固相合成原理

1、,多肽固相合成基本原理,1,一、多肽合成简史,20世纪早期Emil Fischer 引入肽与多肽的概念。 19201960液相合成少数肽，但是纯度低、副产物多。 1963Bruce Merrifield 建立固相多肽合成方法，solid-phase peptide synthesis (SPPS)。洛克菲洛大学电梯。1984，诺贝尔化学奖。 近40多年来，合成技术迅猛发展，合成超过100个长的肽已不是梦想。,2,二、多肽固相合成基本原理,按氨基酸顺序，定向形成肽键，得到目标分子； C末端的氨基酸固定在树脂上，反应， 过滤洗涤，切割； 主要介绍Fmoc策略（氨基保护基团为Fmoc）,3,脱保护,

2、Fmoc：9芴甲氧羰基（Fluorenylmethoxycarbonyl） MW：223.254 PiP：哌啶、六氢吡啶 （Piperidine） MW：85.15；密度：0.86g/ml； 熔点：7；沸点：106,4,固相载体,Wang 树脂 2-Cl-Trt-氯树脂（Cys、His、Pro） Rink Amide MBHA 树脂,5,6,Fmoc的脱除,Fmoc基团的芴环基的吸电子作用使9-H具有酸性，易被较弱碱除去，反应条件很温和 ；哌啶进攻9-H,消除形成二苯芴烯，很容易被二级环胺进攻形成稳定的加成物：FmocPiP（取代度测定的就是其紫外吸收值）,7,溶剂,DCM：二氯甲烷 （Dic

3、hloromethane） MW：84.94；密度：1.33g/ml；熔点：96.7；沸点：39.8 作用：溶胀树脂、洗涤树脂 MeOH：甲醇（Methanol） MW：32.04；密度：0.79g/ml； 熔点：93.9；沸点：64.8 作用：收缩树脂、洗涤树脂 DMF ：N,N-二甲基甲酰胺（N，N-dimethyformamideL） MW：73.1；密度：0.94g/ml； 熔点：61；沸点：152.8 作用：良好溶剂、溶胀树脂、洗涤树脂,8,缩合试剂,HBTU NMM HATU 苯并三氮唑-N，N， N-甲基吗啡啉 2-(7-偶氮苯并三氮唑) N，N，-四甲基脲 -N，N，N，N-四

4、甲基 六氟磷酸酯 脲六氟磷酸酯,MW：379.3 MW：101.2 MW：380.2 密度：0.92,9,DIC HOBt N,N-二异丙基 羟基苯骈三氮唑 碳二亚胺,MW：126.2 MW：135.1 密度：0.8,10,缩合原理,11,HATU/HBTU法,12,DIC/DCC法,13,缩合终点的判断,茚三酮检测（定性） 四氯苯醌检测（定性） 取代度测定（定量）,14,提高缩合效率的方法,增加氨基酸投量 延长反应时间 提高反应温度 更换反应液 换用活性更高的缩合试剂 更换反应溶剂（魔鬼溶剂） 超声、微波,15,副反应,消旋（His、Cys） 重排（AspGly） 内成环（Pro） 封端（HBTU/HATU与树脂上的氨基）,16,切割,三氟乙酸（TFA ） 苯酚（phenol）、水（H2O）、乙二硫醇 （EDT）、三异丙基硅烷（TIS）、茴香硫醚（thioanisole） Cocktail 法,17,“如果你敢于在自己