第六章黄酮类化合物.ppt

1、1,第六章 黄酮类化合物,Flavonoids,2,本章要求： 1.掌握黄酮类化合物的基本母核、常见类型的结构特点； 2.掌握黄酮类化合物的理化性质和检识方法。 3.掌握黄酮类化合物的提取、分离方法。 4.熟悉黄酮类化合物的含义、分布及生理活性。 5. 熟悉波谱法在黄酮类化合物结构测定中的应用。,3,第一节 概述,一、定义 黄酮类化合物是指基本母核为2-苯基色原酮类化合物。（原定义，1952年以前）,2-苯基色原酮,色原酮,4,现在定义： 泛指两个苯环通过三碳链相互连接而成的一系列化合物。,5,二、分布和存在形式,1.分布广泛 黄酮类集中分布于被子植物中如唇形科、玄 参科、菊科等植物中存在较多

2、。 黄酮醇类广泛分布于双子叶植物，特别是一 些木本植物的花和叶中。 二氢黄酮类蔷薇科、芸香科、豆科、杜鹃花 科、菊科、姜科中分布较多。,6,二氢黄酮醇类普遍存在于豆科植物中。 异黄酮类豆科、茑尾科。 双黄酮类化合物多局限分布于裸子植物，尤其是松 柏纲、银杏纲和凤尾纲等植物中。 在菌类、藻类、地衣类等低等植物中较少见,7,2.存在形式,黄酮类化合物在植物体内大部分以苷的形式存在。除常见的O苷外，还有少数的C-苷（如葛根素等） 小部分以游离形式存在,葛根素,8,三、生理活性多方面的生物活性,1. 对心血管系统的作用： （1）如：葛根总黄酮、银杏总黄酮 （2） 芦丁、橙皮苷等,扩张冠状血管,治疗冠心

3、病,降低毛细血管脆性和异常通透性,毛细血管性出血的止血药,治疗高血压、动脉硬化的辅助药,9,2.抗肝脏毒作用：,保肝作用,临床,急慢、性肝炎,肝硬化,多种中毒型肝损伤,水飞蓟素等,10,（1）金荞麦中的双聚原矢车菊苷元 抗炎、祛痰、解热 （2）槲皮素、杜鹃素 （3）羟基槲皮素,肺脓肿及其它感染性疾病,止咳、祛痰,支气管炎,预防和治疗,胃溃疡,3.抗炎作用：,11,异黄酮类化合物（染科木素、金雀花异黄素、大豆素等） 具有雌性激素样作用。,4.雌性激素样作用,己烯雌酚,可能是由于它们 结构相似,12,5.抗菌、抗病毒作用,木犀草素、黄芩苷、黄芩素抗菌作用； 槲皮素、桑色素、山柰酚抗病毒。,13,6

4、.抗肿瘤,大豆异黄酮与肿瘤防治关系的研究者指出：大豆的高消费量是亚洲居民乳腺癌、前列腺癌、大肠癌症低发的重要原因； 近年来，关于大豆抗癌作用的动物研究还涉及其它的肿瘤，如：肝癌、膀胱癌、皮肤癌和胃癌等，均显示较好的抗癌活性。,14,第二节、结构和分类,分类依据： A环和B环中间的三碳链的氧化状态； 三碳链是否成环； 3位是否有羟基取代以及B环连接的位置。,A、B环上常见的取代基有-OH、-CH3、-OCH3、异戊烯基等。,15,一、黄酮类,2-苯基色原酮为基本母核，且3位上无含氧基团取代。,芹菜素,木犀草素,16,二、黄酮醇类,黄酮醇类结构特点： 在黄酮基本母核的3位上连有羟基。,山奈酚,R=

