蔡小军《药物分析》各论第五章抗菌药物与抗生素类的分析

1、1,1,第五章 抗菌药物与抗生素类药物的分析,药物分析学 各论,2020/9/8,2,2020/9/8,2,本章要求,喹诺酮类抗菌药物（自学） -内酰胺类抗生素的结构性质及鉴别 氨基糖苷类抗生素的主要鉴别方法 四环素类抗生素的有关物质检查,2020/9/8,3,什么是抗生素？,抗生素是细菌、放线菌和真菌等微生物的代谢产物，对各种病原微生物有强大的抑制或杀灭作用,2020/9/8,4,抗生素的来源 ？,2、化学合成或半合成,1、生物合成,（发酵）,2020/9/8,5,抗生素质量有什么特点？,*分子结构多不稳定,*发酵过程不易控制,化学纯度低 活性组分变异,稳定性差,*发酵过程易受污染,*降解后

2、 疗效 失效 毒副作用,*同系物、异构体、降解物,2020/9/8,6,分类（按结构与性质）： 内酰胺类、氨基糖苷类、 四环素类、大环内酯类、 氯霉素类、多肽类、抗肿瘤类 林可霉素类、其他抗生素类,2020/9/8,7,青霉素钠 青霉素V钾 氨苄西林 头孢羟氨苄,第二节 内酰胺类,青霉素类 头孢菌素类,-内酰胺环,分子结构中含有 的抗生素,母核结构： 氢化噻唑环或氢化噻嗪环与-内酰胺并合的杂环,2020/9/8,8,不稳定 酸性、成盐 紫外吸收 手性C、光学活性,主要性质：,2020/9/8,9,头孢菌素类,氢化 噻唑环,氢化 噻嗪环,青霉素类,-内酰胺 不稳定,侧链:游离羧基酰胺 游离羧基,

3、2020/9/8,10,-内酰胺环,不稳定 性因素,水溶液 不稳定、水解、失活,干燥纯净 稳定,四元环张力大,酰胺键易水解,抗菌活性,（头孢噻吩钠水溶液2524h失活8%）,（青霉素钠水溶液3024h失活56%）,2020/9/8,11,2020/9/8,12,（某些金属离子） （温度）,某些氧化剂,2020/9/8,13,青霉素类,酰胺侧链,6-氨基青霉烷酸 （6APA）,*,*,*,手性C,母核无UV吸收,母核结构比较,2020/9/8,14,7-氨基头孢菌烷酸 （7ACA）,头孢菌素类,酰胺侧链,*,*,手性C,共轭、母核有UV吸收,2020/9/8,15,1. 羟肟酸铁反应,-内酰胺环

4、,NaOH,红色,一、鉴别,2020/9/8,16,（红、棕、褐）,2020/9/8,17,2. Na+、K+的火焰反应,2020/9/8,18,3. UV法,青霉素钾 max=268、274nm A268/A274=1.201.25,母核、苯环取代基,2020/9/8,19,4. IR,各国药典对收载的该类抗生素均采用IR鉴别,内酰胺环上的羰基伸缩振 动增强而向高波数方向位移,2020/9/8,20,-内酰胺环,仲酰胺,2020/9/8,21,二、检查,ChP规定，青霉素钠中检查酸碱度、溶液澄清度与颜色、水分、细菌内毒素、无菌、吸光度、青霉素聚合物,安全性检查,2020/9/8,22,ChP

5、中抗生素类药品检查项下增加“安全性检查”,异常毒性 热原 细菌内毒素 降压物质 无菌,2020/9/8,23,青霉素聚合物（高分子杂质）,药物中分子量（1000-5000）大于药物本身的杂质 速发型过敏反应的过敏原 通过控制“信号杂质”来控制高分子杂质的总量,青霉噻唑多肽、青霉素聚合物,2020/9/8,24,青霉素聚合物（高分子杂质）,固定相：水溶性凝胶色谱柱 （葡萄糖凝胶G-10） 流动相：缓冲盐 自身对照外标法定量（ChP）,( 分子筛原理),HPLC-凝胶色谱法（分子排阻色谱）：,2020/9/8,25,萄聚糖凝胶 立体网状结构图,原理“分子筛”,2020/9/8,26,三、含量测定,

