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文档简介

1、专题3,5,植物组织培养技术,DNA和蛋白质技术,1,植物组织培养技术1。菊花的组织培养,多功能性,(1)理论基础:植物细胞的_ _ _ _ _ _ _ _ _ _。(2)基本过程,外植体、愈伤组织、芽根移植,(3)实验程序,接种、移植,MS培养基外植体消毒准备_ _ _ _ _ _ _ _ _栽培,(3)(,),2,DNA和蛋白质技术1。DNA的粗提取和鉴定,(1)实验原理,其他0.14 mol/L,不,蓝色,1)DNA在不同浓度NaCl溶液中的溶解度2)在DNA_醇溶液中的溶解。3)DNA和二苯胺在沸水浴中_ _ _ _ _ _ _ _。杂质,(2)实验阶段:选择,鸡血细胞液体粉碎细胞制备

2、,含DNA的滤液去除滤液中_ _DNA析出和鉴定。2 .血红蛋白提取和分离,相对分子量, (1)结色谱法:也称为分配色谱法,相对分子质量小的是移动速度慢,而相对分子质量大的是_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ (3)传记电泳:_ _ _ _ _ _ _ _,凝胶内,酸和碱,基本不变电场,大小,(4)实验操作1)样品处理及粗红细胞的清洁血红蛋白释放分离血红蛋白溶液透析,2)凝胶频谱柱操作,凝胶频谱柱充电,凝胶频谱多酶链反应扩增DNA片段,(1)PCR原理,DNA模板,4茄子脱氧核苷酸,在特定缓冲溶液中_ _

3、_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _、耐热DNA聚合酶、体外、复性、PCR扩增包括变性、复性(退火)和扩张三个茄子链接。牙齿三个阶段的温度为(,)、A、A95、55、72 C55和95。在Taq酶的最佳温度(72)下,引物3段作为合成的起点,以单个核苷酸原料沿模板向53方向延伸,合成DNA新链。试验点,植物组织培养,1 .影响植物组织培养的因素(1)内部因素:材料选择。(2)外部因素:营养成分的类型和比例;植物激素使用情况和使用顺序;PH、温度、照明等。2 .成功的关键,(1)用于植物组织培养的植物材料体积小,抵抗力

4、差,例,培养条件要求高。(2)培养物被微生物污染,实验可能失败。原因是微生物增殖快,生长快,养分消耗大,产生代谢废物有毒培养物。(3)无菌技术主要包括操作空间、实验工具、实验材料、操作员消毒或灭菌。3 .在组织培养过程中,植物激素重要作用(1)使用顺序不同,结果不同,(2)使用率不同(生长素多于细胞分裂元素),结果也不同。有利于根的分化,抑制芽的形成。低:有利于芽分化,抑制根的形成。温和:促进愈伤组织的形成。4 .实验工作中需要注意的几个茄子问题,(1)材料的选择:在菊花的组织培养实验中,应选择未开花植物茎上部新萌发的侧枝。在月季花花药的培养实验中,花粉发育过程中,应选择和培养单核马齿苋花粉。

5、,(2)外植体消毒:使用的消毒剂是体积分数为70%的酒精和质量分数为0.1%的氯化汞溶液,使用的清洗液是无菌水。(3)培养过程:初期菊花的组织培养需要光,月季花、培养不需要光,后期需要光。单倍体育种和花药组织培养的差异,花药组织培养形成高度不育的单倍体植株。单倍体育种应组织花药培养的单倍体植物诱导成染色体数目正常的纯合植物,使其具有正常的繁殖能力,然后选择具有优良特性的个体。前1植物微繁殖技术是植物组织培养的范畴。请回答以下问题:(1)牙齿技术是品种_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _的,(3)在微繁殖过程中

6、单独使用适合浓度的生长素,需要抑制试管苗_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _32(4)在不同浓度的蔗糖培养基中培养一株植物的试管苗一段时间后,一株新鲜重量和光合作用强度的变化如下。图分析表明,随着培养基蔗糖浓度的增加,光合作用强度的变化趋势为_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _,(5)根据上图,在诱导试管苗根的过程中,要提高光合作用能力,请培养_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _(填充“减少”或“增加”),问题解决思维植物组织培养技术是利用植物细胞全能的

