姜红 中国药典2010版抗生素品种增修订概况.ppt

1、2010年版中国药典抗生素品种增补修订概况，姜红，湖北省食品药品监督检验所，2010年5月26日，思路、特点、增补修订要点、分类、下版药典注意事项、临床应用广泛、销量居前、不良反应和不良事件比例高、稳定性差。基于以上特点，我们特别重视抗生素的质量控制，标准制定的思维特点，杂质控制理念的飞跃，显著提高了抗生素中微量有毒杂质的控制水平，重视多组分抗生素中小组分和无效组分的控制，加强了制剂中防腐剂的控制，实现了灭菌检验。杯碟法和浊度法同时控制不溶性药物颗粒/干混悬剂的溶出度，最终目的是保证安全性、有效性和可控性。1.杂质控制概念的飞跃，1986年以前的纯度控制，90年代初用经典化学方法控制杂质，90

2、年代末控制杂质谱，药物杂质谱的控制要求药物中杂质的种类和含量不能改变太多，特别是那些可能与毒副作用密切相关的杂质。在药品标准中，所需的分析方法不仅可以分离样品中的实际杂质，还可以分离各种潜在的杂质；主要杂质可以定性分离，并根据其来源和生理活性建立不同的质量控制限度。修订后的标准不仅对几乎所有品种(包括原料和制剂)均采用高效液相色谱法，而且通过梯度洗脱实现了有关物质的控制；此外，利用杂质对照品、混合杂质对照品，结合相对保留时间、液相色谱-质谱等方法，在高效液相色谱图中对报道的内酰胺类抗生素、喹诺酮类抗生素、大环内酯类和氨基糖苷类抗生素等多种杂质进行了分类，并建立了相应的质量控制限，其中数十种杂质

3、已被杂质对照品等方法独立控制。2005年药典方法，2010年药典方法，质量控制方法的有效性_氨苄西林钠/舒巴坦钠有关物质分析方法，有关物质分析杂质的定位和定量充分利用文献结果，并利用色谱相关光谱法将文献中的杂质结构与质量控制方法中的杂质峰进行关联，以确定杂质峰的结构；建立混合杂质对照品，并在常规分析中定位杂质峰；用主成分控制法分析杂质的相对含量，用杂质的响应因子确定杂质的绝对含量。2.抗生素中微量有毒杂质的控制有所改进，许多青霉素类和头孢菌素类药物中高分子杂质的含量受中国药典2005年版聚合物检验的控制。所采用的质量控制方法是葡聚糖凝胶G10凝胶色谱系统的残留溶剂检测，以及原有聚合物检测方法的

4、缺点：葡聚糖凝胶G-10凝胶柱的缺点逐渐暴露出来，如不能有效分离不同聚合度的-内酰胺类抗生素聚合物，易受开环剂等小分子杂质的影响；由于制剂中辅料的干扰，无法测定内酰胺类抗生素颗粒和干混悬剂中的高聚物；-内酰胺类抗生素的聚合物体系不知道常用-内酰胺酶抑制剂(克拉维酸钾和舒巴坦钠)的峰，因此无法确定-内酰胺类抗生素复方制剂中的聚合物。)无法确定；碳青霉烯-内酰胺类抗生素中的聚合物无法分离。分析时间长。在2010版中国药典中，虽然许多内酰胺类抗生素仍使用Sephadex G10色谱系统控制其聚合物含量，但高效凝胶色谱系统TSK2000已成功用于控制头孢地嗪钠的聚合物控制，这是高效凝胶色谱系统应用的第

5、一步。在中国药典2010年版用指向杂质控制-内酰胺类抗生素聚合物中，通过控制阿莫西林钠、氨苄西林钠、阿莫西林钠/克拉维酸钾、氨苄西林钠/舒巴坦钠及其制剂中的二聚体，成功解决了-内酰胺类抗生素复方制剂、部分阿莫西林颗粒等严重干扰品种在Sephadex G10凝胶色谱系统中的聚合物控制问题。残留溶剂控制法(ICH)根据对人体和环境的危害程度，将药品生产和纯化过程中常用的69种有机溶剂分为4类，并设定了限量标准。在生产过程中使用这些溶剂时，应控制残留量，以满足产品规格、GMP或其他基本质量要求。在中国药典2005年版中，残留溶剂的分类和限量标准与ICH要求完全一致，但仅在附录中作为主要要求。在201