5、H 槲皮素 R=芸香糖芦丁,17,三、二氢黄酮类,黄酮类母核2，3-位双键被氢化。如橙皮素、橙皮苷、甘草素和甘草苷等。,R=H 橙皮素 R=芸香糖 橙皮苷,R=H 甘草素 R=glc 甘草苷,18,四、二氢黄酮醇类,黄酮醇类母核2，3-位双键被氢化而成。 与相应的黄酮醇共存于同一植物体中。,二氢槲皮素,二氢黄酮醇,19,五、异黄酮类,异黄酮类母核为3-苯基色原酮的结构。,R1=R2=R3=H 大豆素 R1= R3=H R2=glc 大豆苷 R2=R3=H R1=glc 葛根素 R1= H R2=R3=glc 大豆素-7，4-二葡萄糖苷 R1=glcR2=xylR3=H 葛根素木糖苷,豆科植物葛

6、根,20,异黄酮的2，3-位被氢化的基本母核， 如紫檀素、鱼藤酮等。,鱼藤酮,六、二氢异黄酮类,21,二氢黄酮C环开环后形成的化合物，在酸的作用下查耳酮可转化为无色的二氢黄酮，碱化后又转为深黄色的2-羟基查耳酮,七、查耳酮类,2-羟基查耳酮,二氢黄酮,22,红花在开花的过程中不同时期呈现出不同的颜色：,开花初期时花冠呈淡黄色；,开花中期花冠为深黄色；,开花后期花冠呈红色。,花中主要含无色的 新红花苷及微量的 红花苷,红花苷黄色,醌式红花苷 （红色）,23,红花苷（黄色）,新红花苷（无色）,醌式红花苷（红色）,红花在开花的过程中化学反应式,24,八、二氢查耳酮类,梨根苷（苹果种仁）,查耳酮、位被

7、氢化,25,橙酮类又称噢哢类 其结构特点是C环为含氧五元环。,九、橙酮类,硫磺菊素,26,花色素类结构特点 基本母核的C环无羰基，1位氧原子以 盐形式存在。,十、花色素类,矢车菊苷元,27,十一、黄烷醇类,1.黄烷-3-醇类：又称儿茶素类，在植物中分布较广，主要存在于含鞣质的木本植物中。 2.黄烷-3，4-二醇类：又称无色花色素类；,（+）儿茶素,无色矢车菊素,28,其它类,山酮,高异黄酮,双黄酮,29,天然黄酮类化合物多以苷类形式存在 组成苷的糖有： 单糖：D-葡萄糖，D-半乳糖，D-木糖，L-鼠李糖， L-阿拉伯糖，D-葡萄糖醛酸 双糖：槐糖，龙胆二糖，芸香糖（Rha16Glc）， 新橙皮

8、糖（Rha12Glc）等 三糖：龙胆三糖，槐三糖 酰化糖：2-乙酰葡萄糖，咖啡酰基葡萄糖 除常见的O-苷外，还发现有C-苷，如牡荆素、葛根素等。,30,第三节 黄酮类化合物的理化性质,一、性状 1. 性状：多为结晶，少数为无定形粉末。,2.颜色,与分子中是否存在交叉共轭体系及助色团（-OH、-OCH3等）的种类、数目以及取代的位置有关,31,交叉共轭体系: 两个双键互不共轭，但分别与第三个双键共轭 黄酮（醇）及其苷类呈灰黄-黄色 查耳酮黄-橙色 二氢黄酮（醇）无色 异黄酮微黄色 花色素及花色苷：红色（pH8.5),32,二、旋光性,游离的各种苷元母核中，除二氢黄酮、二氢黄酮醇、黄烷及黄烷醇有旋

9、光性外，其余则无光学活性。苷类均有旋光性，多为左旋。,33,三、溶解度,黄酮(醇), 查耳酮 二氢黄酮(醇) 花色素,游离苷元：难溶于水，易溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯、乙醚等有机溶剂 苷：溶于水、乙醇、甲醇中，难溶于苯、氯仿 水溶度苷元苷，糖链越长，水溶度越大。,水溶性,平面型分子 非平面型分子 离子,增大,34,四、酸碱性,1.酸性：分子中有酚羟基，具酸性，可溶于碱性水溶液、吡啶、甲酰胺及二甲基甲酰胺 酸性强弱取决于羟基的数目和位置： 7,4 -OH 7-或4-OH 一般OH 5-OH,35,2.碱性： 1-位氧原子，有未共用的电子对，表现微弱的碱性，可与强无机酸，如浓硫酸、盐酸等生成不稳定烊

