实验二 蛋白质等电点及含量测定

1、1、实验二蛋白等电点及含量测定，1台可见光分光光度计，4个玻璃比色杯，用完后必须立即清洗烘干。用试管刷子或粗布(纸)擦拭渡边杏。实验结束后，要把用过的玻璃碗洗干净，晾干，放回原处。温暖提示，P40/P51，2，学习蛋白质的阳性解离性质，掌握pH值法，掌握测定蛋白质等电点的一般原理和操作方法。学习和掌握测定蛋白质浓度的原理和操作方法。实验目的，01，蛋白质等电点测定，4，实验原理 pH值沉淀法测定蛋白质等电点，蛋白质呈阳性电解质，溶液有以下平衡。5，蛋白质分子具有的纯电荷为0时的pH值称为蛋白质的等电点，在等电点，蛋白质分子在电场中不会移动到任何极点，分子和分子间的碰撞会增加引起聚水槽的倾向，从

2、而使蛋白质溶液的粘度、渗透压最小化，使溶液浑浊。牛奶中酪蛋白的等电点为4.7-4.8。本实验使用蛋白质在徐璐其他pH溶液中形成的混浊度，确定浊度最高时的pH值是牙齿蛋白质的等电点值。实验原理 pH值沉淀法测定蛋白质等电点，6，实验仪器4个15mL玻璃试管，移动管，吸嘴，移动枪(200uL)，枪(200uL)等。实验材料和试剂蒸馏水，1米乙酸，0.1米乙酸，0.01米乙酸，酪蛋白溶液。仪器试剂消耗品 pH值沉淀法测定蛋白质等电点，7，操作步骤 pH值沉淀法测定蛋白质等电点，停止，在不同时间观察每个管子的混浊度。最浑浊的pH是酪蛋白的等电点。可以在观察的时候使用。表示浊度。8，实验结果和分析 pH

3、值沉淀法测定蛋白质等电点，观察各管中的明确度变化，记录结果，然后(，为什么蛋白质在等电点沉淀？影响牙齿实验结果准确性的因素是什么？思维测试问题，02，蛋白质含量测定，蛋白质含量测定，在11强碱性溶液中，双缩形成Cu和紫色红色复合物，这称为双缩反应。牙齿化合物可以通过两个酰胺器或两个直接连接的肽键，或一个中间碳原子的肽键，牙齿化合物都有双键反应。(约翰f肯尼迪，)蛋白质中含有多个肽键，会引起缩脲反应。2，12，实验原理双轴法测定蛋白质含量，紫色红色配合物的颜色与蛋白质浓度成正比，与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，颜色浓度可在540 nm比色中测定，因此可用牙齿方法测定蛋白质含量。测定的蛋白质浓度范

4、围为1-10 mg/mL。牙齿方法的优点是比较快，徐璐其他蛋白质产生颜色的深浅相似，干扰物质较少。主要缺点是灵敏度不好。因此，缩脲法经常被使用，需要快速，但不需要非常精确的蛋白质测量。13，6台实验仪器15mL玻璃试管，移动管，进气口，移动枪(200uL)，枪(200uL)，可见光分光光度计等。(绘制标准曲线)2个15mL玻璃试管、移动管、进气孔、移动枪(200uL)、枪(200uL)、可见光分光光度计等。(样品测定)实验材料和试剂双缩试剂、标准小血清蛋白、蒸馏水、试验样品(从酪蛋白溶液或牛奶中提取的酪蛋白)。仪器试剂消耗品双轴法测定蛋白质含量，14，操作程序双轴法测定蛋白质含量，1 .绘制标

5、准曲线。(半完整绘图第1部分)6个15毫升试管，编号0-5，按照下表顺序添加每个试剂。，15，操作程序双轴法测定蛋白质含量，添加上述试剂后充分混合，在室温中加入30 min。以0号管道为对照管，在540 nm处非比色测量吸光值，并记录各管道的吸光强度。以管糖蛋白含量为横坐标，以吸光度为纵坐标，形成吸光度-蛋白质含量标准曲线。见电脑表Excel表“绘制标准曲线”)，16，操作程序双轴向脲法测定蛋白质含量，2。蛋白质样品测定(每组1份)1。再接受两个试管，分别加入1 mL未知浓度的酪蛋白蛋白样品液(注意样品浓度不超过10mm)，2.2个样品溶液在540nm中非比色测定吸光值。3.取两组样品中测定的吸光值的平均值，根据回归方程计算相应蛋白质的浓度。4.样品蛋白质的含量计算如下：样品蛋白质含量(mg/100 mL)=YN100/V，在表达式中，y是从标准曲线中获取的蛋白质量(mg)，n是稀释倍数，V是从样品中获取的体积(mL)，y=0.042x-0.0004样品蛋白质含量计算，1 .画蛋白质标准曲线，18，思维测试问题，影响标准曲线的因素是什么？蛋白质含量测定中应注意哪些问题？19，注意事项，等电点测量实验要求各种试剂浓度和添加量非常准确。标准曲线选择不能只看到R，还必须看到曲线斜率和截断点。r大小和实验操作和工具都是相关的。发色时间太长，可能会发生雾沉淀，影响比色。解决方法：尽