药物分析(第六章).ppt

1、第六章电子手稿，第六章芳香酸的分析，学习目的掌握水杨酸和苯甲酸类药物的化学结构和分析方法之间的关系；鉴别和含量测定方法；特殊杂质的检验方法和杂质限度的计算；两步滴定和两相测定的原理。熟悉紫外分光光度法和高效液相色谱法在芳香酸中的应用。了解其他芳香酸的分析。第六章芳香酸的分析，本章目录，概述第一节水杨酸的分析第二节苯甲酸的分析第六章芳香酸的分析羧基与芳香环直接相连的化合物称为芳香酸。芳香酸及其酯的结构特征是：结构中有羧基、酯键和苯环；有些药物有酚羟基和芳香伯氨基。概述，第6章芳香酸分析，第1节水杨酸分析，水杨酸，结构，理化性质，鉴定，检验，含量测定，第6章芳香酸分析，阿司匹林结构与理化性质的关系

2、，第6章芳香酸酚羟基：氯化铁显色反应，苯环：紫外吸收，水杨酸，第6章芳香酸药物分析，芳香酸贱金属盐：高水溶性，弱碱性，酚羟基，其性质是什么？芳香族伯氨基：重氮化偶合反应，苯环有什么性质？对氨基水杨酸钠，第六章芳香酸的分析，酯键：水解可产生酚羟基和乙酸，酯键：水解可产生酚羟基和羧基，酰胺键：水解可产生芳香伯氨基，苯环，苯环，苯甲酰酯，并返回，第六章芳香酸的分析，一.鉴定试验1。氯化铁反应含有(1)水杨酸：加入1滴氯化铁测试溶液，呈紫色。(2)阿司匹林：煮沸水解后，冷却，加入1滴氯化铁试液，试液为紫色。(3)贝努瓦：加入氢氧化钠试液，煮沸，让其冷却，将滤液调至微酸性，并加入2滴氯化铁试液，呈紫色。

3、第六章芳香酸的分析反应公式如下：本努瓦和阿司匹林需要水解形成水杨酸才能发生这一反应。(紫色)，第六章芳香酸的分析，2。重氮化偶合反应用阿司匹林和对乙酰氨基酚酯化伯努利。加热并在酸性条件下水解，产生对氨基苯酚，该对氨基苯酚作为芳族第一胺反应。试样，稀盐酸，煮沸，冷却，过滤，滤液，猩红色，亚硝酸钠，碱性-萘酚，第6章芳香酸药物分析，第6章芳香酸药物分析，第3。紫外吸收光谱测定法贝诺酯溶液在240纳米波长处有最大吸收，以干产物计算，吸收4。红外吸收光谱法水杨酸、阿司匹林、贝诺特和对氨基水杨酸钠均采用红外吸收光谱法，试样的红外吸收光谱应与对照一致。对氨基水杨酸钠水溶液也能显示钠盐识别反应。第六章芳香酸

4、分析2。阿司匹林的杂质检查阿司匹林原料主要控制的特殊杂质有“溶液澄清”、“水杨酸”和“易碳化”。第六章芳香酸的分析，1。溶液的澄清度本项目主要检测碳酸钠试验溶液中的不溶性杂质。这些杂质是未反应的酚或乙酸苯酯、水杨酸苯酯和乙酰水杨酸苯酯，没有副反应产生的游离羧基。阿司匹林有羧基，溶于碳酸钠测试溶液中。第六章芳香酸的分析。2.阿司匹林合成过程中的不完全乙酰化或储存过程中的水解可产生游离水杨酸。水杨酸对人体有毒性和刺激性，其进一步氧化产物使药物变色，影响药物质量。因此，阿司匹林中的水杨酸应严格控制。中国药典(2010年版)采用高效液相色谱法测定。第六章芳香酸的分析，阿司匹林中游离水杨酸的检测用高效液

5、相色谱法测定。十八烷基硅烷键合硅胶作为色谱条件和系统适用性试验的填料，流动相为乙腈-四氢呋喃-冰醋酸-水(20: 5: 5: 70)。检测波长为303纳米。水杨酸峰计算的理论塔板数不小于5000，阿司匹林主峰与水杨酸主峰的分离度应满足要求。供试品溶液的制备取本品约100毫克，准确称量，放入10毫升容量瓶中，加入适量1%冰醋酸甲醇溶液，摇匀溶解，稀释至刻度，摇匀，即得(使用前新配)。对照品溶液的制备取约10毫克水杨酸对照品，准确称量，放入100毫升容量瓶中，加入适量1%冰醋酸甲醇溶液溶解，稀释至刻度，摇匀；精确测量5ml，放入50ml容量瓶中，用1%冰醋酸甲醇溶液稀释至刻度，摇匀。在测定方法中，

