抗生素类药物的分析

1、.,1,第十一章,抗生素类药物的分析 Analysis of Antibiotics Drug,.,2,第一节 概述,抗生素的定义,抗生素是指在低微浓度下即可对某些生物的生命活动有特异抑制作用的化学物质的总称。 抗生素是细菌、放线菌和真菌等微生物的代谢产物，对各种病原微生物有强大的抑制或杀灭作用。,.,3,抗生素的来源,1. 生物合成（发酵）,2. 化学合成或半合成,特点：1. 化学纯度较低 2. 活性组分易发生变异 3. 稳定性差,.,4,发酵液中杂质,无机盐、脂肪、各种蛋白质、各种降解产物、色素、热原、毒性物质,增加 异常毒性、细菌内毒素、 热原、降压物质、无菌,检查,.,5,含量测定方法

2、,（一）生物学方法,测定抗生素抑菌或杀菌的能力,.,6,（二）化学及物理化学方法,以理化方法测定主药含量,.,7,抗生素活性表示方法 效价单位 即指每毫升或每毫克中含有某种抗生素的有效成分的多少。用或g表示 例如 1mg青霉素钠为1670 1mg庆大霉素为590 ,.,8,抗生素的分类（按结构与性质）： 内酰胺类、氨基糖苷类、 四环素类、 大环内酯类、 氯霉素类、多肽类、抗肿瘤类 林可霉素类、其他抗生素类,.,9,第二节 内酰胺类抗生素,青霉素类,.,10,头孢菌素类,.,11,酸性,结构与性质,一、,与碱金属(Na+、K+)成盐,（一）羧基,易溶于水,.,12,与有机碱(普鲁卡因)成盐,难溶

3、于水,普鲁卡因青霉素,.,13,（二）手性C,(5%头孢唑啉钠溶液 1824),头孢菌素类 C6 C7,青霉素类 C3 C5 C6,旋光性,.,14,（三）共轭体系,青霉素类 母核无明显UV 多数有苯环取代基,UV,.,15,青霉素钠UV7-20,.,16,.,17,（四）内酰胺环,水溶液 不稳定,干燥纯净 稳定,不稳定性因素,四元环张力大,酰胺键易水解,.,18,.,19,二、,鉴别,.,20,（二）呈色反应,1. 羟肟酸铁反应,-内酰胺类,NaOH,呈色,.,21,头孢菌素类,.,22,3. 茚三酮反应,-氨基,.,23,（三）沉淀反应,1. 遇酸,在过量HCl或 有机溶剂中溶解,.,24

4、,2. 有机胺盐反应,（1）重氮化 - 偶合反应,重氮化-偶合反应,芳伯氨基,.,25,-内酰胺环,酰胺,.,26,.,27,（水解）,水解产物,定量过量,剩余,-内酰胺类,ChP,.,28,反应分两步进行： 1. 水解反应 (按化学计算量进行) 2. 氧化-还原反应 (无固定的量关系，受温度、PH值和时间等因素影响，应严格控制反应条件并采用标准品平行对照测定),.,29,（水解）,青霉素族,ChP,.,30,（钠盐）,-内酰胺类,ChP,.,31,（水解）,可见-紫外分光光度法,（三）,（1）原理,稳定剂,JP,青霉素族,.,32,USP JP,红色,-内酰胺类,NaOH,.,33,ChP

5、头孢菌素类,特点 快速、高效、灵敏 专属性强、重现性好 一法多用（鉴别、检查、含测）,.,34,第三节 氨基糖苷类抗生素,链霉素 双氢链霉素 新霉素 卡那霉素 庆大霉素 巴龙霉素,.,35,链霉胍 + 链霉糖 + N-甲基-L-葡萄糖胺,.,36,绛红糖胺 + 脱氧链霉胺 + 加洛糖胺,.,37,庆大霉素C复合物 庆大霉素C1 R=H R1、R2=CH3 庆大霉素C2 R=R2=H R1=CH3 庆大霉素C1a R、R1、R2=H 庆大霉素C2a R=CH3 R1= R2=H 庆大霉素C2b R=R1=H R2=CH3,.,38,碱性水溶性抗生素 多与硫酸成盐,溶解度与碱性,（一）,.,39,

6、链霉素 pH57.5 庆大霉素 pH212,链霉素在230nm 有吸收 庆大霉素、奈替米星 无吸收,.,40,羟基胺结构,.,41,（二）Molisch试验 糖的性质 氨基糖苷类,（羟甲基糠醛）,.,42,（Elson-Morgan反应）,.,43,链霉糖特有反应,.,44,链霉胍特有反应,.,45,H+,庆大霉素无UV吸收,.,46,链霉素B（甘露糖链霉素）,方法 TLC中的对照品法 （BP）,1. 来源 反应中间体,.,47,（二）硫酸奈替米星 检查 有关物质 ChP 采用 TLC法 对照品法 对照品：1.奈替米星标准品 1.5mg/ml 2.奈替米星标准品 3 mg/ml 3. 西梭米星

7、标准品 1.44 mg/ml 结果判断：供试品溶液如显杂质斑点，其颜 色与标准品溶液（3）所显主斑点相比较，不得更深（1%），其他杂质与标准品溶液（1）所显主斑点相比较，均不得更深（1%），如有一点超过，应不深于标准品溶液（2）的主斑点（2%）,.,48,发酵菌种不同 工艺差别,规定控制各组分的相对百分含量,ChP USP BP JP,.,49,.,50,链霉素、庆大霉素,微生物检定法 本法系利用抗生素在琼脂培养 基内的扩散作用量反应平行线原理 的设计，比较标准品与供试品两者 对接种的试验菌产生抑菌圈的大小 ，以测定供试品效价的一种方法。,.,51,四、血清中庆大霉素的HPLC法,血浆样品的预

8、处理 离子对色谱法的目的： 除去氨基酸、肽、胺的干扰 选用OPA为荧光衍生化试剂 采用柱后衍生化法,.,52,第四节 四环素类抗生素,A,B,C,D,.,53,临床上常用其盐酸盐 具有吸湿性,.,54,pH3 7.5 荧光,.,55,1.,差向异构化,淡黄黑,蓝色荧光,.,56,（1）酸性下降解,.,57,（2）碱性下降解,（荧光）,.,58,.,59,.,60,1mol/L盐酸-甲醇（1100） 0.01mg/ml,.,61,UV,.,62,正相分配薄层 色谱,EDTA 克服痕量金属造成的 拖尾现象,.,63, 4-差向四环素（ETC） 脱水四环素（ATC） 差向脱水四环素（EATC） 盐酸金霉素（CTC）,TLC法（1995版）,HPLC法（2000版）,标准品对照法,盐酸四环素,.,64,四环素有关物质TLC图,4,0.5,0.5,2,.,65,.,66,杂质吸收度,.,67,ChP、USP,HPLC法（外标法）,系统适用性试验 1. 防护柱 2. 有关物质的混合溶液 （ETC 、 EATC 、 TC、 CTC、 ATC）之间的分离度符合要求,.,68,JP 比色法（标准曲线法）,原理,.,69,1. 熟悉抗生素类药物分析的特点及其 常规检验项目。了解抗生素类药物 的分析现状，熟悉生物学法与物理 化学法测定效价的原理及优