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文档简介
一. 感受态的制备和转化,实验步骤, 1.Top10/DH5细菌接种5ml(Amp-)培养过夜； 2.取菌液按1:100接种至5mlLB(Amp-)，37、250rpm摇育3h； 3.取1ml菌液，冰浴30min，4、2500g离心5min； 4.弃上清，加入1ml 0.1M Cacl2（预冷）； 5.轻轻重悬，冰浴15min，4、2500g离心5min； 6.弃上清，加入0.2ml 0.1 M预冷的Cacl2，轻轻重悬；,感受态的制备, 7.加入10l DNA，冰浴30min； 8. 42热激2min； 9. 迅速冰浴2min； 10. 加入0.8ml LB(Amp-)，37 250rpm摇育1h； 11.取40l X-gal和4l IPTG涂布平板，等吸收干后，取100l菌液涂布平板(Amp+)，37培养过夜。,转化,预期实验结果,蓝白筛-互补,二. 胶回收, 1. 每管加入Solution350l，65水浴10min； 2. 移入吸附柱，12,000g离心1min； 3. 弃废液，加入500l Solution，12,000g离心1min； 4. 重复步骤3一次； 5. 弃废液，空柱离心1次，12,000g，2min； 6. 吸附柱移入一新的EP管中，加入20l65预热的ddH2O洗脱，12,000g离心1min； 7. 加
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