10、盐。,36,四、显色反应,（一）还原反应 1.HCl-Mg反应： 黄酮（醇）、二氢黄酮（醇）及苷（+） 橙红-紫红 查耳酮、橙酮、儿茶素类（黄烷醇类） （） 异黄酮（）（少数显色）,37,四、显色反应,2.四氢硼钠反应： 二氢黄酮（醇）（+）紫-紫红色。 （二氢黄酮与磷钼酸试剂反应呈棕褐色）,38,（二）金属盐类络合反应,1.锆盐：2%二氯氧化锆(ZrOCl2)生成黄色 络合物的稳定性：3-OH，4-C=O （二氢黄酮醇除外）大于5-OH，4-C=O,3-OH，4-C=O,5-OH，4-C=O,邻二酚羟基,39,锆-枸橼酸反应：鉴别黄酮中3-OH或5-OH,样品+ ZrOCl2 黄色 (3或5

11、-OH黄酮) 黄色不褪,枸橼酸 黄色褪色 (只有5-OH),(有3-OH),40,2.铝盐： 1%AlCl3或Al(NO3)3生成黄色, 并有荧光 3.铅盐： 1%醋酸铅及碱式醋酸铅生成黄红色沉淀 4.镁盐： 醋酸镁甲醇溶液 二氢黄酮(醇), 显天蓝色荧光,有5-OH更明显,黄酮(醇)、异黄酮，显黄橙黄褐色,41,5.氯化锶（SrCl2）：氨性甲醇溶液; 具有邻二酚羟基黄酮类反应生成 绿色棕色黑色沉淀,42,（三）硼酸显色反应 在酸存在下，生成亮黄色。如：加草酸，显黄色并有绿荧光；加枸橼酸，只显黄色。,5-OH黄酮 6-OH查耳酮,43,1.NH3蒸气，颜色加深，可逆；Na2CO3反应不可逆。

12、 2.二氢黄酮遇碱开环，生成查耳酮，显橙黄色。 3.黄酮类有邻二酚羟基或3，4-二羟基，在碱液中易氧化，生成由黄色、深红色至绿棕色沉淀。,（四）碱性试剂羟基黄酮颜色加深,44,判断下列化合物酸性大小,C,B,A,45,问题： 预测芦丁的显色反应结果,HCl-Mg反应 NaBH4反应 锆-枸橼酸反应 氨性SrCl2反应 硼酸+草酸反应 Molish反应,（+）红紫红色 （-） 黄色，加枸橼酸,褪色 （+）棕色沉淀 （+）黄色 （+）紫色环,46,第四节 提取和分离,一、提取与粗分 苷元： 用氯仿、乙醚、乙酸乙酯等回流提取 苷及极性大的苷元： 用丙酮、乙酸乙酯、乙醇、甲醇、醇-水加热提取 溶剂萃取

13、法（系统分离法） 碱提取酸沉淀法,47,1.溶剂提取法,药材,水或醇-水，加热提取,提取液,浓缩，加34倍量醇,（水提醇沉法）,醇水液,沉淀(水杂),浓缩，回收醇，加水,水液,依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取,石油醚层 (叶绿素胡萝卜素脂溶性成分),氯仿层 (黄酮苷元),乙酸乙酯层 (极性大苷元极性小的苷),正丁醇层(黄酮苷),水 层(多糖蛋白质),48,2.碱提酸沉淀法,原理：酚羟基与碱成盐，溶于水；加酸后析出。 碱：常用Ca(OH)2，即石灰乳或石灰水。 优点：一方面可使含酚羟基化合物成盐溶解，另一方面可使含COOH杂质（如果胶、粘液质、蛋白质等）形成不溶的沉淀。 注意：碱性不宜过

