流式细胞术样本制备.ppt

1、流式细胞术样本制备,流式细胞术样本制备 BD质控品,流式细胞术样本来源,含有生物学颗粒的悬液：单细胞悬液、微生物颗粒悬液、人工微球悬液 标本类型： 细胞悬液： 外周血（溶血）、PBMC、骨髓 灌洗液、体腔积液 培养细胞、细胞系 实体组织： 病理组织：新鲜样本/石蜡包埋样本 针吸组织：新鲜样本 鞘液、洗液、PMA等：洁净，无颗粒杂质,流式细胞术样本来源,血液成分的分析：如白细胞、红细胞、血小板等 分离血液中特定细胞成分，进行分析：操作复杂，分离、离心步骤导致细胞特定群体丢失，并可能引入某些误差 直接使用全血：最接近生理状况，操作简便，样本用血量小 实体组织：MediMachine,荧光标记抗体的

2、染色：使用特异的单克隆抗体 单色分析：直接标记、间接标记 双色分析：SimulSET IMK、HLA-B27 多色分析：TriTEST、MultiTEST、ProCOUNT 溶血：FACS Lysing Solution 细胞打孔：FACS Perm2 固定：1%多聚甲醛,细胞染色,染色要求： 特异识别某一群细胞，有效区分不同细胞亚群 非特异反应水平低 抗体校价高，用量适用于常规标本 使用特异的单克隆抗体 最好使用荧光直接标记的抗体 采用适当的阴性对照物 抗体最适滴度,淋巴细胞表面抗原分析,样本来源 新鲜抗凝全血 PBMC 单克隆荧光抗体染色 溶血 洗细胞 固定 上机检测,淋巴细胞细胞内抗原分

3、析,样本来源 新鲜抗凝全血 PBMC 细胞表面抗体染色 溶血、固定 细胞打孔 细胞内抗体染色 上机检测,红细胞、血小板表面抗原分析,样本来源 新鲜抗凝全血 PRP 单克隆荧光抗体染色 固定 上机检测,细胞周期分析,准确分析细胞核中DNA含量 单细胞悬液： 细胞数0.5-1106 碎片和粘连细胞少 DNA染色的线性度：CEN 单细胞分析：CTN进行DDM检查 CV：2m微球,细胞周期分析,DNA Cycle Plus Buffer Solution：细胞保存液 Solution A：破膜剂 Solution B：RNase Solution C：PI 单细胞悬液1106cells/ml，固定 消

4、化RNA DNA染色,对照样本,对照样本应与实验样本平行操作 阴性对照：评估非特异反应水平，界定阴性范围 阳性对照：在诊断抗原表达确失性疾病时，需确定抗原表达正常时的抗原表达强度和百分含量 补偿调整管,质控品,体外诊断试验的必要保证 稳定样品，提供靶值和质控范围，供实验室监测流式细胞仪分析实验全过程，确保结果可靠 质控品应与实验样本同时处理，采用相同步骤，相同试剂，相同的画门分析方法 双水平控制：Low/High 三水平控制：Low/Median/High,BD Stem Cell Control,流式细胞术造血干细胞免疫表型分析与计数的全血质控物 抗体染色 溶血 流式细胞仪设置及运行状况 分

5、析数据，计数干细胞 Cat. No 340991 12.0ml，CD34Low 12.0ml，CD34High,BD Multi-Check Control,流式细胞术淋巴细胞免疫表型分析与计数的全血质控物 抗体染色 溶血 固定 流式细胞仪设置及运行状况 分析数据，计算淋巴细胞各亚群含量,BD Multi-Check Control,淋巴细胞免疫表型： CD3+ CD3+CD4+ CD3+CD8+ CD19+ CD3-CD16+56+ CD3+HLA-DR+,靶值及质控范围： % Total Lymph Absolute Number/L,BD Multi-Check Control,BD M

6、ulti-Check Control Cat. No 340911 12.5ml Cat. No 340912 22.5ml Cat. No 340913 52.5ml,BD Multi-Check CD4 Low Control Cat. No 340914 12.5ml Cat. No 340915 22.5ml Cat. No 340916 52.5ml,BD Retic-COUNT Control,Cat. No 340999 11.5ml，Low 11.5ml，Med 11.5ml，High,Cat. No 341000 11.5ml，Low 11.5ml，Med 11.5ml，High,流式细胞术网织红细胞分析与计数的全血质控物 荧光染色 流式细胞仪设置及运行状况 分析数据，计数网织红细胞,BD LeucoCOUNT Control,血制品的残留白细胞计数的质控物 荧光染色 流式细胞仪设置及运行状况 分析数据，计数残留白细胞 TruCOUNT