DNA粗提取与鉴定(用).ppt

1、DNA的粗提和鉴定，目的要求，1 .理解从细胞中提取DNA的基本原理2，初步把握DNA的粗提和鉴定方法3，观察提取的DNA，实验构想1，DNA从哪里提取？ 2 .如何从细胞中的其他物质中分离DNA？ 3 .如何鉴定我们提取的DNA？ 实验原理、1. DNA在NaCl溶液中的溶解度随NaCl浓度的变化而变化。 当NaCl物质的量浓度为0.14 molL时，DNA的溶解度最低。 利用这一原理，可以使溶解在NaCl溶液中的DNA析出。 2.DNA不溶于酒精溶液，而细胞中的一些物质可溶于酒精溶液。 该原理可以用于进一步提取含有杂质的较少DNA。 3 .因为DNA遇到二苯胺(沸水浴)就会染成蓝色，所以二

2、苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。 实验材料和工具、实验材料： 1、鸡血球液(510ml) 2.体积分率95%的冷醇溶液(实验前放入冰箱内冷却24 h ) 3、蒸馏水4 .质量浓度为0g/ml的柠檬酸钠溶液(抗凝固剂) 5、物质的量浓度分别为2mol/L和000 实验用具：铁架台铁环镊子三脚酒精灯石棉网载玻片玻璃棒滤纸滴定刀缸(100ml，一个)烧杯(100ml，一个，50ml，500ml各两个)试管(20ml，两个)净试管夹由于DNA的鉴定是将DNA和二苯胺(沸水浴)染成蓝色，因此二苯胺作为鉴定DNA的试剂，采用紫外线灯照射法、a、制备染色剂、用蒸馏水配制万分之五的溴化锭(EB )、b、玻璃棒的

3、橙色荧光(DNA的甲基绿色(青绿色)、二、DNA粗提和鉴定的实验设计，(一)实验材料的选择，材料：新鲜鸡血，注意：本实验中，在鸡血中加入抗凝剂(1)离心分离新鲜鸡血，得到鸡血细胞(2)在鸡血细胞中加入一定量的蒸馏水的同时，加入蛾子(2)破碎细胞，得到含有DNA的滤液，1，得到破碎细胞，为什么放入蒸馏水制作鸡血球，利用了什么原理？ 2、过滤，得到含有DNA的滤液，为什么可以反复溶解和析出DNA，除去杂质，a :用高盐浓度的溶液溶解DNA，除去不能溶解于高盐的杂质。 通过在低盐浓度下使DNA析出，可以除去溶解在低盐溶液中的杂质。 因此，通过反复进行DNA的溶解和析出，能够除去与DNA的溶解度不同的

4、多种杂质，研究方案2和方案3的原理如何不同。 方案2是利用蛋白质组学分解杂质蛋白质，分离提取的DNA和蛋白质方案3是利用DNA和蛋白质耐高温性的差异使蛋白质变性，利用DNA分离方案2和酶的特异性。 方案3利用了DNA的稳定性。 (4)鉴定为DNA的析出，DNA的析出使用与滤液体积相等的冷却醇溶液(体积分率95 )，静置2-3min后，溶液中出现白色丝状物，这就是粗提取DNA。 用玻璃棒向一个方向搅拌，卷起线状物，用滤纸吸取上面的水，在1、DNA的析出、2、DNA的鉴定、DNA的鉴定时，首先在试管中放入物质量浓度为2mol/L的NaCl溶液5ml，在其中一个中放入DNA线状物，分别为二非将试管放

5、入沸水中加热5min，等到试管冷却后，比较两个试管溶液的颜色变化，总结一下溶解了DNA的溶液是否为蓝色，并尝试了1、DNA的粗提取和鉴定的方法2、原理3、实验设施修订的程序、原则、作业、植物细胞的使用在制备鸡血球液的过程中，加入柠檬酸钠的目的是() a .防止凝固b .促进DNA析出c .促进DNA溶解d .促进凝固、练习，a、2、DNA溶解度最低时，NaCl的物质的量浓度为() a2mol/lb0.1mol/LC0. 14 mol /。 持续向溶解了DNA的NaCl溶液中加入蒸馏水的目的是() a加快溶解DNA的速度b，加快溶解杂质的速度c，减少DNA，加快杂质的析出，继续向溶解了c、c、4

