人巨细胞病毒潜伏—激活感染诊断的进展.ppt

1、,临床免疫学疾病的实验室检测-2,(clinical immunological test) - part 2,肿瘤标志物的检测,肿瘤标志物(tumor marker;TM)： A substance that may be found in tumor tissue or released from a tumor into the blood or other body fluids. A high level of a tumor marker may mean that a certain type of cancer is in the body. (肿瘤细胞所产生或分泌的某种蛋白质

2、,它们 的出现与肿瘤的存在和发展有密切关系。),肿瘤标志物的分类(classify)： 1、肿瘤特异性抗原(TSA） 2、肿瘤相关性抗原(TAA） 3、肿瘤细胞增生(proliferation) 4、癌基因、生长因子与受体 5、肿瘤抑制基因和基因产物,1、肿瘤特异性抗原（TSA）： 指仅表达与肿瘤细胞表面，而不存在于正常组织细胞的新抗原。,2、肿瘤相关性(associable)抗原: TAA:是指非肿瘤细胞所特有，正常组 织细胞也可表达的抗原物质，作为肿瘤 标志物监测，是因为此类抗原在癌变细 胞的表达水平远超过于正常细胞，但又 无严格的肿瘤特异性。,3、肿瘤细胞增生标志物： 是指与肿瘤细胞增(

3、proliferation)： 的标志性物质，目前被广泛接受的有Ki- 67和PCNA（增生细胞核抗原）。 因为Ki-67和PCNA的免疫反应性与细 胞增生的形态特征关系密切。,4、癌基因、生长因子与受体： 正常细胞有原癌基因，当原癌基因激 活后变成癌基因，可引起细胞恶性转化 癌基因的作用中又需要生长因子及其 受体的协同参与。 例：HER-2/neu基因 Ras基因 表皮生长因子受体,5、肿瘤抑制基因和基因产物： 是指抑制肿瘤发生、发展的基因 （抑癌基因）和其基因产物。 例：Rb基因 p53基因等,主要肿瘤标志物检测:,1、CEA 2、AFP 3、CA12-5 4、PSA 5、CA19-9 6

4、、NSE 7、SCC 8、HCG 注：标志物的本质(nature)、检测方法 (mathod)、参考值范围(reference value)、临床意义(significance)及注 意事项(attention）。,1、CEA（carcinoembryonic antigen） 癌胚抗原-于1965年被发现，通过由人 直肠组织提取物免疫动物获得抗血清并 经吸收。再将此抗血清与肿瘤/正常组织 分别反应，只与肿瘤组织有反应。 由于此抗原也能在胚胎组织中发现， 故称“癌胚抗原”。 检测方法有ELISA、RIA、自动免疫,CEA在正常情况下由胎儿胃肠道上皮、胰腺和肝细胞合成，经胃肠道代谢。肿瘤状态时C

5、EA大量分泌并经入血和淋巴液循环导致血清中CEA上升。 正常群体CEA值：3ug/L;吸烟者5ug/L;孕妇的前6个月升高,产后恢复 测得值60ug/L时,肿瘤?(恶性/良性),意义及注意事项: (significance and attentions) 1、值升高 胃、结/直肠、肺癌，胰 胆道与膀胱癌（待检物来源） 2、注意 良性肿瘤（病症）也可升高 转移时升高，术后恢复持续升 高，示预后不良不宜选为筛选 （假阳/阴性） (false posiyive / negative),2、AFP（alpha-fetoprotein）： 甲胎蛋白-是胚胎期肝脏和卵黄囊合成 为胎儿循环中主要蛋白，出生后

6、水平下 将，18个月后至正常人水平。 肝细胞恶变又可获其功能导致血清含 量增高(rejuvenated,返祖)，目前成为 肝细胞和生殖（非精原）细胞恶性肿瘤 的标志物。,AFP的检测方法同前外，用金标记测定 正常成人：血清10ug/L；妊娠14周起上升至23g/L后逐降，足孕70mg/L分娩后迅速下降。 意义： 500ug/L多见于原发肝癌。 良性肝病也可升高，但多 200ug/L 。 多用于筛选、判断预后及调整治疗等。,3、CA12-5/ 5、CA19-9 ： 属糖类抗原标志物，使由肿瘤细胞分 泌释放或存于该细胞表面的抗原，又归 属肿瘤相关抗原。 有CA12-5（卵巢癌相关）；CA19-9