6、立即准确测量10l供试品溶液和10L对照品溶液，将其注入液相色谱仪，并记录色谱图。如果测试溶液的色谱图中出现水杨酸的色谱峰，则应根据外标法用峰面积计算测试溶液中水杨酸的含量，水杨酸的含量不得超过0.1%。第六章芳香酸的分析原则上，制剂不需要反复检查原料药中的杂质，但在制剂的制备或储存过程中可能再次引入的杂质应进行检查和控制。在阿司匹林片剂的制备或储存过程中，由于酯键容易水解，所以会产生水杨酸，因此应检查阿司匹林片剂和栓剂中的水杨酸。第六章芳香酸分析，3。易碳化物质本项目检查被硫酸碳化的低分子有机杂质，第六章芳香酸的分析，(4)用高效液相色谱法测定相关物质(附录D)。色谱条件及系统适用性试验采用

7、十八烷基硅烷键合硅胶为填料，乙腈-四氢呋喃-冰醋酸-水(205570)为流动相A，乙腈为流动相B，线性梯度洗脱按下表进行；检测波长为276纳米。阿司匹林峰的保留时间约为8分钟，阿司匹林峰计算的理论塔板数不小于5000，阿司匹林峰与水杨酸峰的分离度应满足要求。第六章芳香酸类药物的分析取本品约0.1g，准确称量，放入10毫升容量瓶中，加入适量1%冰醋酸甲醇溶液，摇匀使其溶解，稀释至刻度，摇匀得供试品溶液；准确测量1毫升供试品溶液，放入200毫升容量瓶中，用1%冰醋酸甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，得对照品溶液；精确测量10毫升对照溶液，将其放入100毫升容量瓶中，用1%冰醋酸甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，得

8、到灵敏度测试溶液。在水杨酸检测下，准确测量10l供试品溶液、对照品溶液、灵敏度供试品溶液和水杨酸对照品溶液，将其注入液相色谱仪，并记录色谱图。如果供试品色谱中存在杂质峰，则除了单一杂质峰、溶剂峰和水杨酸峰之外，其他杂质峰的总和不得大于对照品溶液的主峰面积(0.5%)，所述主峰面积小于灵敏度供试品溶液中阿司匹林的主峰面积。第六章芳香酸的分析(2)对氨基水杨酸钠中间体氨基酚的检测对氨基水杨酸钠容易被氧化，氧化产物导致药物变色，对人体有毒性作用。有两种方法可以限制中间体氨基苯酚的引入：第一，原料没有完全反应；第二种是对氨基水杨酸钠在热或阳光下的脱羧。第六章芳香酸的分析，检验相关物质在避光条件下操作。

9、取适量本品，准确称量，加入流动相溶解，稀释成每1毫升含0.7毫克的溶液作为供试品溶液；准确测量1毫升供试品溶液，将其放入100毫升容量瓶中，加入流动相此外，准确测量20l供试品溶液、20l对照品溶液A和20l对照品溶液B，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，直至主成分峰的保留时间为3.5倍。如果在供试品色谱中有一个峰的保留时间与间氨基苯酚峰的保留时间相同，则根据外标法，其峰面积含量不得超过0.25%。其它单一杂质峰的面积不得大于参比溶液A主峰面积的1/10(0.1%)，其它杂质峰面积之和不得大于参比溶液A主峰面积的1.0%。第六章芳香酸分析3。内容1的确定。酸碱滴定1。基本原理：阿司匹林的结构中含

10、有羧基和酸性(Ka105)，可以用氢氧化钠滴定溶液直接滴定。滴定产生的乙酰水杨酸钠呈碱性，因此酚酞用作指示剂。第六章芳香酸药物分析，实例分析测量约0.4g阿司匹林原料，准确称量，用20毫升中性乙醇(中性至酚酞指示剂溶液)溶解，然后加入3滴酚酞指示剂溶液，用氢氧化钠滴定溶液(0.1毫升/升)滴定。每1毫升氢氧化钠滴定溶液(0.1毫升/升)相当于18.02毫克C9H8O4。阿司匹林百分含量公式中V:氢氧化钠滴定溶液消耗的体积，毫升；t:效价(18.02毫克)；F:滴定溶液浓度校正系数；w:测试产品的样品量。第六章芳香酸分析注释：(1)中性乙醇：阿司匹林在乙醇中溶解度高，不易水解；乙醇含有微量乙酸和

