《黑木耳培养加工》PPT课件.ppt

1、食用菌菌种制作技术,食用菌生产技术课程组,第一节 菌种生产类型及生产流程第二节 一级菌种制作技术 第三节 二、三级菌种制作技术,食用菌菌种制作技术,第一节 菌种生产类型及生产流程,一、菌种概念 二、菌种生产类型 三、菌种生产流程 四、菌种生产场所及设备,一、菌种概念,广义：是指以保藏、试验、栽培和其它用途为目的，具有繁衍能力，遗传特性相对稳定的孢子、组织或菌丝体及其营养性或非营养性的载体。 菌种是一种重要的生物资源，椐其使用的目的不同，可以分为保藏用菌种、试验用菌种和生产用菌种。 从食用菌栽培的角度而言，所谓的菌种就是指生产用菌种。,狭义：是指以适宜的营养培养基为载体进行纯培养的菌丝体，也就是

2、培养基质和菌丝体的联合体。或者说是指人工培养，并供进一步繁殖的食用菌的纯菌丝体。 菌种是食用菌生产的首要条件，菌种性状的优劣直接影响到生产的成败。 制种工作的成败 ，既影响到菌种场的经济效益与信誉，又间接关系到菇农的利益。 制作菌种并非易事，需要有丰富的技术经验及企业管理知识。,二、菌种生产类型,食用菌菌种是通过三级逐步扩大培养的方式来生产的，在生产上通常把菌种分为一级菌种、二级菌种和三级菌种。,菌种,一级菌种,二级菌种,三级菌种,从孢子分离培养或组织分离培养获得的纯菌丝体。,由一级菌种扩大繁殖成的菌丝体。,由二级菌种扩大繁殖成的菌丝体，是直接用于栽培的菌种。,三者之间的关系,菌种生产流程,种

3、菇,一级菌种,二级菌种,三级菌种,栽培,菌种为何要经过三级逐步扩大培养,？,三、菌种生产工艺流程,菌种制作流程,一级菌种（配制培养基灭菌接种培养） 二级菌种（配制培养基灭菌接种培养 ） 三级菌种（配制培养基灭菌接种培养） 栽 培,菌种制作的四个基本环节,配制培养基 灭菌 接种 培养,四、菌种生产场所及设备（现场）,（一）菌种场设计基本要求 1、确定制种级别及规模 良种选育对人员素质、设备条件、种质资源的积累、工作的连续性等都有很高的要求。在菌种生产中，由于前一级菌种是后一级菌种的种源，前一级菌种出现质量问题比后一级菌种出现质量问题危害更大。因此对生产和供应较前级菌种厂家的条件和责任的要求更高。

4、 目前，我国农业部已经颁布包含这方面内容的菌种管理行政法规。今后，各菌种厂在制定规划时，应根据本身的技术力量及设备条件，确定适宜的菌种生产级别和规模。,2、制种场地的选择 水、电、路三通，远离禽舍、畜栏、厕所等污染源。 3、菌种场设置要求 菌种场应设原辅料仓库，原料处理场地，洗涤室，配料室，灭菌室，冷却室，接种室，培养室,质检室和菌种储藏室。,4、菌种场的平面布局,应根据微生物易于在空气中传播及其传播的特点规划厂房，布设流水线，以使制种的工艺流程既便于流水作业，节约劳力和投资，又有利于对微生物传播的控制，提高菌种生产的成品率。下面分别介绍简易菌种厂和规范化菌种厂的平面布局。,（二）制种基本设备

