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文档简介

1、1.实验对象2。实验目的3。实验技术4。实验意义。胰岛素n末端氨基酸的测定。2.背景介绍。胰岛素原的一级结构，胰岛素的一级结构，n-末端分析法。二硝基氟苯法(DNP法或DNFB法)丹磺酰氯法(DNS法):苯异硫氰酸酯法(PITC法、正温度系数法、正温度系数法、埃德曼降解法)、氨肽酶法、DNP法、2，4-二硝基氟苯法、DNP-蛋白质法、DNP-氨基酸法、埃德曼降解法具有最佳灵敏度的苯乙内酰脲衍生物、苯乙内酰脲氨基酸法、DNS法、5-(二甲氨基)萘-1-磺酰氯法、DNS-埃德曼测序法、实验实验原理：脱氧核糖核酸氯在弱碱条件下与蛋白质氮端的游离氨基酸反应生成脱氧核糖核酸蛋白，脱氧核糖核酸蛋白经酸水解

2、得到脱氧核糖核酸氮端氨基酸。在酸性条件下，肽链的氮端氨基酸可以通过乙酸乙酯萃取和标准氨基酸色谱进行鉴定。色谱技术的原理是利用混合物中各组分的物理和化学性质的差异，使各组分分布在两个相中，一个是固定相，另一个是流动相。当流动相流过固定相时，由于组分与流动相的速度不同，它们被分离。色谱技术分类分配色谱凝胶色谱离子交换色谱亲和色谱高效液相色谱聚酰胺膜聚酰胺是由己二酸和己二胺或己内酰胺聚合而成的高分子化合物。它含有大量的酰胺基，其羰基可以与含羟基的物质形成氢键，从而导致吸附。聚酰胺薄膜色谱的原理聚酰胺薄膜色谱是指当样品溶液以流动相通过聚酰胺薄膜时，由于聚酰胺与各极性分子形成氢键的能力不同，其吸附能力也

3、不同；选择合适的铺展剂使分离后的物质在溶剂和聚酰胺膜表面的分布系数有很大差异，经过吸附和解吸后，各组分被分离；聚酰胺膜色谱灵敏度高，操作方便，速度快。，溶剂前沿，色谱点，原点，B，A，分离物质在纸色谱图上的位置用Rf值表示。在某些条件下，物质的Rf值是恒定的。Rf，从原点到色谱斑点中心的距离A，以及从原点到溶剂前面的距离B，结果记录如下：比值偏移值Rf，实验方法，0.1毫升胰岛素，0.1毫升DNS-Cl丙酮(摇匀，密封)，电吹风热空气蒸发除去丙酮，加入0.2毫升6M HCl，密封，在110烘箱中水解22小时，保持温度1.5-2小时，用乙酸乙酯萃取。倒入5ml烧杯中，用气体加热蒸发盐酸，加入少量蒸馏水，用0.1M盐酸酸化至pH 22.5，用0.5ml二硝基甲苯-氯丙酮溶液摇匀(摇匀并密封)，用电吹风蒸发除去丙酮，用0.1M盐酸酸化至pH 22.5，在40水浴0.5h，用乙酸乙酯(约500微升)摇匀毛细管标准样品3次，胰岛素样品3次，直径不超过将它放入层析柱铺展剂中铺展(约6-10米)，然后用电吹风吹干。在360纳米的紫外灯下测试实验结果，绘制地图并计算Rf值。将胰岛素的脱氧核糖核酸-氮

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