14、强，以免破坏黄酮母核；酸化时，酸性不宜过强，pH34即可，以免形成盐而溶解。,49,50,二、分离,极性差异： 硅胶色谱 酸性差异： pH梯度萃取 成氢键差异： 聚酰胺色谱 分子量差异：凝胶色谱 特殊结构： 金属盐络合,51,（一）柱色谱法 1.硅胶色谱：按极性大小分离，主要分离极性小和中等极性的化合物。 吸附规律：极性大吸附牢。 如：A 、苷元 B 、 一糖苷 C 、二糖苷,Rf :ABC,52,洗脱时大体有下述规律：,2.聚酰胺色谱：,吸附强度主要取决于黄酮酚羟基的数目与位置及溶剂与黄酮类化合物或聚酰胺之间形成氢键缔合能力的大小。,1）与结构有关,A.酚羟基越多，吸附越牢。 B.酚羟基数目

15、相同时，间位或 对位的羟基吸附力大于邻位羟基。 C.形成分子内氢键，吸附弱 D.共轭程度越高，吸附越牢 E.酚羟基苷化，吸附力减弱Rf 值增加,53,不同类型黄酮流出顺序： 异黄酮，二氢黄酮醇，黄酮，黄酮醇,2）与溶剂有关 聚酰胺与各类化合物在水中成氢键的能力最强，在有机溶剂中较弱，在碱中最弱。 溶剂的洗脱能力由弱至强的顺序为： 水 乙醇 碱性溶剂 甲酰胺 二甲基甲酰胺 脲素水溶液,54,习题：下列黄酮化合物，（1）用聚酰胺柱色谱，含水甲醇梯度洗脱，（2）用硅胶柱色谱分离，氯仿-甲醇梯度洗脱，分别写出洗脱顺序。,洗脱顺序： 聚酰胺：DECAB 硅胶：ABCDE,55,3.葡聚糖凝胶,常用型号：

16、Sephadex-G，适用于水系统 Sephadex-LH20适用于水及有机溶剂系统 分离游离黄酮，主要靠吸附作用。吸附程度取决于游离酚羟基数目。 分离黄酮苷，分子筛的性质起主导作用。在洗脱时，黄酮苷类按分子量由大到小的顺序流出柱体。,56,洗脱剂： （1）碱性水溶液（如0.1mol/L NH4OH），盐水溶液(0.5mol/L NaCl)。 （2）醇或含水醇，如甲醇，甲醇-水，乙醇等。 （3）其它溶剂：丙酮-水，氯仿-甲醇等。,57,例： 黄酮类化合物在Sephadex-LH20(甲醇)上的Ve/Vo,注：Ve为洗脱样品时需要的溶剂总量或洗脱体积；Vo为柱子的空体积。Ve/Vo数值越小，说明

17、化合物越容易被洗脱下来。,结论: 苷元的羟基数越多, 越难洗脱;苷的分子 量越大, 连接糖的数目越多, 越容易洗脱.,58,4.高效液相色谱,多采用反相色谱 常用洗脱剂为含有一定比例甲酸或乙酸的水甲醇系统或水乙腈系统。,59,（二）梯度pH萃取法,分离酸性强弱不同的黄酮苷元 酸性： 7,4 -OH 7-或4-OH 一般OH 5-OH,溶于 NaHCO3 Na2CO3 不同浓度的NaOH,样品,乙醚,乙醚液,依次 萃取,5%NaHCO35%Na2CO3 0.2%NaOH4%NaOH,分别 酸化,各部分黄酮,酸性减弱,60,（三）根据某些官能团进行分离,醋酸铅沉淀法： 具有邻二酚羟基，可被醋酸铅沉

18、淀; 不具有邻二酚羟基，可被碱式醋酸铅沉淀。 生成的铅盐沉淀通H2S 除去PbS 滤液,61,第五节 黄酮类化合物的检识,一、理化检识 形态、颜色、显色反应,62,二、色谱检识1.纸色谱（双向纸色谱法）,二次展开,一次展开,n-BuOH-HAc-H2O,26%HAc,63,双向纸色谱法,第一向展开剂：醇性溶剂，如n-BuOH-HAc-H2O (BAW, 4:1:5上层) 正相分配 Rf： 苷元单糖苷双糖苷，一般 苷元0.7， 苷0.5, 糖链越长，Rf越大； (2)苷元：黄酮(醇)，查耳酮 (Rf0.02) 二氢黄酮(醇)，二氢查耳酮 (Rf 0.10.3),64,2.硅胶TLC 常用展开剂：