6、0版中国药典中，几乎所有抗生素原料都按照其生产工艺进行了严格的残留溶剂检查；实际工作中普遍存在的问题、方法的多样性、品种的相同、残留溶剂的巨大变化以及基质效应和降解的共同峰值，对残留溶剂检测方法进行了相应的调整：改变了残留溶剂测定的常规步骤。首先对样品中的残留溶剂进行定性测定，然后根据检测对象制备相应的参比溶液，避免了繁琐的参比溶液制备，特别适用于小批量、少量残留溶剂的特定样品的测定。以头孢曲松钠为例，虽然标准中要求控制11种残留溶剂，但如果在实际测量中只检测到丙酮，则只需要制备含有丙酮的参比溶液，不需要制备含有11种有机溶剂的参比溶液，大大简化了残留溶剂检测过程中最复杂的参比溶液制备过程，提

7、高了检测效率。残留溶剂的检测方法也做了相应的调整：用RART法定性测定样品中的残留溶剂。虽然相对保留时间(RRT)是气相色谱分析中一种常用的定性方法，不含参考物质，但要求色谱系统中的所有参数在此时保持稳定。发现色谱系统的t0由甲烷决定，传统的相对保留时间(RRT)被溶质峰的调整后的相对保留时间(RART)所取代。由于调整后的相对保留时间只受柱温和固定相性质的影响，因此可以避免载气流速、柱尺寸等色谱参数对定性分析的影响。因此，RART用于表征样品中的残留溶剂。残留溶剂的检测方法也做了相应调整：用标准加入法测定。由于药物结构的多样性和残留溶剂与药物相互作用的不可预测性，大多数抗生素都采用标准加入法

8、进行定量，不仅避免了样品基质效应的影响，而且避免了复杂的溶剂筛选过程，可以获得更准确的定量结果。规则1:如何消除同峰干扰。对于残留溶剂测定不符合要求的样品，采用不同极性的色谱系统进行验证，可有效消除同峰干扰。如何消除热降解峰的干扰，规则2:改变顶空温度可以确定样品在顶空条件下是否会产生热降解干扰物。规则：分子结构中含有烷氧基的药物可以热解产生相应的醇。如何消除矩阵效应的影响，规则4:标准加法方法可以有效地消除矩阵效应的影响；当标准加入法与内标法的系统偏差约为10%(通常较低)时，可以认为该方法具有明显的矩阵效应。如何选择定量方法，规则5:药物中有机溶剂残留量的测定通常属于微量或痕量分析，外标法

9、通常规则7:当该方法的回收率超过80-120%时，建议不要将溶出介质用作测定药物残留溶剂的溶剂，而应换成其他介质进行再实验。目前，我国不仅接受了ICH控制化学品中残留溶剂的理念，而且建立了适合我国国情的残留溶剂控制方法。3.对多组分抗生素中小而无效的组分的控制是严格的。庆大霉素及其制剂不仅需要控制C成分的含量，还需要控制小诺霉素、西索霉素等未知成分的含量。对于麦白霉素，要求分别控制麦迪霉素A1和吉他霉素A6至少48%和12%，还要求麦迪霉素和吉他霉素A系列成分(A1、A2、A4、A6、A8)，大环内酯类和氨基糖苷类抗生素的主要成分、无效成分和未知成分也分别得到控制。组件的本地化是通过使用混合标

10、准和标准图集来实现的。4.加强制剂中防腐剂的控制。对于不具有足够抗菌活性的水溶液，通常需要添加适当的抑菌剂(防腐剂)，以防止在正常储存和使用过程中可能发生的微生物污染，特别是对于多剂量包装制剂，以避免微生物污染和药物变质对患者造成伤害。抗生素滴眼液具有一定的抗菌效果，但由于抗菌谱的限制，通常会添加防腐剂。但是，所有的抑菌剂都有一定的毒性，制剂中抑菌剂的用量应为最低有效剂量。最终包装容器中抑菌剂的有效浓度应低于对人体有害的浓度。中国药典(2010年版)首次在附录中加入了“抑菌效果试验方法指导原则”，用于测定灭菌和非灭菌制剂中抑菌剂的活性，评价最终产品的抑菌效果，指导生产厂家在制剂研发阶段筛选抑菌

11、剂。为了确保添加到制剂中的抑菌剂的量在规定的范围内，抗生素专业委员会要求处方中含有防腐剂和其他辅料的滴眼剂的种类和含量应加以控制，参照美国药典和其他外国药典，其含量应控制在其处方量的80，120。在新修订的抗生素滴眼液如氯霉素滴眼液和妥布霉素滴眼液中，抑菌剂如尼泊金甲酯、尼泊金乙酯、尼泊金丙酯和苯扎溴铵用高效液相色谱法进行控制。防腐剂、杂质控制剂和防腐剂混合溶液的色谱图(1:对羟基苯甲酸甲酯；2:对羟基苯甲酸乙酯；3:对羟基苯甲酸丙酯；4:氯霉素二醇；5:对硝基苯甲醛；6:氯霉素)，5。个性化的重要性。药品无菌检查是注射质量控制的重要组成部分之一。一旦注射液被微生物污染，将会对患者造成感染，甚