5、及常用物品,配制培养基设备：切片机、粉碎机、过筛机、 拌料机、装瓶或装袋机 灭菌设备：高压灭菌锅（手提式、立式、卧 式）、常压灭菌灶 接种设备：净化工作台、接种箱、接种室 培养设备：培养箱（电热恒温、恒温恒湿）、 培养室、培养架、空调 菌种保藏设备：电冰箱、贮藏室（二、三级菌种）,1、制种设备,2、基本器具 玻璃器皿 衡量器具 基础设备 3、基本药品,注意事项！,配置必要的生产设备。 生产能力与生产设备配套 选用质量合格、价格适宜的玻璃器皿、塑料袋、消毒药品等低值易耗品。,复习思考题,1什么叫培养基？培养基可分为哪几种类型？ 2什么叫菌种？菌种可分为哪几种类型？ 3菌种为什么要经过三级逐步扩大

6、培养？ 4简述菌种生产的基本过程？,第二节 一级菌种制作技术,一、一级菌种的制作流程 二、一级菌种培养基的配制 三、一级菌种培养基的灭菌 四、菌种分离及纯化 五、出菇试验（鉴定） 六、转管及培养 七、菌种保藏,一、一级菌种制作流程,1概念 一级菌种是第一次用孢子分离法、组织分离法或基内菌丝分离法获得的纯菌丝体及其经过转管扩大后的菌丝体。 2用途及要求 一级菌种是菌种生产的基础，一级菌种质量的优劣，直接关系到二级菌种和三级菌种的质量，对食用菌生产产生根本的影响。 3、制种过程：主要包括下列几个程序： 培养基的配制培养基的灭菌菌种的分离纯化（提纯）转管扩大培养一级菌种,二、一级菌种培养基的配制,1

7、、培养基的概念及分类 根据食用菌对营养、水分、酸碱度的要求，人为配制成 的供食用菌生长发育的基质。,概念,2、一级菌种培养基常用配方,PDA培养基 PSA培养基 马铃薯（去皮） 200g 马铃薯（去皮） 200g 葡萄糖 20g 蔗糖 20g 琼脂 1823g 琼脂 1823g 水 1000ml 水 1000ml,PDA培养基和PSA培养基是一级菌种最常用的培养基，适用于大部分食用菌菌种的分离、培养和保藏，既是一种广泛培养基，也是一种基础培养基。 注：一级菌种培养基配方众多，可参考课本或其他书籍。,粉状,条状,煮沸20min，取定量滤液,制马铃薯滤液,滤液沸时加入，融后加余料,融化琼脂,调节p

8、H值,勿污管口，控制装量,分装试管,1%NaOH或HCl,3.一级菌种培养基的配制过程,三、一级菌种培养基的灭菌,（一）灭菌与消毒的概念 灭菌：是应用物理和化学方法杀灭物品表面和内部所有的微生物，是一种彻底的灭菌方法。 消毒：是应用物理和化学方法使欲消毒的物品表面和孔隙内绝大部分微生物致死，是一种不彻底的灭菌方法。,（二）灭菌与消毒的方法,1、常用的灭菌方法,2、常用的消毒方法,（三）一级菌种培养基的灭菌,1灭菌设备 手提式高压灭菌锅 2灭菌要求 1.1kg/cm2，121 保持2030min,手提式高压灭菌锅,3操作过程 加水装锅盖盖加热当压力升为0.5kg/cm2时排放冷空气正式升压保压（

9、1.1kg/cm2，121，保持20-30min）停止加热自然降压至零排放余汽开盖取出灭菌物品趁热摆斜面检验灭菌效果（32空白培养48h）。,四、菌种分离及纯化,（一）菌种分离的概念 菌种分离：用无菌操作的方法将所需要的食用菌从混杂的微生物群体中单独分离出来的过程。 通过菌种分离得到的纯菌丝体即为一级菌种。 （二）菌种分离的关键无菌操作 无菌操作：任何一个操作过程都要注意避免把其它任何无关的菌体带入到培养基中。 注意二点：1严格树立无菌观念； 2严格遵循无菌操作规程。,无菌操作要点,必备,（三）菌种分离的设备 1接种箱：操作规程 2净化工作台：操作规程 3接种室：操作规程,接种工具,净化工作台