19、氯仿甲醇、正丁醇乙酸水等 3.聚酰胺TLC (双重色谱P151) 常用展开剂：游离黄酮氯仿甲醇 黄酮苷甲醇水,65,练习：从某植物中分离出四种化合物，其结构如下：,试比较四种化合物的酸性， 极性大小 比较它们的Rf值大小顺序： 1）硅胶TLC，展开剂CHCl3-MeOH（9:2） 2）聚酰胺TLC，60%MeOH/H2O展开 3）PC，5%HAc展开,A R1=R2=H B R1=H, R2=Rha C R1=Glc, R2=H D R1=Glc, R2=Rha,酸性 ACBD 极性 DCBA Rf ：ABCD DBCA DCBA,66,第六节 黄酮类化合物的结构研究,一、UV光谱 UV光谱在

20、黄酮类化合物结构研究中具有重要的应用价值 其特点是：样品用量少； 特殊诊断试剂的应用可增加鉴定结构的信息量。,67,原理：黄酮类存在桂皮酰基及苯甲酰基组成的交叉共轭系统，在200400nm间，有两个主要的紫外吸收带,峰带II 240280nm A环苯甲酰基系统,峰带I 300400nm B环桂皮酰基系统,共性：B环含氧基团增加，峰带I 向长波位移(红移)，特 别是4-OH，红移大 A环含氧基团增加，峰带II红移。,68,黄酮类化合物UV吸收范围（MeOH中）,带I （nm） 带II（nm） 黄酮类 304350 250285 黄酮醇(3-OR) 328357 同上 黄酮醇(3-OH) 3523

21、85 同上 异黄酮 310330 肩峰 245270 二氢黄酮(醇) 300330 肩峰 270295 查耳酮 340390(有裂分) 220270 弱 橙酮 370430(34个峰) 同上 见P156表6-3,69,1 .黄酮、黄酮醇类 峰带I和II强度相似,I,II,带I ：黄酮类 304350nm 黄酮醇（3-OH被取代）328357 黄酮醇（3-OH游离） 352385 带II ： 240285nm,（一）黄酮类在甲醇溶液中的UV光谱特征,70,1 .黄酮、黄酮醇类,取代基的影响: 带I ：母核上，如7-及4 -位引入羟基、甲氧基等供电基，将促进结构重排，有利于实现上述电子跃迁，可引起

22、相应吸收带红移。母核上氧取代程度越高，带I 将越向长波方向位移。羟基甲基化或苷化，将引起紫移。 带II ：A-环氧化程度越高，带II越向红移。B环的取代基只影响峰形。,71,2.异黄酮、二氢黄酮(醇)类 带I 弱，带II 强峰,II,I,nm,只有A-环苯甲酰系统，带II 为主峰 带II 异黄酮 245270nm 二氢黄酮（醇） 270295nm 带I 肩峰,72,3.查耳酮、橙酮类 带I 强，带II 次强峰,II,I,带I 带II 查耳酮 340390nm(有裂分) 220270nm 橙酮 370430nm(34个峰),73,（二）加入诊断试剂的UV光谱在黄酮类结构研究中的应用,在测定了黄酮

23、类化合物在甲醇溶液中的UV光谱后，可向其甲醇溶液中加入各种诊断试剂，如甲醇钠（NaOMe）、乙酸钠（NaOAc）、乙酸钠/硼酸（NaOAc/H3BO3 ）、三氯化铝（Alcl3）及三氯化铝/盐酸（Alcl3/HCL）等试剂，使黄酮类化合物中的不同酚OH解离或形成络合物等，导致光谱发生规律性变化。将上述各种UV光谱图进行分析比较，可以获得更多的有关结构的重要信息。,74,诊断试剂对黄酮、黄酮醇类UV光谱影响,1.甲醇钠（NaOMe） 判断4-OH 黄酮类化合物上所有酚羟基，均可在 NaOMe 中成盐，引起红移。 带I 红移4065nm, 强度不降. 有 4-OH 如带I 红移5060 nm，强度