12、至威胁生命安全。为了保证临床应用的安全性，各国药典对药物注射剂的无菌有具体要求，抗生素注射剂也应符合药典无菌检查方法的一般规定。对于具有抗菌活性的药物注射剂的无菌检查，通常采用膜过滤去除药物的抗菌活性，并进行验证实验以确认抗菌活性是否完全去除，从而保证检查结果的有效性。根据中国药典2010年版无菌项目的起草要求，根据特定抗菌药物的抗菌谱和抗菌活性与中国药典规定的常用验证菌株的差异，选择最敏感菌株作为阳性对照；根据头孢菌素的抗菌谱，第一代注射用头孢菌素选用金黄色葡萄球菌CMCC (b) 26 003，第三代头孢菌素选用大肠杆菌CMCC (f) 44102，第二、四代头孢菌素选用金黄色葡萄球菌和大

13、肠杆菌作为阳性对照菌。利用阳性对照菌建立了该品种的标准操作规程，确定了最佳溶解方式、最佳洗涤液、洗涤方式等操作要点，并按照统一要求将上述内容写入各具体理论中，以方便今后的检验工作。对中国药典2010年版抗生素注射剂的无菌检查进行了充分的讨论。避免方法导致的假阳性和假阴性。6.抗生素效价测定同时采用杯碟法和浊度法。在中国药典2005年版中，只有庆大霉素同时含有杯碟法和浊度法，但在中国药典2010年版中，几乎所有的抗生素效价测定方法都含有杯碟法和浊度法。随着高效液相色谱法对大量单组分抗生素的测定，浊度法将成为多组分抗生素效价测定的主流。虽然2010版没有明确要求实验使用哪种方法，但当遇到仲裁样品，

14、尤其是多组分抗生素的仲裁样品时，浊度法显然更可靠。7.为了控制不溶性药物颗粒/干混悬剂的溶出度，在中国药典2010年版修订过程中，各起草单位将各种抗生素颗粒和干混悬剂的溶出度与片剂和胶囊的溶出度进行了比较。对罗红霉素和头孢泊肟酯等不溶性药物的颗粒和干混悬剂进行了溶出度试验。对于某些在片剂和胶囊溶出介质中极易溶出的品种(10分钟内溶出度大于80)，如阿莫西林、阿莫西林/克拉维酸钾颗粒和干混悬剂，认为没有必要专门控制溶出度。它不仅有效地控制了药品质量，而且最大限度地简化了质量控制项目。，采用高效液相色谱梯度洗脱法测定有关物质的品种很多，如头孢地尼、头孢唑啉钠、拉米夫定钠、阿莫西林及其复方制剂、氨苄

15、西林等。在比较了几种高效液相色谱法后，用同一种高效液相色谱法对红霉素及其衍生物以及制剂中的红霉素甲、红霉素乙、红霉素丙及有关物质进行了检测。有利于同类品种间的质量比较。四环素类，修订和修订要点统一了高效液相色谱法测定该品种有关物质和含量的色谱条件，与2005年方法相比有很大改进。检测到的杂质与EP6.0中规定的杂质有关，并根据国内产品的实际情况，制定合理的限值。氨基糖苷类药物添加和修订要点用高效液相色谱-ELSD法代替薄层色谱法检查有关物质和成分，提高检测灵敏度；同时，用该方法可以测定硫酸根的含量。喹诺酮类抗生素欧洲药典、英国药典和美国药典的添加和修订要点由薄层色谱法和高效液相色谱法控制。该版药典提出了用高效液相色谱法洗脱主峰后的梯度洗脱方法，在同一高效液相色谱系统中，用薄层色谱法和高效液相色谱法检测EP中的杂质。同时，根据各杂质最大吸收波长的不同，双波长检测对照品外标法与自控加校正因子法并列，不加校正因子。用高效液相色谱法检测杂质a，其灵敏度和准确度均优于薄层色谱法。使该品种标准的技术含量高于国外药典标准。、下版药典注意事项、2010年版药典抗生素研究工作；我国抗生素品种质量标准研究：克林霉素磷酸酯、链霉素、对青霉素、氟康唑、磷霉素(钠)、诺氟沙星、阿莫西林克拉维酸、利福平、青霉素、丁胺卡那霉素、苯