6、微生物检定法 理化方法,2020/9/8,27,生物学方法（微生物检定法）,测定抗生素抑菌或杀菌的能力,(抗生素的活性以生物效价表示),2020/9/8,28,理化方法,以理化方法测定主药含量 （纯度高、结构明确）,2020/9/8,29,RP-HPLC法,色谱条件 离子抑制色谱 离子对色谱,定量,ChP：原料、制剂、生物样品,2020/9/8,30,阿莫西林 原料药 含量测定 色谱条件 固定相：十八烷基硅烷键合硅胶C18 流动相：(ChP) 乙腈磷酸二氢钾水溶液 （USP）以甲醇戊烷磺酸钠水溶液-三乙胺 检测波长：254nm,2020/9/8,31,第三节 氨基糖苷类抗生素,链霉素 双氢链霉

7、素 新霉素 卡那霉素 庆大霉素 巴龙霉素,2020/9/8,32,链霉胍 + 链霉糖 + N-甲基-L-葡萄糖胺,2020/9/8,33,坂口反应,麦芽酚反应,UV 230nm,3个碱性中心,链霉胍,链霉糖,N-甲基葡萄糖胺,2020/9/8,34,绛红糖胺 + 脱氧链霉胺 + 加洛糖胺,庆大霉素（庆大霉素C复合物）,2020/9/8,35,5个碱性中心-弱碱,葡萄糖胺衍生物,无共轭体系、无紫外吸收,2020/9/8,36,1. 茚三酮反应,氨基糖苷的共同反应,一、鉴别,2020/9/8,37,2. N-甲基葡萄糖胺反应,氨基糖苷的共同反应,葡萄糖胺衍生物,2020/9/8,38,3. 麦芽酚

8、反应 链霉素中链霉糖的特征反应,2020/9/8,39,4. 坂口反应 链霉素中链霉胍的反应,碱性,520nm,2020/9/8,40,5. UV,庆大霉素无UV吸收,2020/9/8,41,有关物质检查 C组分的检查,硫酸庆大霉素：,二、检查,庆大霉素C1 、C2 、C1a、C2a,*对微生物的活性无明显差异,*毒副作用和耐药性不同,2020/9/8,42,C组分检查方法：HPLC,C1 25 50% C1a 15 40% C2a + C2 20 50%,2020/9/8,43,三、含量测定 微生物检定法 HPLC,蒸发光散射法,本类抗生素如硫酸庆大霉素无紫外吸收，不能直接采用紫外或荧光检测

9、器 采用柱前或柱后衍生化法，紫外检测器 蒸发光散射或电化学检测器,2020/9/8,44,第四节 四环素类抗生素,A,B,C,D,基本母核：氢化并四苯或氢化萘并萘,2020/9/8,45,2020/9/8,46,一、性质,两性 二甲氨基碱性 烯醇羟基、酚羟基酸性,溶解性 pH4.57.2 难溶于水 三氯化铁反应 红棕色配位化合物,紫外吸收 苯环 旋光性 C4手性 稳定性 对氧化剂、酸、碱不稳定 （ 异构化、降解）,2020/9/8,47,差向四环素,异构化,2020/9/8,48,脱水四环素,降解,H+,差向脱水四环素,2020/9/8,49,（荧光）,降解,2020/9/8,50,二、 有关物质 控制异构杂质和降解杂质 检查方法 HPLC 主成分自身对照法,差向四环素ETC、脱水四环素ATC、差向脱水四环素EATC等,2020/9/8,51,三、含量测定,HPLC法（外标法）,盐酸四环素 色谱条件 固定相：十八烷基硅烷键合硅胶C18 流动相： 乙腈醋酸铵水溶液 检测波长：280nm,2020/9/8,52,知识点回顾,1. 掌握内酰胺类抗生素的结构性质与主要鉴别方法，高分子杂