细胞生物学实验复习材料.ppt

1、注意事项 守时间：不迟到，不旷课（迟到累积四次，旷 课2次以上不计成绩）； 听指挥：不让做的事情不做；不乱走动，不喧哗， 不吃东西，不乱丢东西； 重安全：水、电、火、关门窗； 讲公德：爱护公物，损坏物品要报告，用完东 西要还原；,实验一 细胞显微形态的观察,实验原理,细胞是生命活动的基本结构和功能单位。典型的人和动物细胞直径为1020 m，人眼的分辨率为0.2mm, 一般光学显微镜分辨率为0.2m，线粒体、高尔基体、中心体、核仁、染色体等细胞器大于0.2m ，借助显微镜，可观察到细胞及其内部结构。 细胞形态多样，有球形，椭圆形、扁平形、立方形、长梭形、星形等。其形态与其功能相适应。,目的要求,

2、1掌握光镜下细胞和细胞器的形态结构。 2初步掌握临时制片的方法。 3学习生物绘图的方法。,光镜的使用： 物镜转换时：由低到高 调节载物台时：由高到低,显微标本制作的一般原理与步骤,生物显微制片方法： 非切片法： 涂片，铺片，压片，磨片，整装片等。 切片法： 石蜡切片法，火棉胶切片法，冰冻切片法等。,1 非切片法 非切片法即不用切片机、不经切片手续而制成切片的方法。 操作简单快捷。 铺片法、封藏法可使原有组织结构不被破坏； 涂片法、压片法弥补了用包埋、切片法有时观察不清楚的不足， 显微标本制备中常用的手段。,1. 1 涂片法 主要用于血液、精液、尿、痰、微生物等不能切成薄片的液态材料。 在载玻片

3、上涂成单层细胞，再经固定，脱水，染色等手段制成永久标本。,1. 2 铺片法 动植物组织的表皮层观察。 可活体取待观察动植物组织，用尖镊子撕去一层表皮，迅速平铺在载玻片上。 如: 洋葱表皮细胞的铺片制备。,1. 3 压片法 一些较幼嫩、柔软的材料. 可将其置于载玻片上，用小解剖刀将其分散，加染料一滴，再盖上盖玻片，用拇指垂直用力挤压，使组织散成一薄片，再进行观察。 如植物根尖观察染色体，花粉粒观察发育阶段等。,1. 4 离析法 利用化学试剂使组织的细胞间质溶解，使细胞能分散成单个个体，经染色、脱水、透明即可观察其个体形态， 适用于平滑肌、叶片等部位。,2 石蜡切片制备程序,取材 从动物身体割取所

4、需的新鲜组织一小块（厚度约0.5厘米），愈快愈好，以防组织死后变化。 固定 把切取的小块组织，迅速投入预先配好的固定液如10%福尔马林、0.5%锇酸、包氏液、岑克氏液、卡氏等固定液中固定，使组织细胞的蛋白质变性，组织块硬化，以保存组织细胞原有的形态； 冲洗（洗涤） 组织块自固定液取出后，须经流水冲洗或乙醇洗涤，使组织中含有的固定液全部除去。 脱水 以除去组织中的水分。组织中的水分和石蜡是不相溶的，为不使组织块在脱水时产生收缩，需经一定浓度梯度的脱水剂脱水。,透明 组织块脱水后，须经既可和乙醇相混，亦可作石蜡溶剂的透明剂（如二甲苯）透明，使组织中的乙醇被透明剂所替代，才能浸蜡包埋。浸蜡 将包埋剂

5、（石蜡）透入整个组织的过程。石蜡透入组织需要一定的温度（石蜡熔点）。所以浸蜡都在恒温箱中进行。 包埋 制备一定形状的容器（如纸盒等），倒入熔化的石蜡，迅速夹取浸透石蜡的组织块放入盒内，待表面石蜡凝固后立即将容器投入水中，使它凝固成蜡块。切片 组织块经上述处理后，不仅变硬，且有石蜡支撑，可用切片机将包埋组织的蜡块切成薄片，一般厚度是58微米。,贴片 把由切片机切下的蜡条，分割成小段，分别排放于滴有蒸馏水的载玻片上，在展片台上微热，使皱褶的蜡片伸展平正。 烘片 把贴有蜡片的载玻片置于45恒温箱中，烘烤34小时，使切片干燥。 脱蜡与复水 组织切片的脱蜡等过程是在染色缸中进行的，因此须预先准备洁净的染