11、其他物质，因此应使其呈中性(中性至酚酞指示剂溶液)；(2)为了防止滴定过程中阿司匹林水解，一个必须快速滴定，另一个必须剧烈摇动以防止局部碱浓度；(4)滴定终点后，由于乙酰水杨酸钠的逐渐水解，粉色会褪色，所以要注意判断终点。第六章芳香酸的分析。2.除了用高效液相色谱法向阿司匹林肠溶片中加入少量酒石酸或柠檬酸稳定剂外，在制备过程中还会产生水解产物水杨酸和乙酸。如果制剂含量采用直接酸碱滴定法测定，则加入的柠檬酸或酒石酸及水解产物水杨酸和乙酸将被消耗。在中国药典(2010年版)中，阿司匹林制剂、对氨基水杨酸钠原料及制剂、贝诺依特原料及制剂均采用高效液相色谱法制备。以阿司匹林片剂的含量分析为例进行了介绍

12、。第六章芳香酸的分析，用高效液相色谱法测定(附录四)。以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，乙腈-四氢呋喃-冰醋酸-水(20: 5: 5: 70)为流动相，进行色谱条件和系统适用性试验；检测波长为276纳米。阿司匹林峰计算的理论塔板数不小于3000，阿司匹林峰与水杨酸峰的分离度应符合要求。测量方法：取本品20片，准确称量，充分研磨，准确称取适量细粉(约10毫克阿司匹林)，放入100毫升容量瓶中，用1%冰醋酸甲醇溶液强烈摇匀使其溶解，用1%冰醋酸甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，用有机相滤膜(孔径：0.45)过滤，准确测量10l二次滤液。 另外，取约20毫克阿司匹林对照品，精确称量，放入200毫升容量瓶中，用1

13、%冰醋酸的甲醇溶液强烈摇匀溶解，用1%冰醋酸的甲醇稀释至刻度，摇匀，用同样的方法测量。 根据外部标准方法按峰面积计算。第六章芳香酸及其酯类的分析，第二节苯甲酸、苯甲酸及其钠盐的分析，结构、理化性质、鉴别、检验和含量测定，第六章芳香酸的分析，2。羧基，4。苯环，3。芳香酸，1。它的钠盐易溶于水，微溶于乙醇。用于定量的酸度，3。氯化铁的显色反应。共轭双键，紫外吸收，1。溶解度，1。苯甲酸及其钠盐的结构、主要理化性质和分析方法，前前后后，第6章芳香酸类药物分析，2。苯甲酸及其钠盐的分析(一)鉴定。第六章芳香酸类药物分析2。分解产物苯甲酸钠升华试验反应：苯甲酸钠固体，加入硫酸，加热，白色苯甲酸凝结在试

14、管内壁上。该反应记录在中国药典(2005年版)附录“通用鉴别试验”中。3.试样的红外吸收光谱应与对照一致。第六章芳香酸类药物分析(二)含量测定1。苯甲酸直接酸碱滴定的基本原理：苯甲酸具有强酸性，在水中溶解度低，而其钠盐在水中溶解度高，因此可以用中性稀乙醇为溶剂的氢氧化钠滴定溶液直接滴定。最终产物为苯甲酸钠，呈碱性，以酚酞为指示剂。第六章芳香酸的分析，苯甲酸含量的测定取约0.25克苯甲酸，准确称量至0.2478克，加入25毫升中性稀乙醇(中性至酚酞指示剂)溶解，然后加入3滴酚酞指示剂，用氢氧化钠滴定溶液(0.1033毫升/升)滴定，消耗滴定溶液19.72毫升。每1毫升氢氧化钠滴定溶液(0.1毫升

15、/升)相当于12.21毫克C7H6O2。第六章芳香酸类药物的分析：苯甲酸的百分比F苯甲酸的百分比100.4第六章芳香酸类药物的分析2。苯甲酸钠双相滴定的基本原理：苯甲酸钠溶于水，苯甲酸溶于乙醚。在乙醚和水组成的两相体系中，水相中的苯甲酸钠直接用盐酸滴定，生成的苯甲酸溶解在乙醚中，使水相还原。第六章芳香酸类药物的分析实例分析用双相滴定法取苯甲酸钠约1.5g，准确称至1.574g，放入分液漏斗中，加入25ml水，摇匀溶解。加入50毫升乙醚和2滴甲基橙指示剂溶液，用盐酸滴定溶液(0.5012毫升/升)滴定，并摇动直至水层呈橙红色；分离水层，将其放入带塞子的锥形瓶中，用5ml水洗涤乙醚层，将洗涤液合并到锥形瓶中，加入20ml乙醚，继续用盐酸滴定剂(0.5012mol/L)