7、（胰腺、肠癌）；乳腺癌（ CA15-3） 消化系统（ CA242）及CA50等。,CA12-5：在卵巢肿瘤上皮和Mullerian 副肾管来源的组织中表达（病理/正常） 正常人血清35U/ml。 CA12-5血中代谢快，测得值反映近期 CA12-5值升高 恶性肿瘤（晚） 少数异位症、良性等 CA12-5监测（动态），反映病情、预 后（手术指征）,CA19-9：一种与胰腺、胆囊、结肠和 胃癌等相关的肿瘤标志物，本质为细胞 膜上的糖脂质，因制备的单克隆抗体而 命名。正常参考值37U/ml。 胰腺癌的阳性率7092%，胆管癌66% 胃癌2560%，肝癌5660%，结直肠癌 1858%。 伴黄疸的良性

8、疾患也可升高，但一般不 120U/ml，随处置而下降。,4、PSA（prostate specific antigen）： 前列腺特异抗原由前列腺分泌的单 链糖蛋白，存在于前列腺管道上皮细胞 中发生前列腺癌时血清中含量升高。 正常男性：4ug/L（f-1ug/L ） 升高：前列腺癌、增生、炎症等 应用：普查、疗程跟踪、复发监测,6、NSE(neuron specific enolase) 神经元特异性烯醇化酶是烯醇化酶 的同功酶，正常存在于神经组织和RBC 中，正常人血清值13ug/ml。 升高：小细胞肺癌、神经母细胞瘤和 其内分泌肿瘤及脑损伤。 注意：标本禁止溶血 动态监测可用于疗效、评估预

9、 后等。,7、SCC（鳞状细胞癌抗原）：属糖蛋白 是一种鳞状细胞癌标志物（宫颈癌、肺 癌、头颈部癌等）,血清1.5ug/L。 8、HCG（人绒毛膜促性腺激素）：作为 绒毛膜上皮细胞癌标志，异位妊娠？ 检测HCG包括总HCG和f-HCG。,肿瘤标志物的应用原则 （ applied principle）,相关的标志物联合检测提高灵敏度 阳性标志物的动态监测提高准确性 （union / dynamics ） 不宜凭单项、单次的检测结果下诊断结论,肿瘤标志物的联合应用 （joint apply）,例：肺癌：NES、CEA、CYFRA21-1 乳腺癌：CA15-3、CEA 肝癌：AFP、CEA、AKP同

10、功酶 胰腺癌：CA19-2、CA242、CA50 卵巢癌：CA12-5、CEA、CA19-9 HCG,自身免疫性疾病的免疫学检验（diagnostic of autoimmune disease）,Systemic lupus erythematosus；SLE,Rheumatoid arthritis；RA,Hashimotos thyroiditis,Ankylosing spondylitis,Autoimmune diseases: A condition in which the body recognizes its own tissues as foreign and direc

11、ts an immune response against them. 自身免疫病：指因自身免疫应答反应而导致破坏自身正常组织结构并引起临床症状。（由：自身抗体/自身反应性T淋巴细胞）,临床各科自身免疫性疾病举例(附表),累及系统 自身免疫性疾病举例(example) 血液系统 自身免疫性溶血性贫血、特发性血小板 (blood) 减少性紫癜、特发性白细胞减少症等 神经肌肉 多发性硬化症、重症肌无力、脱髓鞘疾 (nerve/muscle) 病等 内分泌系统 原发性肾上腺皮质萎缩、慢性甲状腺 (endocrine)炎、胰岛素依赖性糖尿病等 消化系统 非特异性溃疡性结肠炎、慢性活动性肝 (diges

12、tive)炎、恶性贫血与萎缩性胃炎等 泌尿系统 自身免疫性肾小球肾炎、肺肾出血性 (uropoietic)综合症等 结缔组织 类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、皮 (connective tissue)肌炎、硬皮病等,检测自身抗体(Autoantibodies) 免疫复合物(immune complex) 其他相关因素（Ig、complement lymphocyte、cytokine,etc）,Autoantibodies: Autoantibody have been defined as an aberration of an essentially physiological and p

13、rotective process, representing immunoglobulins reacting against self-molecules. （由于机体自身免疫的发生，使得机体免疫 系统产生了针对机体自身组织成分的抗体， 称。）,自身抗体(Autoantibodies)： 包括：抗核抗体(胞核内成分) (anti-nuclear antibody;ANA) 抗细胞浆(cytoplasmic)成分抗体 抗磷脂(anti-phospholipid)抗体 类风湿因子(rheumatoid factor,RF),抗核抗体（广义）：抗细胞核内所有抗 原成分(核质膜仁DNA等)的自身抗

