送检病料的注意事项.ppt

1、送检病料的注意事项,上海农场生产技术服务中心 吴中彬,一、送检病料的选择,1、采集发病初期，临床症状明显的，未用抗生素（1周内）治疗的发病猪只,采病料的时间应在病猪死后的数小时内进行（冬季6小时内、夏季4小时内）。 2、怀疑某种疾病时，应采取该病常侵害的部位。 3、提不出怀疑对象时，可以将整个病猪送检。 4、败血性传染病，如猪瘟、败血性链球菌病，可以采取心、肝、脾、肺、肾、淋巴结以及胃肠等组织。,一、送检病料的选择,5、专嗜性传染病或侵害某种器官为主的传染病，则采取该病侵害的主要器官组织，如猪大肠杆菌病采取肠管以及肠内容物，有神经症状的传染病采取脑、脊髓等。 6、检查疫苗免疫效果时，则需采取血

2、液，待凝固析出血清后用于检测。,二、病料采集的注意事项,1、解剖前检查：凡发现病猪急性死亡时，切不可随便解剖。未解剖前，必须由末梢血管采血（或局部采血）作涂片，检查是否患有炭疽杆菌。操作时应特别注意，勿使血液污染他处，以防传播和对人体的伤害。当确定不是炭疽时，方可解剖。,二、病料采集的注意事项,2、采集器械的消毒：采集用的刀柄、刀片、剪刀、镊子等用具可以煮沸30分钟，然后用酒精棉球擦拭，并在火焰上烧一下。器皿在高压灭菌器内或干燥箱内灭菌；软木塞或橡皮塞置于0.5%石炭酸溶液中煮沸10分钟。载玻片应在1%-2%的碳酸氢钠溶液中煮沸10-15分钟，水洗后再用清洁纱布擦干，将其保存于酒精中。注射器和

3、针头放于清水中煮沸30分钟即可。,二、病料采集的注意事项,3、病料采集人员需带好手套，穿上防护服和雨靴，病料采集好后要注意场所和人员（尤其是参与病料采集的饲养员）的消毒，防止人为的扩散病原。 4、每个猪场最好有固定的采集病料的地点，以便消毒和隔离。,三、病料的保存,采取病料后要及时送实验室检测，如病料不能不能立即进行检测，或须送往外地检验时，应加入适量的保存剂，使病料尽量保持新鲜状态，以便得出正确的结果。,二、病料的保存,（一）细菌检测材料的保存 将采取的组织块，保存于饱和盐水或30%甘油缓冲液中，容器加塞封固。 1、饱和盐水配制 蒸馏水100毫升，加入氯化钠38-39克，充分搅拌溶解后，用数

4、层纱布滤过，高压灭菌后备用。,二、病料的保存,2、30%甘油缓冲溶液的配制 纯净甘油30毫升，氯化钠0.5克， 碱性磷酸钠1克，蒸馏水加至100毫升，混合后高压灭菌备用。 （二）病毒检验材料的保存 将采取的组织块保存于50%甘油生理盐水或鸡蛋生理盐水中，容器加塞封固。,二、病料的保存,1、50%甘油生理盐水的配制 中性甘油500毫升，氯化钠8.5克，蒸馏水50毫升，混合后分装，高压灭菌后备用。 2、鸡蛋生理盐水的配制 先将新鲜鸡蛋的表面用碘酒消毒，然后打开，将内容物倾入灭菌的容器内，按全蛋9份加入灭菌生理盐水1份，摇匀后用纱布滤过，然后加热至56 -58，持续30分钟，第二日和第三日各按上法加

5、热1次，冷却后即可使用。,二、病料的保存,（三）病理组织学检验材料的保存 将采取的组织块放入10%福尔马林溶液或95%酒精中固定，固定液的用量须为标本体积的10倍以上。如用10%福尔马林固定，应在24小时后换新鲜溶液1次。严寒季节为防组织块冻结，在送检时可将上述固定好的组织块取出，保存于甘油和10%福尔马林等量混合液中。,二、病料的保存,（四）血清学检测样品的保存 用于血清学检测的样品一般情况下冷藏条件下保存就可以，如有特殊需要，可以将同一血清分装在几个EP管中，除需要检查的一份，其余的冷冻保存（-15）。,三、病料的送检,（一）病料的记录和送检单 1、装病料的容器上要有编号，并详细说明送检样

