2021年微生物实验工作总结

1、微生物实验总结(a)培养基的营养成分一般来说，它含有水、碳源、氮源和无机盐，一些微生物需要添加特殊的营养物质(如生长因子：培养乳酸杆菌时需要添加维生素)高考警钟：自养微生物和异养微生物需要不同的营养(1)自养微生物所需的碳源是含碳的无机物质(如CO2)，而异养微生物所需的碳源是含碳的有机物质，因此可以根据培养基中的营养成分来判断微生物的代谢类型。(2)含氮无机物质不仅能为自养微生物提供氮源，还能提供能量作为能源材料，如NH3既作为氮源又作为硝化细菌的能源。(二)培养基的配制原则(1)目的明确。根据微生物的种类、培养的目的等。应选择原料并准备培养基。(2)营养要协调。应确保各种营养素的适当浓度和

2、比例。营养成分的比例太低，无法满足微生物的生长；如果浓度过高，微生物的正常生长将受到抑制。(3)酸碱度应适当。不同的微生物生长需要不同的酸碱度。如果细菌呈中性或微碱性(6.5 7.5)；霉菌等真菌呈酸性(5.0 6.0)。(3)培养基的分类和功能：1.物理性质：取决于是否添加凝结剂如琼脂(1)液体培养基：通常在工业生产中不使用凝结剂(2)固体培养基：添加混凝剂，常用于微生物分离、鉴定和活菌计数2.用途或功能(1)选择培养基：在培养基中添加或去除某些化学物质，允许特定种类微生物的生长，同时抑制或阻止其他种类微生物的生长。常见示例：(1)向培养基中加入青霉素，筛选酵母、霉菌等真菌；(2)向培养基中

3、加入高浓度盐，筛选金黄色葡萄球菌；无氮培养基，筛选固氮微生物；(4)在无碳培养基中筛选自养微生物；以石油为唯一碳源，选择能分解石油的微生物；筛选以尿素为唯一氮源的尿素分解菌；以纤维素为唯一碳源，通过产生或不产生透明圈来筛选纤维素分解菌。将培养基置于高温环境中，分离耐高温微生物。(2)鉴定培养基：根据微生物的代谢特征，在培养基中加入一些指示剂或化学物质，以鉴定不同种类的微生物。曙红-亚甲蓝培养基用于鉴别饮用水或乳制品中是否有大肠杆菌(如果有，则为暗紫色，有金属光泽)；在培养基中加入酚红指示剂鉴定尿素分解菌；培养基中加入刚果红，鉴定纤维素分解菌。注意：(1)该病毒是一种具有非细胞结构的生物体，专门

4、用于活细胞寄生。目前还不能用人工培养基培养，需要接种到动植物组织中进行增殖。活鸡胚胎通常用于培养病毒。添加到培养基中的凝结剂(如琼脂)不能被微生物利用，只能起到凝聚作用。(一)关键获得纯培养的关键是防止外来细菌入侵。(2)消毒灭菌：它们之间的主要区别是：孢子和孢子是否存活(孢子是微生物通过恶劣环境时的休眠体，而孢子是微生物无性繁殖时的繁殖体，即无性生殖细胞)。(1.消毒：使用温和的物理或化学方法，仅杀死物体表面或内部的一些对人体有害的微生物(不包括孢子和孢子)普通方法应用范围巴氏杀菌法：在70 75水中煮沸30分钟或在80水中煮沸15分钟一些不耐高温的物体，如牛奶煮沸消毒法：在100水浴中煮沸

5、5 6分钟一般条款化学消毒方法：使用酒精、氯气、高锰酸钾等药剂它可以用来消毒环境，手和衣服等。紫外线消毒方法：用30W紫外线灯照射30分钟接种室、接种箱和洁净工作台2.灭菌：使用强物理和化学因素杀死物体内外的所有微生物，包括孢子和孢子普通方法应用范围燃烧灭菌法：酒精灯火焰接种环、接种针等接种工具。干热灭菌：在160 170加热1 2小时如玻璃器皿(吸管、培养皿)和金属器皿高压蒸汽灭菌：在压力100千帕、温度12l的条件下，保持15 30分钟培养基和容器的灭菌注意：(1)70%酒精消毒效果最好，且浓度过低。如果杀菌能力弱，浓度太高，细菌表面的蛋白质会凝固成一层保护膜，乙醇分子无法进入(2)高压蒸