14、体。,抗体名称 检测所用抗原 临床意义 抗核抗体(均质型） HEp-2细胞抗原片 高滴度主要见于SLE,低滴 或大鼠肝细胞印片 度可见于RA、慢性肝病、 传单或药物诱发的狼疮者 抗核抗体（斑点型） 混合性结缔组织病、SLE 硬皮病、SS等。 抗核抗体（核膜型） 高滴度几乎仅见于SLE 抗核抗体（核仁型） 高滴度对硬皮病特异 dsDNA抗体 马疫锥虫或短膜 是SLE的特征性抗体 RNP抗体 ENA抗原 硬皮病滴度高，其它自身 免疫病低水平阳性，RA一 般为阴性 Sm抗体 是SLE的标志性抗体（其它 疾病很少阳性），但敏感 性只有30左右 Scl-70抗体 系统性硬化症的标记抗体 SSA/Ro、S

15、SB/La抗体 干燥综合征 J0-1抗体 多发性皮肌炎和皮肌炎的 标记抗体,抗细胞浆成分抗体: 抗线粒体抗体 抗肌动蛋白抗体 抗溶酶体抗体 抗Jo-1抗体等 方法:免疫组化 意义:肝病的鉴别 肌炎 肺纤维化等,抗组织细胞抗体: 1、抗肾小球基底膜(anti-glomeular basement membran)抗体 （肺出血肾炎综合征,Good pasture） 2、抗甲状腺（anti-thyroid）抗体 （甲状腺炎thyroiditis,甲亢Graves 病） 3、抗胰岛(insular)细胞抗体 （胰岛素依赖性糖尿病,IDDM） (insulin dependent diabetes m

16、ellitus),类风湿因子（rheumatoid factor）： 是变性IgG刺激机体产生的一种自身抗 体，主要存在于类风湿关节炎患者的血 清和关节液内（分IgM/GE型）。 检测：乳胶凝集测IgM型；速率法不分型 参考值：乳胶法1:10;速率法30U/L 意义:类风湿病,自身免疫病的辅助,类风湿因子在病人和健康人中检出情况,70%90%的RA患者RF呈阳性。但RF并不是RA独有的特异性抗体。,循环免疫复合物（CIC）测定 【原理】利用浊度增强剂或促凝剂-聚乙二醇（PEG）、葡聚糖等，在一定浓度时可选择性析出一定分子大小的抗原抗体复合物而形成浊度，其浊度的程度与抗原抗体复合物的量呈正比。由

17、于浊度的形成可导致反射、散射以及吸收入射光线，使原入射光衰减。此时，通过测定透射光衰减（以A值表示）检测免疫复合物的量。,循环免疫复合物检测流程(方法),1、 测定管+血清 对照管+血清 （4.166%PEG2.0ml）（硼酸缓冲液2.0ml）,2、混匀后4，60min,3、室温预温30min，A450nm比浊。,【参考范围】 测定波长为450nm时，数值为0.0150.05 【临床意义】 CIC的量增高，反映血清中存在免疫复合 物量增多。已知CIC增多与许多疾病相关， 包括：自身免疫性疾病、传染性疾病、肿 瘤及某些超敏反应性疾病等-,移植免疫的实验室检测,移植(transplantation

18、):是应用自体或异体的正常细胞、组织或器官置换病变的或功能缺损的细胞、组织和器官，以维持和重建机体生理功能的新型治疗方法。 移植排斥反应的防与治是关键 (组织配型、供体选择、免疫抑制剂 用和术后的免疫学监测),免疫排斥（immune rejection）：指器官、组织或细胞移植后，受体发生免疫应答，引起针对移植物的免疫损伤而使其丧失功能的一个过程。 表现：hyperacute rejection acute rejection chronic rejection,移植的组织配型(matching):,（一）选择组织相匹配的供者 1、一般情况:供物状态、全身情况、年龄 2、ABO血型相容（拟输血

19、） 3、HLA相容性（受、供者HLA等位基因相合的数目越多越好） （二）HLA相容程度测试 1、血清学(serological)分型 2、细胞学(cytological)分型 3、基因(gene)分型,1、血清学分型(serological typing)： 原理利用各种已知的HLA标准血清型， 与检测细胞反应，添加补体后观察细 胞反应（CDC） micro-complement dependent cytotoxiciti 技术要点（key point）分离淋巴细胞, 与标准抗血清反应，添加补体， 死细胞染色,记数、判断。 评价较理想，找标准抗血清（antisera of defined s

20、pecificity）难。,2、细胞学(cytological)分型采用淋巴 细胞混合培养（MLC）,(two way)/one way) 双向MLC 受、供体淋巴细胞混合体外培 养，彼此作用，观察细胞形态与细胞增 殖，互不影响示受、供体间HLA型相匹配 否则 技术要点(key point) 分离计数彼此淋 巴细胞，共孵育，染色计数转化细胞 评价(evalu) 用于移植前的交叉配合试验，但不 能判定HLA-D型,3、基因(gene)分型 限制性片段长度多态性（RFLP）分型 聚合酶链反应-序列特异性寡核苷酸探针 （PCR-SSOP） PCR-序列特异性引物（PCR-SSP）分型 PCR-单链构