6、色缸，并分别放入二甲苯、各级浓度的乙醇及染料溶液，按顺序贴好标签。染色前须先进行脱蜡和复水，即用二甲苯溶去切片上的石蜡后再经各级浓度乙醇（自高浓度到低浓度）下行到水的过程。因为没有经过复水处理的切片不能用水溶性染料染色，所以在染色前必须再度复水。脱蜡与复水的步骤如下：切片浸入二甲苯310分钟二甲苯+纯乙醇（1：1）纯乙醇95%乙醇80%乙醇70%乙醇50%乙醇（以上每级乙醇停留的时间约25分钟）蒸馏水2分钟。,染色 切片染色以后可增加组织细胞结构的对比度。 常用的生物染料是苏木素和伊红，简称H.E.染色。苏木素是一种碱性染料，经苏木素染色的结构呈蓝紫色（如细胞核）。组织中可被碱性染料着色的结构

7、称嗜碱性。伊红是一种酸性染料，被伊红染色的结构呈红色或粉红色（如细胞质）。可被酸性染料着色的结构称嗜酸性。H.E.染色的程序如下：将已浸入水中的切片取出放入苏木素染液510分钟自来水洗2分钟0.5%盐酸水分色数秒种（在显微镜下检查核褪至浅红色，细胞质及结缔组织近无色）蒸馏水1分钟0.1%氨水（蓝化）1分钟自来水冲洗510分钟蒸馏水1分钟50%乙醇70%乙醇80%乙醇90%乙醇（以上每级乙醇停留的时间约25分钟）0.5%伊红（95%乙醇溶液）25分钟95%乙醇分色（在显微镜下检查核呈蓝紫色，细胞质及结缔组织呈粉红色）95%乙醇轻洗（洗净玻片上剩余的伊红染液）。,脱水 已染色的组织切片，为了长久保

8、存，又须再经各级浓度的乙醇脱水。即将上述已被染色的组织切片依次放入95%乙醇1分钟纯乙醇（I）1分钟纯乙醇（）25分钟。 透明 以除去组织切片中的乙醇，因组织中的乙醇不与树胶相溶，所以必须用透明剂除去乙醇后才能封藏。即将上述已脱水的组织切片依次放入二甲苯+纯乙醇（1：1）25分钟二甲苯（I）25分钟二甲苯（）25分钟。 封固 在切片上滴加中性树胶，用盖玻片进行封固，保存备用。,内容与方法,(一) 各种细胞的一般形态结构观察,蝾螈表皮细胞 低倍镜下可见排列紧密的多边形扁平细胞, 高倍镜下可见颜色较浅的细胞边界，核位于中央，呈圆形，核内可见核仁 (nucleolus) 和染色质 (chromati

9、n)。,平滑肌纤维,吸收细胞,杯状细胞 （分泌）,小肠绒毛,小肠上皮组织切片,粘膜表面可见许多细小的突起，称小肠绒毛（intestinal villus），由上皮和固有层共同向肠腔突出而形成。绒毛根部的上皮向固有层内凹陷形成小肠腺。绒毛的表层可见排列紧密的的长柱状的吸收细胞，其细胞核为椭圆型，在吸收细胞间，有分散存在的染色较浅的杯状细胞，其核为三角型或不可见，具有分泌粘液，杯状细胞具有保护和润滑肠粘膜的作用。绒毛中轴为固有层，含有淋巴细胞、浆细胞、巨噬细胞、嗜酸性粒细胞、丰富的毛细血管、毛细淋巴管（也称中央乳糜管，与脂肪的吸收和运输有关）。绒毛中轴还有来自粘膜肌层的散在纵行的平滑肌纤维，直达绒