24、减弱，则示有3-OH 但无4-OH。 7-OH游离，则一般应在320330 nm处有吸收。如果7-OH结合成苷，则该吸收即消失。,75,含有3，4-二羟基或3，3，4-三羟基的黄酮类，在NaOMe碱性下容易被氧化分解，故吸收带随测定时间延长而衰退。含有5，6，7-或5，3，4-三羟基黄酮也对NaOMe敏感。,76,（2）乙酸钠： 判断7-OH 带特征性地红移520nm 有7-OH 6-位和8-位同时有含氧取代基（如-OCH3等供电基），使7-OH酸性减低，故上述红移幅度很小或不能辨别。 黄酮或黄酮醇类化合物如果具有5，6，7-或5，7，8-或3，3，4-三羟基或3，4 二羟基-3甲氧基等。因对

25、NaOAc敏感，故加NaOAc后得到的光谱图随时间延长而衰退。,77,（3）乙酸钠/硼酸： 判断邻二OH 黄酮或黄酮醇类化合物A环或B环上如果具有邻二酚OH时（5，6-邻二酚OH除外），在 NaOAc碱性下可与H3BO3络合，使相应的吸收带红移 与甲醇UV比较: 带红移12-30nm B环有邻二酚OH 带位移5-10nm A环有邻二酚OH（不包括5，6-邻二酚OH),78,（4）三氯化铝及三氯化铝/盐酸： AlCl3与5-OH, 4-C=O; 3-OH, 4-C=O及邻二酚OH络合，引起红移。 邻二酚OH与Alcl3形成的络合物没有3-羟基、4-羰基和5-羟基、4-羰基与Alcl3形成的络合物

26、稳定，当加入HCL后可分解（少数例外），使相应的吸收带紫移。,79,黄酮（醇）：,a. AlCl3/HCl与MeOH中光谱比较 相同时，示无3-OH或5-OH。 不同时： 带I 红移3555nm； 只有5-OH，无3-OH 带I 红移1720nm； 5-OH，6-氧代 带I 红移5060nm；有3-OH或有5、3-OH,判断3-OH, 5-OH,80,b. AlCl3与AlCl3/HCl中光谱比较 相同时，无邻二酚羟基； 不同时： 带I 紫移3040nm； B环有邻二酚羟基 带I 紫移5060nm: A，B环均可能有邻二酚羟基,判断邻二OH,81,82,实例：P157,芦丁的UV max,nm

27、: MeOH 259, 266sh, 299sh,359 NaOMe 272, 327, 410 NaOAc 271, 325, 393 NaOAc/ H3BO3 262,298,387 AlCl3 275, 303sh, 433 AlCl3/ HCl 271, 300, 364sh, 402,I=410-359=51nm， 4 -OH,II=271-259=12nm, 7-OH,I=387-359=28nm, B环有邻二OH,AlCl3/HCl与AlCl3相比， I=402-433= -31nm, B环有邻二OH,AlCl3/HCl与MeOH相比， I=402-359=43nm, 有 5-O

28、H，无3-OH.,83,HCl-Mg反应（+），Molish反应（+），ZrOCl2反应黄色，加入枸橼酸褪色，酸水解检出Glc和Rha。,-Glc-Rha 芦丁,84,二、核磁共振氢谱（1H-NMR）,1H-NMR是结构研究的一种重要方法，具有简便、快速且可获得大量极有价值的结构信息。 DMSO-d6是测定黄酮的常用的理想溶剂。优点是大部分黄酮均易溶于DMSO-d6中，可直接测定其NMR谱，而不需要制备衍生物；DMSO-d6溶剂信号（2.50）也很少与黄酮类化合物信号重叠；对各质子信号分辨率高。但是，DMSO-d6最大的缺点是沸点较高，测定后溶剂的回收一般经冷冻干燥法才能完成。,85,早期也将

