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文档简介

1、DNL细胞制备及抗瘤机制,徐 骎 口腔临床免疫教研室 口腔肿瘤生物实验室,第一部分 DNL细胞的制备,一、概况,口腔颌面部肿瘤综合序列治疗 免疫治疗是重要手段之一 机体细胞免疫主要执行抗肿瘤免疫效应 抗肿瘤的免疫细胞NK，LAK，TIL，DNL等,NKnature killer cells 自然杀伤细胞 LAKlymphokine activated killer cells 淋巴因子激活的杀伤细胞 TILtumor infiltrating lymphocyte 肿瘤浸润性淋巴细胞 DNLdraining lymph node lymphocyte 肿瘤引流区淋巴结细胞,TIL与DNL 相同

2、点 1）邻近肿瘤 2）强大的抗肿瘤效应，比LAK细胞高 50-100倍 3）良好的基因治疗载体 不同点 1）来源不同 2）TIL细胞数量少，易污染 DNL细胞数量多,二、实验目的,1、掌握从淋巴结中分离、培养、扩增 DNL的基本方法 2、明确DNL与TIL的异同点,三、实验材料,1、材料：口腔鳞癌颈清淋巴结 2、器材：显微镜、离心机、超净台、培养皿、 离心管、吸管、培养瓶、尼龙网（200目） 3、试剂：培养液（RPMI1640）、Hanks液（含 1000u/ml青、链霉素，1000u/ml两性霉素）,四、实验内容,1、DNL的分离 淋巴结,酶消化法 0.5%胶原酶、0.02%DNA酶、 0.

3、05%透明质酸酶 机械法,密度梯度离心,DNL,2、DNL的培养和扩增 1）培养液RPMI1640+rIL-2 2000u/ml 2）培养条件DNL 6106/ml，37， 5%CO2 3）3-5天换液，每次换液加入rIL-2 2000 u/ml，细胞浓度保持在6106/ml,四、实验内容,细胞计数,血细胞计数器：手工计数细胞 Coulter计数仪：自动计数,10,9,10,12,（10+9+10+12）/4*104=10.25*104/ml(稀释倍数),第二部分 DNL抗瘤机制,以往的研究表明： DNL分泌穿孔素 肿瘤细胞通透性增加 最新研究证实： CTL分泌穿孔素和颗粒酶A（granzyme A） granzyme A激活下游信号传导通路 肿瘤细胞凋亡,DNL体外杀伤口腔鳞癌细胞的作用观察 MTT法 原理： 1、MTT二甲基噻唑二苯基四唑溴盐 2、活细胞线粒体脱氢酶 MTT 结晶形成少，反映活细胞少，杀伤肿瘤细胞作用强,不可溶性紫色甲臜,DMSO溶解，检测OD值

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