10、毛顶端。其收缩可使绒毛产生伸缩运动，有利于吸收及淋巴、血液的运行。,外表皮,平滑肌,小肠上皮组织切片,神经细胞 低倍镜下可见染成蓝色的星形脊髓神经细胞，胞体三角或多角形，有多个突起，胞内细胞核。 小鼠和人精子细胞 低倍镜下可见视野中有多个染成蓝色的蝌蚪样的精子，尾部为一条细长的鞭毛。,马蛔虫子宫石蜡切片（中心体） 低倍镜下观察马蛔虫子宫切片，可见众多椭圆形的受精卵，可见处于分裂中、后期的马蛔虫受精卵的两极各有一颗染色很深的小黑点，即为中心粒。中心粒，星射线。受精卵细胞外围有一层厚的受精卵膜，其与受精卵细胞间的空隙为围卵腔。,脊神经节切片（高尔基体）,人染色体装片,p 短臂 q 长臂,血细胞 红

11、细胞 白细胞 粒细胞（中性粒细胞，嗜碱/酸性 粒细胞） 淋巴细胞（B，T细胞） 单核细胞 血小板,红细胞（RBC）、白细胞（WBC）、血小板（PLT , platelet）、血红蛋白（HGB, hemoglobin）,人血涂片,1,2,3单核细胞 4,5,6 淋巴细胞 7,8,9,10,11中性粒细胞 12,13,14,嗜酸粒细胞 15嗜碱性粒细胞 16 红细胞 17 血小板,11,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,12,13,14,15,16,17,人血涂片,红骨髓涂片,脂肪细胞,粒细胞,巨噬细胞,巨核细胞,红细胞,单核细胞,血小板,有髓神经纤维切片,轴突/树突,眼虫,眼虫有叶绿体而

12、营光合作用，又能行动而摄取食物。 植物学：藻类中的裸藻（无细胞壁）； 动物学：原生动物中的眼虫。,摇蚊唾液腺染色体（多线染色体）,10 x,40 x,肝癌切片,癌细胞间的大小和形态不一致，有时出现体积很大的“瘤巨细胞”。细胞间的界限不清，排列紊乱，出现巨核、双核、多核或异形核，细胞核体积增大等。,胃腺癌切片,洋葱表皮细胞临时装片,番红染色；（细胞壁 ，细胞核和多个液泡）,1首先认真观察生物标本，弄清它的基本形态特征和重点观察部位的毗邻关系。 2用3H或2H铅笔绘图, 注意各部位结构的比例关系，图的大小、位置、布局要恰当。 3线条要粗细均匀而连续。用铅笔打出小圆点，以点的疏密程度表示表示结构和明

13、暗立体 4要标注图上各部分结构名称，用直尺在图的一边或两边引出平行线，各引线末端要齐正。,生物绘图的要求和方法,实验二细胞的活体染色及观察法 （动植物细胞线粒体和植物细胞液泡的观察）,实验原理,活体染色：是指使已离体的或刚被杀死的生物体内的活细胞保持生活状态，再用活体染料进行染色的一种方法。一般染液浓度很低，对活有机体细胞或组织能着色但又无毒害。 优点：可显示细胞结构，且不影响细胞生命活动；用来研究生活状态下的细胞结构、生理和病理状况。,Janus Green B染色线粒体原理：由于线粒体(mitochondrida)内具有细胞色素氧化酶系，能使詹纳斯绿保持在氧化状态（淡蓝绿色），在胞质区詹纳

14、斯绿则被还原成无色，故能特异地对线粒体进行活体染色。,中性红染色液泡的原理： 中性红为弱碱性pH指示剂，变色范围（pH6.4-8.0，由红变黄)。中性或微碱性环境中，活植物细胞能大量吸收中性红并转运到液泡中，由于液泡内呈酸性，中性红可解离出大量阳离子而呈现樱桃红色，而原生质和细胞壁一般不着色。 死细胞中原生质变性凝固，细胞液不能维持在液泡内，用中性红染色后，不产生液泡着色现象，相反，中性红的阳离子可与带有一定负电荷的原生质及细胞核结合，而使原生质与细胞核染色。,液泡（yepao） 细胞质中的泡状结构，外有液泡膜，其结构和特征与细胞膜相似，具选择透过性，此膜将细胞液与细胞质分隔开。液泡是植物细胞