29、黄酮类化合物制备成三甲基硅醚衍生物，用CCl4为溶剂进行测定。CCl4本身不含质子，使测得的光谱易于分析。但此法由于需要制备衍生物，故目前已基本不被采用。 需要指出的是，本章介绍的各种黄酮类化合物的1H-NMR谱规律均是制备成三甲基硅醚衍生物后，溶于CCl4中进行测定而获得的数据中总结出来的。因此，分析在DMSO-d6中测定的结果时，应注意其各种质子信号的化学位移值也可能超出本书所述范围，但其各种信号的峰形和在整个NMR谱中的相对位置却是基本一致的。,86,（一）C环质子 区别各类黄酮的主要依据,黄酮 H-3 6.3 (尖锐s ) (常与A环质子重叠),2. 异黄酮 H-2 7.67.8 (用

30、DMSO-d6作溶剂时为8.58.7),87,（一）C环质子,3. 二氢黄酮 (2位为S构型) H-2 5.2, (dd, 11, 5Hz) Ha-3 2.83.0 (dd, 17, 11Hz) He-3 2.8 (dd, 17, 5Hz) ( Ha-3 He-3),4. 二氢黄酮醇 H-2 4.9 (d, 11Hz) H-3 4.3 (d, 11Hz),88,5. 查耳酮 H- 6.77.4 (d, 17Hz) H- 7.37.7 (d, 17Hz),6. 橙酮 苄基质子 6.56.7 s,（一）C环质子,89,(二) A环质子,(1). 5,7-二OH H-6,8 5.76.9,d, J=

31、2.5Hz H-8H-6,(2). 7-OH H-5 7.78.2 (d, 8Hz) H-6 6.47.1 (dd, 8, 2Hz) H-8 6.37.0 (d, 2Hz) H-5受C=O的去屏蔽作用而处于低场，化学位移增大。,90,(三）B环质子,1. 4-OR 2, 6-H 7.18.1, d, J=8Hz 3, 5-H 6.57.1, d, J=8Hz （两组峰，每个峰有两个H，AABB系统）,91,(三）B环质子,2. 3, 4 二OR 黄酮（醇） H-5 6.77.1, d, J=8.5Hz H-6 7.9, dd, J=8.5, 2.5Hz H-2 7.2, d, J=2.5Hz,

32、92,(三）B环质子,3. 3,4, 5-三OR H-2, 6, 6.57.5 R=R, 为一个单峰s(2H); RR，为两个二重峰d(J=2Hz),93,（四）糖基上的质子,1.单糖苷类 糖的端基质子（以H-1 表示）与糖的其他质子相比，位于较低磁场区。其具体的峰位与成苷的位置与糖的种类等有关。 P164表611 2.双糖苷类 末端糖的端基质子（以H-1表示），因离黄酮母核较远，受其负屏蔽影响较小，它的信号比H-1处于较高磁场，而且，其向高场位移的程度因末端糖的连接位置不同而异。,94,1. 羟基 溶剂一般采用DMSO-d6(无水), 观测OH位移. 5-OH 12.40, 7-OH 10.

33、9, 3-OH 9.7, 4-OH 10 (这些信号加D2O后消失) 见 P165166图,（五）其它取代基,95,2. 甲氧基 连在芳香环上, 3.54.1 (3H, s). 3. 甲基 C6-CH3 2.042.27 C8-CH3 2.142.45 C6-CH3 C8-CH3 相差0.2ppm.,96,4. 乙酰氧基(CH3CO-) 脂肪族CH3CO 1.652.10 (确定糖数) 芳香族CH3CO 2.302.50 (确定酚羟基数) 注: 六碳糖苷乙酰化, 有4个R-OAc; 甲基五碳糖和五碳单糖苷乙酰化后, 有3个R-OAc; 糖与糖结合后,要去掉一个R-OAc.,97,例：某一黄酮化

34、合物的1HNMR如下：,1HNMR(TMS) ppm: 6.18 (1H, d, J=2Hz) 6.38 (1H, s) 6.50 (1H, d, J=2Hz) 6.90 (2H, d, J=8Hz) 7.70 (2H, d, J=8Hz) 该化合物乙酰化后, 1H-NMR测定乙酰基质子数为9H.,6-H 3-H 8-H 3, 5-2H 2, 6-2H,98,99,三、核磁共振碳谱（13CNMR）,1. 根据C环三碳化学位移确定黄酮骨架 (1) 根据C=O化学位移分为二类 a. 174184 黄酮(醇), 异黄酮, 橙酮 b. 188197 查耳酮, 二氢黄酮(醇),100,(2). 根据C-