7、原理进行的,是植物细胞工程的基础。操作过程中要注意无菌操作,避免杂菌污染。因为培养过程中使用的培养基营养素很丰富。适合浓度的生长所能诱导试管苗的根,促进愈伤组织芽的形成,必须与细胞分裂元素成正比。要促进愈伤组织的产生和生长,必须使用2,4D。试验点对应练习1将没有根的非洲菊花幼苗转移到没有植物激素的培养基上。在适当的温度和照明等条件下,培养一段时间后应该出现的现象是(,),B,分析。培养基中没有激素,但幼苗叶片本身可以制造生长素,促进根系。细胞分裂元素的生成部位在根端,因此细胞分裂素不能生产,所以植物在一定时间后可以在没有芽的情况下生长少量的根。大卫亚设,“美国电视剧”,“身体”,“试验点”,

8、“DNA的粗糙提取和感情”,1。实验原理(1)DNA在浓度不同的NaCl溶液中的溶解度不同,变化曲线如下图所示。(2)DNA不溶于酒精溶液,但细胞中的其他物质可以溶于酒精溶液,提取杂质较少的DNA。(。(3)DNA二苯胺,蓝色(用于DNA识别)。2 .实验过程,速记表,3。实验关键,(1)不能采访哺乳动物的血细胞(成熟红细胞不细,细胞核)。(2)获得DNA时,要在鸡血细胞液体中加入足够的蒸馏水,使细胞膜和核膜破裂,释放核物质。(3)实验中搅拌6次,除了最后一次搅拌外,前5次搅拌都要朝一个方向。而且,在溶解DNA,DNA提取和提取DNA的过程中,每个步骤都要轻轻搅拌,玻璃棒不要直接插入烧杯底部,

9、防止DNA分子断裂。威廉莎士比亚,DNA,DNA,DNA,DNA,DNA),(4)添加两次蒸馏水,第一次添加蒸馏水,是为了破裂血细胞吸收膨胀(注:植物,细胞用洗涤剂溶解细胞膜)。第二蒸馏水析出DNA以稀释NaCl溶液。(5)3浓度的NaCl溶液,2 mol/L NaCl溶液分离DNA和蛋白质以溶解DNA。一种是0.14 mol/L NaCl溶液。可以析出DNA。0.015 mol/L NaCl溶液是为了溶解DNA。(6)DNA容易吸附在玻璃容器上,因此最好在实验中使用塑料烘烤,杯子,试管,容器来减少DNA损失。4 .除滤液中杂质的其他方案;(1)方案1:用莲肉粉(蛋白酶)水解蛋白质,但对DNA

10、没有影响。(2)情景2: 60加热到75,大部分蛋白质无法忍受,60 75的高温和变性,DNA无法变性。前2以下的DNA粗提取和感情表达是正确的。(,),在析出A. DNA时,要慢慢添加蒸馏水。析出粘稠物质时不再加水。在探索洗涤剂对植物细胞DNA提取的影响的实验中,参数在洗涤剂和盐c .提取的DNA溶解后添加二苯胺试剂,可以染成蓝色D。将含有DNA的过滤器放入60 75的恒温水浴中,保持温度,过滤后去除蛋白质杂质,在DNA在0.14 mol/L的NaCl溶液中解除最低溶解,用蒸馏水稀释,直到DNA析出量不再增加,在探索洗涤剂对植物细胞DNA提取的影响的实验中,参数是洗涤剂。提取的DNA溶解后,