15、的显著特性之一。在幼年的植物细胞中，液泡是不明显的，体积小但数量多，随着细胞的生长，液泡逐渐扩大，最后彼此互相联合，形成一个大的中央液泡，而将细胞质挤到四周，沿细胞壁成一薄层，细胞核也常贴近细胞壁的一侧。在成熟的细胞中，液泡可占据整个细胞的90。液泡是植物细胞的储藏器和排泄器，可贮存营养物质（如蔗糖、无机盐等）。液泡与植物细胞渗透吸水有关。高等动物细胞中无明显的液泡，某些单细胞的原生动物中的食物泡、伸缩泡，分别具有摄取营养和排泄废物的功能，可以说是液泡的一种形式。,目的要求 1 学习活体染色的方法及原理； 2 观察活细胞线粒体，植物细胞液泡系的形态、数量及分布。,内容与方法,(一) 线粒体永久

16、切片观察 观察肝肾细胞线粒体永久切片；,肝脏切片,肾脏切片,肾小管管腔,（二）线粒体活体染色观察,1、小麦根尖和人口腔上皮细胞线粒体观察 取干净载玻片 滴詹纳斯绿B于其上 用消毒牙签刮取口腔上皮细胞/取初生根尖，用薄刀片小心纵切一切面(含分生区和伸长区) 染色15min 吸去染液,滴Ringer氏液 盖盖玻片 显微镜观察。,(三)洋葱细胞液泡系的活体染色及观察,取干净载玻片 滴1/3000 的中性红于其上 取初生根尖，用薄刀片小心纵切一切面（分生区、伸长区） 染色15min 吸去中性红染液 加Ringer液，盖盖玻片,观察; 可见到被染成砖红色的中央大液泡和周围的小液泡。,作业 1 小麦根尖分

17、生区和伸长区线粒体的形 态和数量有无差异？并解释原因。 小麦根尖分生区和伸长区液泡的形态 和数量有何差异？并解释原因。,实验三 DNA显色法孚尔根反应及细胞有丝分裂观察,实验原理,利用适度盐酸的水解作用，可将DNA分子中嘌呤碱基与脱氧核糖之间的糖甙键打断，释放使嘌呤出来，并使脱氧核糖第一个碳原子部位出现醛基，它与锡夫试剂作用，形成紫红色化合物。 细胞中只有DNA才具孚尔根反应，因此利用此反应可以鉴定DNA的存在。 DNA含量不同，颜色的深浅也不同，红色深DNA含量高，反之，DNA含量低，可利用此反应，通过分光光度计测定细胞中DNA的含量。,孚尔根（Feulgen）反应模式图,实验目的,掌握用孚

18、尔根反应测定DNA的原理和方法; 鉴定细胞中DNA存在的部位。,实验方法,(一) 材料培养 将种于浸泡24h后，在25-300C温箱中发芽，待根长至1 cm左右即可。 (二) 切根和固定 将根尖在0.5cm处切下后，投入玻璃小瓶中。滴入卡诺固定液固定2-24 h。 (三) 冲洗 先用50%再用30%酒精最后用蒸馏水洗各洗5 min。,(四) 水解 先用冷的1MHCl将根尖泡后将根尖放入60的1M HCl中，水解8-10min(间歇轻摇)后，去热HCl，滴冷HCl，随即倒去。再用蒸馏水冲洗一次。 （五) 染色 倒去蒸馏水后，立即滴入锡夫试剂染色，经0.5- 2 h（根尖染成紫红色）。 (六) 漂

19、洗 倒去锡夫试剂，滴入漂洗液，漂洗根尖，更换漂洗液3次，每次510 min.,(七) 蒸馏水洗 10-15 min 。 (八) 压片 用镊子镊根尖置载玻片中央，滴45% 醋酸1-2滴，使根尖进一步软化、盖盖玻片，压片。 (九) 镜检 在显微镜下观察，此时应见到染色体和间期核中的染色质染成红色，核仁和细胞质则无红色。,实验结果,Feulgen 反应光镜照片,细胞有丝分裂观察,各期细胞特点 间期 (interphase)：细胞质内有两个近圆形的细胞核（雌原核和雄原核）。细胞核内染色质分布较均匀，核膜完整，细胞核附近胞质中有中心体 (central body)存在。 前期 (prophase)：雌雄