6、、DNA的2mol/L的NaCl溶液中加入蒸馏水，在该过程中减小b的增大c先减少，然后增大d增大，减小5，为了使溶解了DNA的2mol/L的NaCl溶液中的DNA析出，最有效的方法是，在关于a加蒸馏水b加矿泉水c加清水d加生理盐水、6、DNA粘稠物的析出的记述中在降低DNA溶解度的b操作时用棒轻轻搅拌，当DNA分子完全的c加蒸馏水同时降低DNA和蛋白质的溶解度，d丝状粘稠物不再增加时，NaCl溶液的浓度可以认为是0.14mol/L，7，可以用其他方法鉴定DNA吗？ 使用甲基绿染液。 结果丝状呈绿色。 8、DNA遇到二苯胺时(沸水浴)染成a硅红色b红色c紫色d蓝色，d、(1)情况1 :以鸡血为实

7、验材料进行DNA的粗提取，三、实验情况、鸡血球非常容易吸水膨胀， 以动物肝细胞为实验材料需要匀浆和离心分离，鸡血细胞核的DNA含量丰富，材料容易获得，2、实验原理、DNA在NaCl溶液中的溶解度随NaCl浓度的变化而变化。 当NaCl物质的量浓度为0.14 molL时，DNA的溶解度最低。 利用这一原理，可以使溶解在NaCl溶液中的DNA析出。 DNA不溶于酒精溶液，但细胞中的一些蛋白质可溶于酒精溶液。 该原理可以用于进一步提取含有杂质的较少DNA。 由于DNA遇到二苯胺(沸水浴)就会染成蓝色，所以二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。 上课前准备鸡血球液，取质量浓度01g/ml的柠檬酸纳米溶液(抗

8、凝固剂) 100ml，放入500ml烧杯中。 在注入新鲜鸡血(约180ml )的同时，用玻璃棒搅拌，充分混合血液和柠檬酸纳米溶液，避免凝血。 将烧杯中的血液放入冰箱，一日精馏使血球自我沉淀。 (也可以将血液放入离心管内，用1000r/min (每分钟旋转)的离心机离心2分钟，使血球沉淀在离心管底部。 实验时。 将离心管上部的澄清液用吸引管除去，可以得到鸡的血球液。过程、柠檬酸钠作用、血液凝固防止、作用机制、柠檬酸钠与血浆中的Ca2反应生成柠檬酸钙配合物，血浆中游离的Ca2大大减少，血液不凝固，鸡血细胞破碎后释放的DNA易吸附在玻璃容器上，因此在提取过程中DNA的损失a :血液分为两部分，一部分

9、是血浆，一部分是血球，离心分离后除去的上清液是血浆，5，在方法步骤中，将调制的鸡血细胞液5 mL10mL注入到50 mL的烧酒中。 在烧杯中加入20 mL蒸馏水，同时用玻璃棒充分搅拌5分钟，加速血球的破裂。 然后，用装有纱布的漏斗过滤血细胞液至500mL。 采集滤液。 提取鸡血细胞的细胞核物质，探讨：a :使细胞内浓度大于周围溶液的浓度，细胞吸水膨胀，(1)为什么加蒸馏水加蒸馏水细胞如何变化？ (2)用玻璃棒搅拌有什么意义？ a :用玻璃棒搅拌可以加速血细胞和细胞核的破裂。应该单向快速搅拌，但是过快，不能防止DNA的破坏。 (3)过滤的是什么物质？ 得到的东西是什么？ a :过滤过滤的是细胞膜

10、和核膜等物质。得到与蛋白质等结合的DNA，溶解细胞核内的DNA，将氯化钠物质的量浓度为2 mol的40mL放入滤液中，用玻璃棒向一个方向搅拌1min，均匀混合后，DNA在溶液中成为溶解状态， 一边沿烧杯内壁慢慢加入蒸馏水，一边用玻璃棒轻轻搅拌，此时如果继续加入烧杯中的蒸馏水，溶液中出现的粘稠物会越来越多。 如果粘稠物不再增加，则停止添加蒸馏水(此时溶液中氯化钠的物质的量浓度相当于0.14 molL )，析出含有DNA的粘稠物，研究：以添加蒸馏水为目的，将NaCl溶液浓度降低至DNA溶解度最低，从NaCl溶液析出DNA，从溶液中的实验中应缓缓张开墙壁加入蒸馏水，轻轻地向一个方向均匀搅拌，有利于D