11、添加二苯胺试剂(DNA)后,应进行加热和分离对照组。答案D,试验点对应练习2在DNA组提取过程中,两次在烧杯中添加蒸馏水,分别(,),B,A稀释血液,冲洗样品B以形成血细胞破裂,降低NaCl浓度,DNA析出C引起血细胞破裂,增加DNA溶解量D引起血细胞破裂,减少杂质二是降低NaCl浓度,释放DNA。试验点,蛋白质提取和分离(以血红蛋白提取和分离为例),1。样品处理(1)红细胞的洗涤(2)释放血红蛋白:由于蒸馏水和甲苯(细胞膜溶解)的作用,红细胞破裂,血红蛋白释放。2.粗分离(1)血红蛋白溶液分离:希望混合好的混合溶液后,用滤纸过滤试管中的液体去除脂溶性沉淀层,在分液漏斗中暂时停止,分离下层红色

12、透明液体。(2)透析:将1毫升的血红蛋白溶液放入投药袋,将透析信封放入300毫升,物质浓度为20毫升/L的磷酸缓冲液,透析12 h,从样品中去除分子量小杂质。3 .精制:血红蛋白精制可用凝胶色谱柱纯化。凝胶,频谱分离蛋白的原理如下表:4。纯度鉴定:最常用的是SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(可以测量蛋白质的相对分子量)。DNA与血红蛋白提取及分离过程比较,前3 (2011年南京市相同)下,对DNA和血红蛋白、提取及分离实验的叙述中错误的是(,)。a可以用蒸馏水膨胀细胞的方法从猪红细胞中提取DNA和蛋白质B,用浓度不同的NaCl溶液反复溶解和析出DNA的杂质C透析法分离蛋白质的依据是,不能利用蛋白质通过

13、半透膜特性D进一步分离和纯化血红蛋白明胶色谱法、离心法、电泳法等。问题解决事故猪红细胞没有核,只能用于蛋白质提取和分离实验。DNA在浓度不同的NaCl溶液中溶解不同,低浓度和高浓度都可以溶解DNA,但在0.14 mol/L的NaCl溶液中溶解度最低,可以沉淀DNA以去除杂质。用透析法分离蛋白质的依据是蛋白质是大分子物质,不能通过半透膜从样品中去除分子量小杂质。,答a,试验点对应练习3在整个血红蛋白提取过程中,持续用磷酸缓冲液处理的目的是(,),d,a .血红蛋白O2抗氧化b .血红蛋白碱性物质需要酸和c .磷酸缓冲液。加速血红蛋白提取过程,使d .血红蛋白在稳定的pH范围内,试验点,PCR反应

14、的过程和结果,1过程(1)变性:温度上升到90以上,双链DNA就会解到单链。(2)复性:当系统温度下降到约50时,两个引物都通过碱基互补配对与两个单链DNA结合。(3)延长:系统温度上升到约72,溶液中4茄子脱酸核苷酸(A,T,G,C)在DNA聚合酶的作用下,根据碱基互补配对原则合成新的DNA链。2 .结果,(1)PCR通常经历30多次循环。每个循环包括变性、复性、扩张。(2)两个引物之间固定长度的DNA序列呈指数增长。3 .细胞内DNA复制和PCR技术的比较,前4 (2011年模拟)聚合酶链反应(PCR)是体外快速扩增DNA片段的技术。PCR过程通常要经历30多次循环,例如模板DNA变性、解

15、离折叠(组合引物和DNA模型链)引物链扩展(形成新的脱氧核苷酸链)。在以下PCR过渡的叙述中,不准确的是(,),在A变性过程中,DNA分子内碱基对之间的氢键破坏,还利用降解酶在B复性过程中引物和DNA模型链的结合,根据碱基互补配对原则,在C扩张过程中与DNA聚合酶,ATP,4茄子核糖核苷酸DPCR牙齿细胞内DNA克隆进行比较。所需酶的最佳温度比较高,问题解决思维变性的目的是破坏DNA分子内碱基对之间的氢键,让DNA解开链,体内可以通过海选酶的作用进行,体外则是高温。引物是脱氧核苷酸的一小块,报复时可以与DNA模型链结合。延长过程需要DNA聚合酶,ATP,4茄子脱氧核糖核苷酸。PCR是体外DNA复制,需要高温才能释放DNA

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