20、原核相互靠近，核仁 (nucleolus) 消失，染色质浓缩成扭曲细丝状染色丝 (chromatin fiber)，或形成短棒状染色体。核膜消失，两对中心粒 (centriole) 分离，有星射线，并向两极移动。,中期 (metaphase)：染色体排列在细胞中央，形成赤道板(equatorial plate)。侧面观可见染色体排列在细胞中央，两极各有一个中心体，其周围有星射线。极面观可见六条染色体平排于赤道面上，染色体已纵裂为二，但尚未分离。 后期 (anaphase)：子染色体向两极移动，成为相等的两群。细胞拉长，中部的细胞膜开始凹陷。 末期 (telophase)：子染色体逐渐解体、模糊

21、。核膜、核仁出现，纺锤丝和星射线消失，膜凹陷加深，横缢成两个子细胞。,实验四 细胞膜的渗透性和细胞的凝聚反应,细胞膜是主要由双层脂质和镶嵌及结合在脂质表面上的蛋白质构成，有些膜上的脂和蛋白上又结合有糖基，形成细胞外被。细胞膜是细胞物质运输和信息传递的界面。 低渗溶血：红细胞在低渗盐溶液中，细胞胀破，血红蛋白释放到介质中，由不透明的红细胞悬液变为红色透明的血红蛋白溶液。 等渗溶血：等渗盐溶液中发生的溶血现象。 非渗透性溶血：去垢剂引起的。 凝集素是一类含糖蛋白质，它与细胞表面的糖分子连接，在各细胞间形成 “桥”，使细胞发生凝集。如果在人体内发生红细胞的凝集，则会阻塞末梢微循环，发生手足紫绀症。

22、四季豆、土豆食物中毒,目的要求,1了解细胞膜对物质通透性的一般规律。 2了解溶血现象及其发生机制。 3. 了解细胞凝聚机制。 。,操作与观察,1取8支试管，各加入3 ml蒸馏水、0.17 mol/L NaCl和NH4Cl、0.12 mol/L Na2SO4和(NH4)2C2O4、0.32 mol/L 乙醇和葡萄糖，1 Triton X-100；做标记后，放在试管架上。 在上述8支试管中分别加入0.3 ml红细胞悬液，充分震荡混匀后，观察各个试管内是否发生溶血。可将一张有字的纸片或书页紧贴于试管后，透过试管读取纸张上的文字，有溶血发生的试管内，可见纸张上的文字逐步清晰可见，记录从加入血细胞到纸张

23、上的字刚刚清晰可见的时间，此时间可视为溶血时间。 选取一个发生明显溶血的试管和未溶血的试管，分别用滴管吸取少量样品，滴到载玻片上，涂片进行观察。,细胞凝聚实验,取两支试管，分别加入5 ml PBS缓冲液和植物凝集素粗提液，再加入0.5 ml 10%红细胞悬液，充分混匀，用滴管吸取上述混合液液各一滴，置载玻片上，静置20 min后于低倍镜下观察，注意不要加盖玻片。,其中每人准备3个50ml三角瓶，3根10 ml移液管（洗净包好，并塞上棉花，灭菌后使用）、1根10ml带塞试管， 每组（8个人）500 ml盐水瓶2个，1ml移液管16根，2根大通气培养管。 培养基配制： 每个500 ml盐水瓶中装入

24、390ml蒸馏水，用1ml移液管加入各母液0.4ml,另加NaNO3溶液4ml.注意依次加入，加入后要适当摇匀。,每组（8个人）500 ml盐水瓶2个，1ml移液管16根， 2根大通气培养管，8根10ml带塞试管，清洗后包扎灭菌 10ml移液管包扎(末端塞棉花） 培养基配制： 每个500 ml盐水瓶中装入390ml蒸馏水，用1ml移液管加入各母液0.4ml,另加NaNO3溶液4ml.注意依次加入，加入后要适当摇匀。用封口膜包扎好。灭菌备用。 各组到301后，按照现在座位从西往东对号入座。,实验六 小鼠巨噬细胞吞噬运动观察,实验原理,单细胞动物通过吞噬作用(phagocytosis)摄取营养物质