21、象多态性（PCR-SSCP）分型 PCR指纹图谱技术 其他,（三）交叉配型(crossmatching)试验,目的：检测受者体内是否存在抗供者的特异性抗体,避免移植物的超急排斥(HVGR) 技术要点：供者淋巴细胞+受者血清 +补体 方法：1、微量细胞毒试验，2、流式 细胞术.,排斥反应的免疫学监测(immunological monitoring of rejection),1、细胞免疫学监测T淋巴细胞数量、功能以及亚群比例等，杀细胞活性（CTL和NK）。 2、细胞因子监测：Th1型/ Th2型 Th1型包括IL-2、TNF-a、IFN-r等 Th2型包括IL-4、IL-10等 3、抗HLA抗

22、体检测 4、蛋白、酶类、补体检测,抗HLA抗体检测： 原理与异体排斥反应有关的体液、细胞免疫效应主要是针对HLA抗原的 因为测得血清中PRA的水平更有助于移植时 受者对移植物的敏感程度包括群体反应性抗 体(PRA) 意义：移植术前后的PRA高低与术后急性排斥反应明显有关。,Why monitoring the concentration of druges?,药物应用的临床特征: 病人不同时期状况变化 个体差异 身高 体重 年龄 个人吸收状况 怀孕 肝，肾等代谢功能 其他疾病,目的与手段,通过测定血液中药物浓度,并利用药代动力学的原理和公式使给药方案即时个体化,以提高药效效,避免或减少毒性反应

23、。 检测:fluorescence polarization immunoassay (FPIA) ;microgranular enzyme-linked immunoassay,(MEIA)和Enzyme-linked immunoassay(ELISA) 检测的药物：环孢霉素（CsA);他克莫司(FK506);霉酚酸（MPA）,其他免疫检测,感染免疫相关检测 超敏反应性检测 皮试,超敏反应性检测 1、血清IgE测定 测定方法：ELISA 正常参考值：总IgE100IU/ml 意义：超敏反应性疾病的辅助指标 自身免疫病、肿瘤或炎症 预测儿童是否易发超敏反应性 疾病。,2、人嗜碱性粒细胞脱颗

24、粒试验 【原理】嗜碱性粒细胞内颗粒能被碱性染料 着色，当加入过敏原，其与结合在细胞表面 的IgE形成桥连反应，导致该细胞脱颗粒，结 果该细胞不被染料着色，记数着色细胞并以 其减少程度判断结果。 目前已渐被淘汰。,3、皮试：,1、型变态反应: 皮试后15min产生结果（青霉素、多种 变应原如花粉、尘螨等） 2、（Arthus）反应: 为512h后产生（异种血清接种含 Ag，多次刺激产生Ab） （再次注射，出现局部过敏反应） 3、型变态反应: 皮试后24 48h后产生（结核菌素试 验、等）。,感染性疾病的免疫学检测,包括(including)： 1、病毒(viral)感染（病毒性肝炎, ToRCH

25、感染,HIV感染,其他病毒感染等） 2、细菌(bacterial)感染（伤寒、副伤 寒,化脓性链球菌感染,结核,军团病） 3、真菌(fungi)与其他微生物感染感染 4、寄生虫(parasitic)感染（原虫,蠕 虫）,病毒性感染(viral infection),病毒性肝炎（引起的病原体） 1、肝炎病毒(hepatitis virus) 2、疱疹病毒(herps virus) 3、虫媒病毒(arthropod-borne virus) 4、出血热病毒(hemorrhagic fever) 5、腺病毒/柯萨基病毒等(adenovirus/coxsakivirus),病毒性肝炎：HAV HBV

26、HCV HDV HEV 其他（HGV/TTV） （SEN/TLMV）,1、免疫学检测指标HAV-Ag 抗HAV总抗体 抗HAV-IgM 2、HAV的潜伏期(30天2周) 3、HAV的传播途径(粪口),HAV血清标志物出现的规律,乙肝主要血清标志物联合检测的临床义意,丙型肝炎病毒感染血清标志物出现过程,HCV的传播途径 HCV容易变异. HCV的实验室诊断测病毒RNA. 测病毒相应抗体.,HDV为缺陷病毒 与HBV同时感染（共同/联合）的特征 HDV的传播途径 HDV的免疫学检测指标 （抗-HDV总抗体） （抗-HDV IgM型抗体）,HEV的特性 HEV的传播途径 HEV不同于HAV HEV感染的实验室诊断 （抗-HEV IgM） （抗-HEV IgG）,ToRCH感染:,“To”代表弓形体(toxplasma,TOX)，