6、品的情况，附有送检单。 2、送检病料的记录包括：病猪的年龄、性别、发病日期、症状、死亡时间和取材时间，以及送检病猪的免疫情况和治疗情况。,三、病料的送检,（二）病料的包装和运输 一般微生物检测病料怕热，需用泡沫箱装上冰块保存，病理检验材料怕热。 对于送检的血清样品在送检途中要防止剧烈震荡，避免引起溶血，影响检测结果。 病料采集装箱后，要尽快托料车带到动保中心，送外地检测的可以派专人送检。,四、一些常规病料的采集事项,1、全血的采集：在一次性采血器内先吸入灭菌的5%柠檬酸钠1ml，再采血5-10ml，混合后放在试管架上， 2、血清的采取 (1)、用一次性采血器采集2-5ml血液，将采血器的活塞微

7、微拔出一些，使针筒内留有部分空气，然后将一次性采血器摆成斜面，静置于室温或温箱中1-2小时，待血液凝固后放置冰箱（4）或冷暗处，析出的血清装入EP管中，编号用于检测。,四、一些常规病料的采集事项,(2) 或将采得的血液放入离心管中，直立凝固后，经1000-1500转/分 离心5-10分钟以分离出血清。 在采血和分离血清过程中，应防止震荡，过热等，以免引起溶血。 用于血清学检测的样品不要添加任何抗凝剂。,四、一些常规病料的采集事项,3、皮肤的采取：采取病变皮肤的一块，保存在30%的甘油缓冲液中或10%饱和盐水中或10%的福尔马林溶液中。 4、实质脏器的采取：采取心、肝、脾、肺、肾和淋巴结等实质脏

8、器时，应在剖开胸腹后立即采取，如剖开后暴露时间太长有污染的可能时，则应在采取的部位用酒精棉球或烧红的烙铁烧烙后剪去，采取的脏器分别置于灭菌的容器或塑料袋中，编好号。,四、一些常规病料的采集事项,5、肠管的采取：将欲采取肠管的两端用线扎后剪断，也可用烧红的铁片或酒精棉球，将欲采肠管表面烧烙后，剪开一个小口，用灭菌棉拭子刮取肠道粘膜及其内容物，放入灭菌容器中。,四、一些常规病料的采集事项,6、脓汁、鼻汁、阴道分泌物、胸水及腹水的采集：用灭菌棉拭子蘸取后，放入灭菌试管中。对于未破溃脓肿内的脓汁和胸水等，可以直接用灭菌注射器抽取，放入灭菌小瓶中；如脓汁粘稠不宜吸取时，可向脓肿内注入1-2ML灭菌生理盐

9、水或磷酸缓冲液，然后再吸取，操作时，注意勿破坏脓肿壁，以防脓汁扩散。,四、一些常规病料的采集事项,7、脑、脊髓的采取：按病理解剖开颅骨要求打开头盖骨，采取脑、脊髓作病毒检查。应将采得的脑、脊髓浸入50%甘油盐水液中或将整个头颅割下，泡入浸过0.1%升汞液的纱布中，外面最好再用塑料布或油纸包裹，装入泡沫箱内送检。 8、死胎的采取：可将整个尸体用塑料布或数层不透水的油纸包裹，装入泡沫箱内送往实验室。,四、一些常规病料的采集事项,9、尿液的采取：用导尿管无菌采取病猪尿液若干，放入灭菌的玻璃瓶内送检。,五、一些常规疾病的采样检测说明,1、球虫的检查 （1）用载玻片刮取回肠粘膜，在显微镜下观看。 （2）取肠壁组织保存在福尔马林内做组织切片。 2、口蹄疫 无菌采取新鲜、成熟、未破裂、无污染溃烂的水疱皮或水疱液。水疱皮可保存在甘油生理盐水中，供作反血凝及动物试验。,五、一些常规疾病的采样检测说明,3、猪瘟 采死猪的整个扁桃体、脾、肾、淋巴结及有病变的消化道，分别装在容器中供病理检查，酶标试验及分离、培养动物接种，如需抗体检查则采血清，另外采全血也可用于抗原检测。 4、猪丹毒 采死猪的脾、肾、淋巴结或有疹块的皮肤保存在甘油生理盐水中，作细菌学检查，也可采未破溃的淋巴结或病猪耳静脉全血送检。,五、一些常规疾病的采