25、。高等动物体内的巨噬细胞、单核细胞和中性粒细胞等也具此功能，防御微生物的侵入、清除衰老和死亡细胞等。 当机体受到异物侵入时，吞噬细胞便向异物处聚集，异物首先被吸附在细胞表面，随之，吸附区域的细胞膜向内凹陷，并伸出伪足包围异物，发生内吞作用形成吞噬体(phagosome)，并与胞内溶酶体融合，消化分解异物。,目的要求,1.了解诱导小鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象的原理。 2.熟悉细胞吞噬作用的基本过程。,实验用品,1器材：显微镜、注射器、载玻片、盖玻片、解剖剪。 2试剂：6淀粉肉汤(含0.3台盼蓝)。 3材料：1 鸡红细胞悬液、小白鼠（体重 20g 左右）。,内容与方法,1标本制备 实验前2天，每天给小

26、白鼠腹腔注射6%淀粉肉汤(含台盼蓝)l ml，以诱导产生较多巨噬细胞。 实验时，取1只处理小鼠，腹腔注射1鸡红细胞悬液lml，轻揉腹部，使悬液分散。 25min后，用颈椎脱臼法致死老鼠，剖开腹腔，用注射器（不装针头）贴腹腔背壁抽取腹腔液。 滴1滴腹腔液于载片上，制成临时装片镜检。,2观察 鸡红细胞为淡黄色，椭圆形，有核。巨噬细胞体积较大、圆形或不规则形，表面有小突起，胞质中有蓝色颗粒。变换视野，寻找巨噬细胞吞噬鸡红细胞不同阶段的情况。,注意事项 1小鼠腹腔注射时注意不要刺伤内脏。 2 腹腔内的细胞浓度过大时，可用生理盐水稀释。,栅藻细胞培养及脂肪体诱导和观察,藻类是一类没有真正的根、茎、叶分化

27、的低等植物，具有叶绿体，进行光合自养作用，分布于陆地、水体甚至漂浮于大气中。在自然界中以单细胞、群体、丝状体、异丝体（藻丝由直立枝和匍匐枝组成）、多核体、假薄壁组织状和薄壁组织状形式存在，体型大小各异，从几微米到数十米。藻类的营养需求相对简单，只需提供必要的水分、空气、光照和必需的无机盐即可。微型藻类（microalgae）由于个体微小，其和外界环境间的物质交换效率非常高，能快速吸收营养，高效利用光能，具有生长速度快、光合效率高的特征。很多藻类营养丰富，是理想的食品和保健品的来源，具有较高的开发和利用价值。目前商业化大规模培养的微型藻类主要有螺旋藻、杜氏藻、小球藻、雨生红球藻等。螺旋藻藻粉和小

28、球藻藻粉常作为功能保健食品使用，而杜氏藻和雨生红球藻则分别用来生产类胡萝卜素和虾青素，二者作为色素和抗氧化剂使用。很多微型藻类是鱼、虾、蟹和贝类的天然开口饵料，在水产育种和养殖中也很重要。另外，藻类在环境监测和废水处理中也愈来愈显示出重要作用。,目前，由于化石燃料日渐减少和不可再生性，寻找和开发绿色环保的可再生生物能源日益引起人们重视。藻类由于具有光合效率高、生长快、单位面积产量高、含油量高和培养简单的特点，符合目前发展生物能源所提倡的“不与人争粮，不与粮争地”的方针，是开发生物能源的理想材料。藻类中的硅藻、黄藻、金藻和隐藻的同化产物主要是油脂，虽然其他藻类的主要储藏物是淀粉，但经适当诱导后，

