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文档简介
1、Light Initiated Chemiluminescence Assay,光激化学发光(LiCA),光激化学发光(LiCA)介绍,以高分子微粒为基础 两种微粒近距离 离子氧能量传递 主要特点: 高灵敏度 低本底 稳定 均相 免洗 广泛应用于生物分子间的相互作用,微粒的组成,感光微粒内含感光化合物 发光微粒内含发光化合物和镧系元素 微粒直径188nm,表面覆盖水凝胶 共价连接 增大的表面积 成百上千个生物分子,捕获目标分子,LiCA发光原理,核心原理是能量的近距离转移 转移的介质是高能态离子氧 红色激光680nm照射,感光微粒释放离子氧(4微秒),传播直径200nm,发光微粒(520618
2、nm),高能级的光 反应的基础有赖于两种微粒的相互接近 反应体系中,微粒的浓度很低,碰撞机率很低,本底信号微弱,原理 (1),原理 (2),LiCA的技术特点(一),高灵敏度 信号产生逐级放大的结果 每个感光微粒释放出近6万个离子氧 离子氧作用于二甲基噻吩,产生大量紫外光 紫外光激发镧系元素 实际检测能力为10-15摩尔 理论检测能力为10-18摩尔,LiCA的技术特点(二),低本底 时间分辨模式采集光信号(延迟150 ms),天然荧光的寿命小于100 ns 采用680 nm红光激发,生物样品中的荧光物质不敏感 发射光的波长比激发光的波长短,能量更高,有别于荧光,有效避免荧光物质干扰,稳定 均
3、相环境使反应更充分 免洗操作杜绝随机误差和交叉污染 感光和发光的有机分子受到微粒的保护,环境稳定和安全 溶液中的氧浓度是一个常数 不易受到pH值、离子强度和温度的影响,LiCA的技术特点(三),临床免疫的各项检测 生命科学的基础研究 新药的筛选 标记简便 检测过程简单,广泛应用,基本包被模式,GG-Streptavidin(SA),FG- Antibody(Ab),基本反应模式,biotin-antigen,primary Ab,secondary Ab (or protein A, G, LA),应用类型,配体受体 激酶 蛋白蛋白 免疫 蛋白酶 蛋白DNA,配体受体(1),TNFa-sTNF
4、R1,Biotin,anti-TNFR1 IgG,FG,-TNFa,Protein A-,sTNFR1,配体受体(1),TNFa-sTNFR1,GG-SA,Biotin,anti-TNFR1 IgG,FG,-TNFa,Protein A-,sTNFR1,配体受体(1),TNFa-sTNFR1,GG-SA,Biotin,anti-TNFR1 IgG,FG,-TNFa,Protein A-,sTNFR1,配体受体(2),环磷酸腺苷 cAMP,Biotin,FG,- cAMP,anti-cAMP-,配体受体(2),环磷酸腺苷 cAMP,GG-SA,Biotin,FG,- cAMP,anti-cAMP
5、-,激酶,Akt,Biotin,anti-Gsk3 IgG,FG,-Gsk3,Protein A-,激酶,Akt,Biotin,anti-Gsk3 IgG,FG,-Gsk3,Protein A-,激酶,Akt,GG-SA,Biotin,anti-Gsk3 IgG,FG,-Gsk3,Protein A-,Akt,磷酸化,激酶,Akt,GG-SA,Biotin,anti-Gsk3 IgG,FG,-Gsk3,Protein A-,Akt,蛋白蛋白,Biotin,FG,-p53,Anti-GST-,p53/HDM2,HDM2-,GST,蛋白蛋白,GG-SA,Biotin,FG,-p53,Anti-GS
6、T-,p53/HDM2,HDM2-,GST,免疫(1),肿瘤坏死因子 TNFa,Biotin,FG,- anti-TNFa,anti-TNFa-,TNFa,免疫(1),肿瘤坏死因子 TNFa,GG-SA,Biotin,FG,- anti-TNFa,anti-TNFa-,TNFa,免疫(2),Biotin,anti-TNFa,FG,-anti-TNFa,Protein A-,TNFa,肿瘤坏死因子 TNFa,GG-SA,免疫(2),GG-SA,Biotin,anti-TNFa,FG,-anti-TNFa,Protein A-,TNFa,肿瘤坏死因子 TNFa,蛋白酶(1),GG-SA,Bioti
7、n,FG,- substrate,anti-digoxigenin-,组织蛋白酶 Cathepsin D,- digoxigenin,Cathepsin D,水解,蛋白酶(2),ACE,Biotin,FG,- angiotensin I,anti-angiotensin II-,ACE,切割,蛋白酶(2),ACE,GG-SA,Biotin,FG,- angiotensin I I,anti-angiotensin II-,蛋白DNA,ERa-DNA,Biotin,FG,-ERa,anti-digoxigenin-,-digoxigenin,DNA,蛋白DNA,ERa-ERE,GG-SA,Biotin,FG,-ERa,anti-digoxigenin-,-digoxigenin,DNA,当前成功应用实例,HBsAg,GG-SA,Anti-HBs-FG,HBsAg,Anti-HBs,GG-SA,Biotin-HBsAg,Anti-HBs,HBeAg,GG-SA,Biotin,FG,-Anti-HBe,Anti-HBe-,HBeAg,Anti-HBe,GG-SA,Biotin,FG,-Anti-HBe,Anti-HBe-,中和HBeAg,Anti-HBc,GG-SA,Anti-HB
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