中药中黄曲霉毒素的检测.ppt

1、中药黄曲霉毒素的测定、目录、真菌毒素概要黄曲霉毒素的现状检查方法介绍黄曲霉毒素检查药典收载情况药典检查方法详细注意事项及实验室建议、真菌毒素概要、真菌毒素：产毒真菌在适当环境条件下产生的有毒代谢产物由真菌菌核产生。 Mycotoxin源于希腊语(Mykes )和拉丁语(Toxicum )，真菌毒素的分类、真菌毒素的监测意义、真菌毒素对食品安全的危害真菌毒素的种类、对养殖业的危害真菌毒素对制药行业的危害(中药)作为国际贸易的技术壁垒在国际反恐和战争中真菌黄曲霉毒素是产生黄曲霉和寄生黄曲霉等菌种的次生代谢产物，黄曲霉毒素的发现是在1960年，英国东南部的一些农场，约有10万只火鸡不明原因地突然死亡

2、。 1961年发现火鸡饲料中掺杂的花生粉可诱发大鼠肝癌。 1962年发现花生粉中含有荧光物质。 火鸡死亡的病因，证明该荧光物质是黄曲霉的代谢产物，命名为“黄曲霉毒素(Aflatoxins )”。 存在极其广泛，主要存在于土壤、动植物及各种坚果中。 在家庭制发酵食品等中也经常发现黄曲霉毒素。 一般在热带和亚热带地区，食品中黄曲霉毒素的检出率很高。 不能及时晾晒或储藏的粮食容易发生，也能在农作物的正常成长期形成。 毒性极强，1993年黄曲霉毒素被世界卫生组织(WHO )癌症研究机构(IARC )鉴定为类致癌物质，是毒性极强的剧毒物质，仅次于肉毒毒素，目前已知是霉菌中毒性最强的。 急性毒性：比氰化钾

3、大10倍，比砷大68倍的慢性毒性：表现为肝损伤、急性肝炎、出血性坏死、肝细胞脂肪变性和胆管增生。 脾脏和胰脏也有轻度病变。 中药中易产黄曲霉毒素的品种、种子、果实、谷类中药材发酵系中药材油性成分多的中药材，包括上述种类的中药、黄曲霉毒素的种类和性质，根据紫外线照射下产生的荧光色，可以选择b族和g族两种及其衍生物、蓝色荧光、黄绿色荧光分为化学结构的基本结构：一组化学结构类似的二胡萝卜素衍生物现已发现约20个种类，分离鉴定了B1、B2、G1、G2、M1、M2、P1、q、H1、GM、B2a和毒醇。B1:最常见，毒性和致癌性最强，化学结构式、理化性质、黄曲霉毒素对分子量312346难溶于水，易溶于油、

4、甲醇、丙酮和氯仿等有机溶剂，而对石油醚、己烷和醚不溶于中性和酸性溶液在ph13的强酸性溶液中稍有分解的黄曲霉毒素B1的分解温度为268紫外线对低浓度的黄曲霉毒素有一定的破坏性，黄曲霉毒素目前的检测方法是：薄层色谱：灵敏度低，定量困难的HPLC紫外检测法：不诱导，灵敏度低， 用UPLC能增强灵敏度的HPLC荧光检查法：诱导的、灵敏的高效液相色谱成本高，免疫化学分析方法酶联免疫吸附法：快速、简便、单一毒素，假阳多免疫亲和柱荧光分光光度法：高效、无毒、假阳多微柱筛选法：半定量， 总量测定一步式黄曲霉毒素检测金标试纸法：快速，现场大量初筛，黄曲霉毒素检测药典2005年补本附录首次添加黄曲霉毒素检测法2

5、010年版正文：僵蚕，陈皮，枣仁，桃仁， 在肥胖海品种项目中追加黄曲霉毒素残留量的检查附录：继续收载黄曲霉毒素测定法的2010年版第二补本修改了附录方法，删除了流速规定，追加了另一个诱导方法：光化学诱导法废除了免疫亲和柱的品牌规定的2015年版4部通则2351黄曲霉毒素测定法增加了两种方法：高效液相色谱-串联质谱法增加的2015年版4部通则中药中真菌毒素测定指导原则基本原则(中药中真菌毒素的分类、监测品种、测定方法、限值制定)基本内容(高效液相色谱、高效液相色谱质谱法)、 2015年版4部通则9302中药有害残留物限制量制定指导原则中关于黄曲霉毒素的规定黄曲霉毒素毒性强，中国药典2015年版本

6、文收载品种，根及根茎类：远志果实种子类：大枣、枣、决明子、麦芽、陈皮、使君子、柏子仁、肥海薏仁动物甲醇-乙腈-水(40:18:42 )诱导方式：柱后碘诱导、柱后光化学诱导混合对照品溶液的制备：液体标准液(B1B2G1G2=10.310.3 ug/ml )倾斜稀释500吸收、测定供试品溶液20-25l，方法来源：中国药典2015年版4部通则2351黄曲霉毒素测定法基本步骤提取净化(活化、上样、洗净、洗脱)测定随行质量管理(质量管理样品、随行样品回收)、泵流操作框架、免疫亲和15ml (离心后加入水至50ml过滤，取20ml，通过免疫亲和柱，以流速3ml/min加水洗涤2次，每次以10ml将空气挤

7、出到柱中，每次加入1.5ml甲醇，自然溶出，通过空气，定容于2ml的选择性传感器用水洗脱杂质，用甲醇定量洗脱黄曲霉毒素，达到分离净化目的，对黄曲霉毒素、单克隆抗体、杂质、黄曲霉毒素的诱导化设备有腐蚀性，需要光化学诱导法清洗：紫外光灯(254nm )照射、操作简单方法的难点在于，不需要其他诱导剂，不需要诱导黄曲霉毒素B1和G1的清洗，黄曲霉毒素B2和G2不受该诱导工序的影响，低于AFB1、AFG1、黄曲霉毒素的检出界限，报告具体值，报告未检出、限度内、限度外、具体值高灵敏度毒性强，要求一定风险性安全防护措施的基质复杂，注意事项，取样的代表性黄曲霉毒素在样品中穿着分布不均匀免疫亲和性的工作服戴手套，注意事项和实验室建议，对照品的使用使用混合黄曲霉毒素对照品， 不使用黄曲霉毒素固体纯品而自行配置对照品的储藏液避光，低温、密闭保存，作业液现在使用，试