6、汽灭菌应注意以下几点：(1)在压力100千帕、温度12l的条件下，保持15 30分钟；(2)注意同时拧紧两个相对的螺钉，使螺栓松紧一致；(3)灭菌时间结束后，当压力表压力降至零时，可以打开排气阀，否则灭菌锅内的液体会冲出容器，造成污染。(3)灭菌的原理是通过一定的物理和化学手段使致病菌的蛋白质变性而失去其活力。(4)燃烧灭菌采用酒精灯火焰的全燃烧层。(一)常用细菌培养基牛肉膏蛋白胨培养基制备工艺：计算称溶解消毒注：根据配方，在配制一定体积的培养基时，计算各组分的用量注意：(1)倾倒平板时，烧杯口应用酒精灯火焰消毒。(2)平板浓缩后，平板应倒置，这样可以防止凝结在皿盖上的水滴滴落到培养基中造成污

7、染；培养基表面的水分可以更好的挥发。(调节酸碱度)倒置板注意：(1)牛肉酱是粘性的，应该用玻璃棒采摘并在称重纸上称重(2)牛肉膏蛋白胨吸收水分容易，移动迅速注意：(1)溶解琼脂时保持搅拌，防止烧杯因琼脂糊底部而破裂；加热过程中有部分水分蒸发，琼脂完全溶解后应加入蒸馏水以保持溶液浓度。注意：由于不同微生物的适宜酸碱度不同，熔融后需要用氢氧化钠或盐酸调节酸碱度注意：(1)用高压蒸汽灭菌法(2)灭菌前调节培养基的酸碱度一般来说，培养基先灭菌，然后倒平计算称溶解消毒注：根据配方，在配制一定体积的培养基时，计算各组分的用量注意：(1)倾倒平板时，烧杯口应用酒精灯火焰消毒。(2)平板浓缩后，平板应倒置，这

8、样可以防止凝结在皿盖上的水滴滴落到培养基中造成污染；培养基表面的水分可以更好的挥发。(调节酸碱度)倒置板注意：(1)牛肉酱是粘性的，应该用玻璃棒采摘并在称重纸上称重(2)牛肉膏蛋白胨吸收水分容易，移动迅速注意：(1)溶解琼脂时保持搅拌，防止烧杯因琼脂糊底部而破裂；加热过程中有部分水分蒸发，琼脂完全溶解后应加入蒸馏水以保持溶液浓度。注意：由于不同微生物的适宜酸碱度不同，熔融后需要用氢氧化钠或盐酸调节酸碱度注意：(1)用高压蒸汽灭菌法(2)灭菌前调节培养基的酸碱度一般来说，培养基先灭菌，然后倒平(2)大肠杆菌的纯化1.原理：将细菌稀释或分散到培养基上的单个细胞中，使其生长成单个菌落，即为纯化的菌落

9、。2.微生物接种方法：平板划线法(仅纯化)和稀释涂布平板法(纯化和计数)(1)平板划线法：固体培养形成的菌落连续划线逐渐稀释单细胞繁殖(如图)注意：A.在用接种环取出菌株之前、每次划线之前和划线结束时，燃烧并灭菌，然后在酒精灯附近冷却后操作；燃烧期目的在承受压力之前杀死接种环上的原始微生物在每次划线之前最后划线后接种环上的残留菌株被杀死，使得下次划线的菌株直接位于最后划线的末端，减少了每次划线的菌株数量，达到了分离菌株的目的接种疫苗后，杀死接种环上的剩余菌株，避免细菌污染环境和感染操作人员B.划线时不要切培养基。如果使用分段划线法，应始终从第二次操作的最后一道划线结束处开始，头部和尾部不能连接；C.操作必须始终在酒精灯的火焰下进行。(2)稀释涂布平板法：10倍系列稀释操作(一系列梯度稀释)足够高稀释度的菌液分散成单细胞单个菌落稀释涂布板的操作很复杂，每个细节都必须“无菌”，因此应特别注意：A.配制系列梯度稀释剂时，必须用无菌水配制；B.涂药器用70%酒精消毒，多余的酒精滴入烧杯中，沾有少量酒精的涂药器在酒精灯的火焰中点燃。不要将过热的涂抹器放入装有酒精的烧杯中，同时点燃其中的酒精；C.不要用吸头接触任何其他物体；吸管应该用在酒精灯的火焰周围。3.菌种保存节省时间保存方法特定方法后续处理频繁的使用临时保存方法将菌