35、3的化学位移细分 黄酮 103112 异黄酮 122126 黄酮醇 136139 橙酮 111112 查耳酮 116130 二氢黄酮 4245 二氢黄酮醇 71 见P167表614,101,OH或OCH3，使同碳原子(-碳)信号向低场大幅度位移 (+30 ppm), 邻位(-碳)(-12ppm)及对位碳(-7ppm)向高场位移, 间位碳向低场位移小(+1ppm). 见P168表615 常见的取代模式：,2.取代基位移,102,3. 苷化位移(Glycosidation Shift, GS),用于判断糖的连接位置 (1)糖的苷化位移(端基碳) 酚苷中, 糖端基碳苷化位移为+4 - +6ppm,

36、取决于酚羟基周围环境. (2)苷元的苷化位移 苷元糖苷化后, 直接连糖的碳原子(-碳)向高场位移, 其邻位及对位碳原子向低场位移, 且对位碳原子的位移幅度最大又比较稳定. 邻,对位碳原子苷化位移具有指导意义.,103,四、质谱（MS）,电子轰击质谱（EI-MS） 苷元：可得到M+，且为基峰； 苷：得不到M+，可得到苷元的碎片。 制备衍生物（如全甲基化）测EI-MS，可看到M+，但强度较弱。,104,五、质谱（MS）,场解析质谱（FD-MS）和快原子轰击质谱（FAB-MS） 用于测定极性较强的苷类化合物，可得到M+ ， M+ +1， M+ +Na， M+ +K峰。 峰强度大，且给出糖基碎片。,1

37、05,黄酮类化合物苷元的EI-MS裂解途径,途径 I （RDA裂解）,222,106,途径-II,黄酮类: 途径-I为主 M+常为基峰 黄酮醇类: 主要按途径-II 进行 M+常为基峰, 碎片离子主要有B2+和 B2-28+及A1+H+,等.,107,七、结构鉴定实例,化合物asiaticalin（A）是从分株紫萁（Osmunda asiatica）中分得，为黄色针晶，三氯化铁反应：暗绿色；镁粉-盐酸反应：紫红色。 元素分析：示分子式为C21H20O11。 UV(max nm): MeOH 267, 352 NaOMe 275, 328, 402 AlCl3 274, 301, 352, 39

38、8 AlCl3/HCl 276, 303, 347, 400 NaOAc 275, 305sh, 372 NaOAc/H3BO3 266, 300sh, 353,示为黄酮苷类,黄酮醇或苷 I=50, 4-OH 二者相同, 无邻二OH I=48, 只有5-OH II=8,有7-OH 同MeOH, 无邻二OH,108,IR max(KBr) cm-1: 3401(OH), 1655(Ar-CO), 1606, 1504(苯环)1H-NMR (DMSO-d6, TMS内标) : 3.23.9 (6H, m) 3.95.1 (4H, 加D2O后均消失 5.68 (1H, d, J = 8.0Hz) 6

39、.12 (1H, d, J = 2.0Hz) 6.42 (1H, d, J = 2.0Hz) 6.86 (2H, d, J = 9.0Hz) 8.08 (2H, d, J = 9.0Hz),糖上6个H 糖上OH 糖端基质子(H-1”) A环H-6 A环H-8 B环H-3, 5 B环H-2, 6,109,苷元的确定: 将A用2% H2SO4水解, 水解液经纯化得苷元, 与标准品对照为山奈酚(5, 7, 4-三OH 黄酮醇). 糖基的确定: 水解液经中和后,与标准品对照, 进行PC,TLC及糖分析仪测定, 确认为-D-allose.（阿洛糖）,110,第七节 含黄酮类化合物的中药实例,一、槐米 主要化学成分：芦丁，槲皮素;,结构,生物活性、提取分离方法等详见P176,111,二、黄芩 化学成分：黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素等。详见P177。 黄芩炮制或贮藏不当变绿，影响质量。其原理如下：,黄芩酶,O 绿色,112,三、葛根