29、可转化为油脂，特别是中性脂，可用来生产生物柴油。如绿藻中的某些种类经诱导后，总脂含量可达干重的70%，而用于生产生物柴油的中性脂含量可高达60%以上。 脂肪是生物体内储存和供给能量的重要物质，根据其性质可分为中性脂肪、脂肪酸、胆固醇、磷脂等。脂肪不溶于水，易溶于浓酒精、苯、氯仿和乙醚等。因此在制作脂类标本时，多用甲醛类固定剂，用冰冻切片或铺片法替代石蜡切片，避免破坏脂类。苏丹染料（苏丹、苏丹或苏丹黑等）是一种脂溶性染料，易溶于酒精但更易溶于脂肪，所以当苏丹染料与含有脂肪的标本接触时，其即脱离酒精而溶于含脂肪的结构中，将其染色。是显示脂肪的常用染料，但是在使用时要注意选择合适的溶剂，要求既能溶解

30、苏丹染料，又不破坏脂肪。常用Sudan III的70%酒精饱和液或丙酮和70%酒精等量饱和液将脂肪染为橙黄色。尼罗红（nile red）是一种亲脂性的荧光染料，能与脂类物质，包括蜡脂、三酰甘油和游离脂肪酸结合，在543nm(绿色)激发光下被激发出598nm的桔红色荧光，在450-500nm（蓝青光）激发光下，则显示为波长大于528 nm的金黄色荧光。,本实验将培养的绿藻在高光胁迫和氮素营养缺乏的条件下诱导藻细胞中的储藏物质由淀粉向脂肪的转变，在此过程中脂肪体由少变多，由小变大，最后形成大的脂肪体（lipid body）分布在细胞中。分别利用苏丹III和尼罗红染色后，在普通光学显微镜和荧光显微镜

31、下进行观察。在此过程中藻细胞的形态和生化组成发生明显变化。,目的要求,了解藻类培养的基本过程和方法。 掌握细胞内脂类染色和淀粉染色的方法。 了解荧光显微镜的构造并掌握其使用方法。,实验用品,1器具：培养管、三角瓶、酒精灯、1和10 ml移液管、带塞试管、量筒、大试管架（放大培养管用）、吸耳球、载玻片、盖玻片、吸管、通气管、通气泵、CO2、1 ml Eppendorf 管。 2材料：二形栅藻（Scenedesmus dimorphus）或小球藻（Chlorella sp.）,BG11 培养基 配制,储备液1： Mg Na2 EDTA 0.1g/l 柠檬酸铁铵 0.6g/l 柠檬酸 0.6g/l

32、CaCl22H2O 3.6g/l 储备液2： MgSO47H2O 7.5g/l 储备液3： K2HPO43H2O 4.0g/l 储备液4： NaCO3 2.0 g/l 储备液5： (微量元素) H3BO3 2.86g/L MnCl24H2O 1.81g/l ZnSO47H2O 0.222g/l CuSO45H2O 0.079g/l COCl26H2O 0.050g/l NaMoO42H2O 0.391g/l 使用时取10 ml储备液1、2、3和4、1.5g NaNO3和1 ml储备液5分别入到蒸馏水中，定容至1L。配制固体培养基时，在配好的培养基中按1.5%的比例加入琼脂，加热溶解后，灭菌备用

33、。,内容与方法,1 藻类细胞的活化和培养 将保存在固体培养基上的藻种用接种针或接种产刮下少许，放到盛有灭菌后BG11培养基的三角瓶中先进行活化培养，当藻细胞生长到密度较大时，即整个藻液呈浓绿色时，按1:6的比例转入到通气管中进行通气培养，为了使藻类生长地更快，可适当通入CO2和增加光强。待藻生长到接近平台期时，即可作为藻种使用，取藻种按1:10的比例分别接种到含0.75,0.375,0.188和0.09 g NaNO3/L的BG11培养基进行通气和非通气培养一周。,2藻类细胞形态观察 一周后观察生长的栅藻可以发现在氮源充足条件下培养的藻液呈深绿色，取少量藻样滴在载玻片上，盖上盖玻片观察，可以看到由栅藻多以2、4、8个细胞组成的群体存在。群体中细胞并列于一条直线上，中间细胞呈纺锤形或近纺锤形，上下两端渐尖，直立；两侧细胞则成镰