、基因型和变异检测,生物化学检

4、查：血清ALT和AST、胆红素、白蛋白等,HBV分型与耐药突变检测方法,PCR产物直接测序法； PCR产物克隆测序法； 限制性片段长度多态性技术(RFLP)； 线性探针反向杂交法(INNO-LiPA)； 基因芯片技术 限制性片段质谱多肽性分析 焦磷酸测序法 深度测序法,二、基因芯片原理、 亚能HBV分型与耐药突变基因检测,基因芯片(gene chip)：是多种特定的寡核苷酸序列为探针，固定于支持物表面上而成的二维DNA阵列。 基本原理：利用碱基互补配对原则，通过目的DNA与探针特异结合来判断目的DNA的序列信息。,基因芯片原理,乙型肝炎病毒分型和耐药突变基因检测试剂盒 （PCR-反向点杂交法）

5、,注册号：国食药监械（准）字2011第3401177号 专利号：ZL200710073933.3,国内首个全面提示核苷（酸）类药物耐药的快速诊断试剂,PCR扩增：在S基因和P基因重叠区段设计PCR引物，PCR扩增片段既包含耐药突变位点又能进行基因分型。,P基因：耐药突变检测 编码DNA合成酶（包含逆转录酶rt），抗病毒药物作用靶区，耐药基因突变热点区S基因：分型检测,产品技术原理,亚能HBV产品应用,抗病毒治疗前、治疗中HBV的基因分型和耐药突变基因检测,区分我国常见的HBV-B、C、D基因型 涵盖我国4种核苷（酸）抗病毒药物（拉米夫定、阿德福韦酯、 替比夫定、恩替卡韦）7个耐药位点的16种突

6、变：rtL180M、rtM204V/I、rtA181V/T、rtN236T、rtM250I/L/V、rtS202G/I、rtT184I/S/A/F/L。,本产品检测的样本为血清或血浆； 要求待检样本的HBV DNA载量1.0103copies/mL。,样本要求,样本保存,为了避免DNA降解，制备好的血清或血浆，避免长时间室温放置； 28保存不超过48小时；-18以下保存不超过半年，避免反复冻融。,注意事项,HBV耐药检测产品比较,三、HBV分型与耐药突变基因检测 的运用与临床意义,HBV基因型检测临床意义,HBeAg阳性患者中，B基因型对IFN-治疗的应答率高于C基因 型，A基因型高于D基因型

7、。 与C基因型感染者相比，B基因型感染者较早出现HBeAg血清学 转换，较少进展为慢性肝炎、肝硬化和原发性肝细胞癌；,预测干扰素应答和疾病进展情况,慢性乙型肝炎防治指南（2010年）,HBV耐药检测临床意义,抗病毒治疗前，预存耐药检测 协助临床选择合理抗病毒药物，实现个体化抗病毒治疗、提高抗病毒疗效、降低耐药发生率。 抗病毒治疗中，全程耐药监测 全程监测耐药，利于早期挽救治疗，为调整治疗方案提供理论支持。,选择合理抗病毒药物，为调整治疗方案提供理论依据,抗病毒治疗前,抗病毒治疗期间,抗病毒治疗效果不佳时,HBV基因分型、耐药检测,何时选择HBV基因分型、耐药检测？,预存耐药检测，实现治疗个体化

8、,LAM、ADV 、ETV预存耐药率分别为7.81%、7.81%、1.56%,预存耐药 慢性乙型肝炎患者在核苷(酸)类似物治疗前即存在耐药位点突变，即预存耐药变异。,盖洪鹏，孙伟翔，袁德胜，等，预存耐药对核苷（酸）类似物抗病毒治疗应答和耐药的影响， 临床肝胆病杂志，2012，28（11）：841-844,预存耐药检测显著提高CHB患者 HBV DNA 转阴率、HBeAg/抗HBe转换率,盖洪鹏，孙伟翔，袁德胜，等，预存耐药对核苷（酸）类似物抗病毒治疗应答和耐药的影响， 临床肝胆病杂志，2012，28（11）：841-844,48周HBeAg/抗-HBe转换率,P 0.05,48周HBV DNA

9、 转阴率,P 0.05,预存耐药检测，显著提高临床疗效,抗病毒治疗中的监测(线路图）,治疗第12周评估是否存在“原发性无应答”,病毒学应答： HBV DNA 较基线下降10IU或50拷贝/ml,原发性治疗失败： HBV DNA 较基线下降 10IU或 50拷贝/ml,患者依从性良好： 加用更强的抗病药物,患者依从性不佳： 督促劝说坚持治疗,治疗24周评估疗效的早期预测因子,完全病毒学应答： PCR检测 HBV DNA 阴性,部分病毒学应答： 60IU/ml HBV DNA 2000IU/ml,不充分病毒学应答： HBV DNA 2000IU/ml,以同一药物继续治疗，每6个月监测一次,基因屏障

10、低的药物：加用基因变异特点不同的第二种药物,基因屏障高的药物：每3个月监测一次并在48周后继续监测,抗病毒能力相对低的药物：每3个月监测一次并在48周后继续监测,加用更强的抗病毒药物：每3个月监测一次,若第48周获得完全病毒学应答，则继续治疗,若第48周未获得病毒学应答，则加用一种更强且无交叉耐药的药物,Keeffe，et al.Clinical Gastroenterology and Hepatology，2007，5：890897,耐药基因位点变异与临床挽救治疗方案,抗病毒治疗耐药检测节点,抗病毒 治疗前,部分病毒学应答、不充分病毒学应答者,治疗24周,治疗12周,评估是否原发无应答,疗效早期 预测,后每12周监测一次,抗病毒治疗过程中效果不佳时： 需及时进行HBV耐药突变检测，调整用药。,预存耐药,国内首个全面提示核苷（酸）类药物耐药的快