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文档简介
1、真假羊肉的鉴别,洛阳惠尔纳米科技有限公司,教育部教学仪器研究所,电泳样品添加示范,学生电泳混合样品,学生电泳过程观察,学生电泳结果观察,我们的合影,“假羊肉”事件,哪个是真羊肉?有没有更科学更有说服力的检验方法来鉴别真假羊肉?真假羊肉的鉴别,动物细胞模式,细胞核和基因在哪里?染色体由脱氧核糖核酸和蛋白质组成,脱氧核糖核酸链的总长度约为1米,基因:的脱氧核糖核酸分子有特定遗传信息的片段,基因,基因,基因,基因。可以通过什么来确定肉制品是否是羊肉?数据1:遗传物质脱氧核糖核酸是由四个脱氧核苷酸组成的长链。不同生物的脱氧核糖核酸和脱氧核苷酸序列并不完全相同,这决定了它们的生物学特性差异很大。生物关系
2、越密切,脱氧核苷酸测序的差异就越小。例如,2002年的一项研究表明,人类和黑猩猩之间的脱氧核苷酸排列只有1.23%的差异。根据研究,绵羊、鸡、猪、鸭和小鼠的细胞色素B基因(大小为307bp)存在差异(约5.9%-32.9%),可将绵羊与其他动物区分开来。通过研究山羊细胞色素B的基因序列,可以认为它是一个绵羊特异性的DNA片段。实验假设:通过鉴定肉制品中是否存在绵羊特异性细胞色素B基因(或DNA片段),可以确定其是否为羊肉。第一步是破碎细胞并提取脱氧核糖核酸。脱氧核糖核酸提取试剂盒完成。如何分离大量绵羊特异的DNA片段?阅读材料2,小组讨论。1993年,美国科学家穆利斯博士因发明聚合酶链反应获得
3、诺贝尔化学奖。这是一种体外特异性合成DNA片段的方法,它由几个反应组成,如高温变性、低温退火和在合适温度下延伸,这些反应在一个循环中进行,从而可以快速扩增靶DNA。聚合酶链反应技术,一是知道脱氧核糖核酸片段的序列,以便设计一个特定的“引物”来触发反应;其次,模板DNA是存在的,否则就不能获得DNA片段。第二步是扩增绵羊的特定基因片段(聚合酶链反应技术)。放大的基因片段仍然是肉眼看不见的。我们如何检测在聚合酶链反应产物中是否有绵羊的特定基因片段?琼脂糖是一种多糖,加热固化后形成网状凝胶。带负电荷的脱氧核糖核酸片段可以通过琼脂糖凝胶网从负电极移动到正电极。DNA片段越小,移动越快。这种被称为电泳的
4、方法可以用来分离脱氧核糖核酸片段和检测脱氧核糖核酸片段的大小。阅读3,小组讨论。步骤3:检测特定的脱氧核糖核酸片段(电泳技术),电泳仪,实验原理简述:通过从肉制品中提取脱氧核糖核酸,用聚合酶链反应扩增绵羊特定的脱氧核糖核酸片段,然后用电泳技术检测绵羊特定的脱氧核糖核酸片段是否存在。第一步:破碎细胞,提取DNA,移液管,测量范围和相应的枪头(组件),蓝色,白色,黄色,调节测量范围的方法,使用移液管枪,吸取液体,释放液体,第一,第二,第一,裂解细胞加入10l蛋白酶k,继续研磨至匀浆,加入200l裂解物,用移液管将其转移至2.0ml EP管1,摇动至完全混合,放入编号为1,2,3,4,5, 将EP管
5、1置于56的恒温水浴中约15分钟,在研钵的一角充分研磨,并在保持温度的同时解释以下内容(2)孵育后小指管中可能存在哪些物质? 蛋白质、脂肪、糖、脱氧核糖核酸、无机盐等。盒子里有钉子,还有许多铜钉和木钉。你怎么挑出钉子的?磁珠、生物活性基团、磁珠可特异性结合DNA、2、磁珠结合、注意:磁珠结合液在使用前必须倒置并充分混合,否则提取的DNA量可能会减少。,1号,混合磁珠结合溶液250升,倒置混合5分钟,DNA,蛋白质,脂质,糖等。裂解,洗涤,500升洗涤液,磁珠与脱氧核糖核酸结合,3,洗涤,洗涤,500升洗涤液,将磁珠吸附在磁笔上,并在空气中放置1分钟。去除磁场,通过摇动将磁珠转移到电生理管2;反
6、向混合,施加磁场,吸起磁珠;磁场被去除,磁珠通过摇动被转移到电生理管3;倒置并均匀混合。注意:用磁性笔转移磁珠时,尽量将磁珠吸干净,以减少DNA的损失。4号、100l洗脱液,去除磁场,摇动磁笔使磁珠均匀分布在洗脱液中,56水浴10分钟,取出EP管4,用磁笔吸收磁珠,将上清液留在EP管4中备用,4。洗脱,第2步:扩增特定的脱氧核糖核酸片段,结合数据2和视频,至少应该添加哪些成分?将下列组分(总体积50l)加入到0.5毫升的聚合酶链反应管中:超纯水32l 10 *缓冲液5l氯化镁6l dNTP 2l引物F 1l引物r11 Taq酶1l模板DNA 2l,聚合酶链反应、充分混合,从每组中取出48l,第
7、三步是检测特定的DNA片段(电泳)。1.制备琼脂糖凝胶;(1)取样:将10l扩增DNA溶液放在一次性手套上,加入2l装载缓冲液和3l荧光色素,混合均匀,用移液管吸取混合液,加入凝胶孔。(2)电泳仪的设置,电泳。注意:(1)将1)脱氧核糖核酸溶液与装载缓冲液充分混合;(2)取样时,将移液管直立,轻轻将液体推入凝胶孔,防止液体扩散到缓冲溶液中。2,电泳,观察电泳结果,出现特异性DNA片段带,是羊肉,没有出现特异性DNA片段带,非羊肉,总DNA,Marker,Marker,细胞色素b DNA片段,总DNA,取样孔,500 250 50,电泳方向,讨论和回答问题,如果电泳没有出现相应的。小组讨论了“鉴别真假羊肉”的过程和感受,教师可以回答问题。延伸:如果肉制品中有羊肉,它与猪肉和鸡肉混合在一起,如何识别它们?实验报告的写作要求思考:(1)如果恒温水浴温度过高或过低,会有什么影响?(2)孵化后小指
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