11、NA分子的附着和纠缠，注意事项：过滤出含有DNA的粘稠物，用装有多层纱布的漏斗，从过滤工序3的溶液中用500mL的烧杯将含有DNA的粘稠物残留在纱布中， 用再利用DNA粘稠物的钝头镊子将纱布上的粘稠物夹在氯化钠溶液中，用玻璃充分搅拌，使粘稠物尽可能多地溶解在溶液中，过滤含有DNA的氯化钠溶液，取1个100 mL的烧杯，用装有2段纱布的漏斗将步骤5的溶液采集该滤液，将DNA溶解于滤液中，提取杂质少的DNA，向上述过滤后的溶液中加入冷却后的醇的体积分数为95的溶液50mL (使用冷却后的醇时，DNA的凝集效果高)，用玻璃棒搅拌的话，在溶液中出现杂质少的线状物。 用玻璃棒卷起线状物，用滤纸吸取上面的

12、水分。 该线状物的主要成分是DNA，回答： DNA不溶于冷酒精，其他物质可溶于酒精，因此可以使杂质较少的DNA线状物溶出浮游于溶液中，讨论：(2)观察线状物的颜色。 a :白色，(1)为什么要加入50mL冷酒精？ 取2根20 mL的试管，加入加入了氯化钠的物质的量浓度为0015 molL的溶液5 mL，在其中1根试管中加入丝状物，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解。 然后，在2根试管中分别加入4mlL二苯胺试剂。 混合均匀后，将试管放入沸水中加热5分钟，等到试管冷却后，观察并比较两个试管溶液的颜色变化，DNA的鉴定、讨论：a :有丝状物的试管变蓝，另一个试管变成原来的颜色，(2)这个鉴定结果是什么(1

13、)如何比较两个试管的溶液颜色，a :提取的丝状物是DNA，(3) DNA的直径约为2010 m，实验中出现的丝状物的粗细表示1个DNA分子的直径的大小。 a:dna分子的直径只有2 nm。线状物是由多个DNA子聚集而成，回答：整个实验为“二次蒸馏水、三次过滤、二次析出、六次搅拌”、6、讨论：二次蒸馏水、第一次：细胞吸水膨胀破坏第一次、第二次： DNA粘稠物析出第三阶段。 过滤几次，析出几次，搅拌几次？ 分别是哪一步？ 由于过滤中使用的纱布的层数与滤液或粘稠物有关，第二次与过滤的粘稠物有关，因此使用多层纱布，第一次和第三次使用滤液，使用的纱布存在于12层，第三次存在于滤液中， 第一次： DNA存

14、在于滤液中的第一阶段： DNA残留于纱布上的第四阶段第三阶段第一次：0.14 molL的NaCI溶液中含有大量杂质，第三次、第二次：用冷却后的95醇进行第七次、第六次搅拌：第一次、第二次、第三次、第五次其佗必须单向搅拌，用高盐浓度的溶液溶解a:dna，可以除去不能溶解在高盐中的杂质，用低盐浓度使DNA析出，可以除去溶解在低盐溶液中的杂质。 因此，通过反复进行DNA溶解和析出，能够除去与DNA的溶解度不同的多种杂质，(2)情况2 :以油菜花为实验材料进行DNA的粗提取，1、课前准备，将新鲜油菜花和体积分数95的乙醇溶液放入冰箱冷冻室24 h、2，将DNA 加入10 mL研磨液，充分研磨10分钟，过滤：在漏斗中铺上尼龙纱布，将菜花的研磨液过滤到烧杯中(在有条件的学校将滤液放入塑料离心管中离心，以1000 r/min的转速离心25分钟，取上清放入烧杯中)。 4在冰箱放置数分钟后，采集上清液，沉淀：在体积分率95的预冷乙醇溶液中加入二倍体积的上清液，用玻璃棒缓慢搅拌(玻璃棒不要直接插入烧酒底部)。 沉淀35分钟后，出现白色的DNA絮状物。 用玻璃