10、,（四）菌种分离的方法（常用三种）,组织分离法,将食用菌的部分组织移接到斜面培养基上获得纯培养的方法,简单易行 保持原菌种性状 适用于大型肉质子实体 重复多易退化,种菇选择种菇消毒切取组织块移接组织块至斜面中央培养,特点,概念,操作过程（以伞菌为例）,孢子分离法,概念,特点,操作过程,利用子实体产生的成熟有性孢子分离培养获得纯菌种的方法,属于有性繁殖，后代易发生变异，可用此法培育新品种 分离过程较复杂，适用于胶质菌类和小型伞菌,孢子的采集孢子的分离孢子的萌发,孢子分离法,多个孢子萌发后自由交配获得纯菌种的方法,多孢分离,单孢分离,单个孢子萌发获得纯菌种的方法,整菇插种法钩悬法孢子印法,平板稀释

11、法连续稀释法毛细血管法,基内菌丝分离法,概念,特点,适用范围,从生长子实体的培养基中分离菌丝获得纯培养的方法,易感染杂菌,子实体已腐烂，但又必须保留该种菌种 子实体小而薄，用组织分离法和孢子分离法较困难 混合菌丝培养类型，如银耳，多采用此法,操作示范,选种菇,外观典型、大小适中、无病虫害、八成熟、第12茬的子实体,取组 织块,取组织块：纵剖（撕）菇体，在柄盖交界处取绿豆粒大的组织,种菇 消毒,用75%的酒精棉球擦拭子实体,接组 织块,培养,移接至斜面中部,25培养箱,（五）菌种的纯化,纯化,概念,措施,是指对分离获得的菌种进行再提纯，成为生产所需要的菌种的方法,菌丝的再提纯,污染物的排除,正常

12、的菌种在固体培养基上，菌丝逐渐向四周呈辐射状生长，边缘整齐一致，菌丝浓密健壮！,五、出菇试验（鉴定）,是菌种投入生产前必须做的结实性鉴定试验,概念,进一步确定菌种，以避免菌种选育不当而造成不可估量的损失,目的,形态特征、生理特性、栽培性状、经济效益等,内容,六、一级菌种转管及培养,转管 过程,取直径3-5mm的母种块移入新斜面中部,转管 目的,扩大繁殖，增加母种数量，以满足生产需要,注意,种块勿太大 原老种块勿再接入 传代次数勿太多,母种 培养,设备,注意,条件,经常检查，及时剔除污染管 控制菌龄（即将长满斜面） 外观检查：菌丝白、整齐、粗壮、有弹性、萌发快则质量好，否则质量差,电热恒温培养箱

13、,25左右、干净、干燥、黑暗、通风,七、一级菌种的保藏,（一）保藏目的及原理,使菌种不死亡不生长不污染，不降低或不丧失其优良性，以尽量延长使用时间。,保藏目的,保藏原理,创造不利于菌种生长的一切条件，使其代谢处于休眠状态。,（二）菌种保藏方法（常用）,特点,简便保藏时间短易污染及退化不适于草菇等菌类,1.斜面低温法斜面菌种置46冰箱中（36个月）,2.矿油保藏法3.自然基质保藏法,自学！,复习思考题,1什么是一级菌种？简述一级菌种制作的工艺流程。 2一级菌种培养基常用的配方是什么？简述其制作过程 3名词解释：消毒、灭菌、提纯。 4如何对一级菌种培养基进行灭菌？如何检验其灭菌效果？ 5什么是菌种

14、分离？菌种分离有哪几种方法？ 6简述组织分离法的操作过程。 7为什么要进行出菇试验？ 8什么叫转管？为什么要转管？ 9什么是无菌操作？怎样才能做到无菌操作？,第三节 二、三级菌种制作技术,一.二、三级菌种培养基的配制 二.二、三级菌种培养基的灭菌 三.二、三级菌种的接种 四.二、三级菌种的培养 五.二、三级菌种的质量鉴定,二、三级菌种制作流程,配制培养基,灭 菌,二级菌种,培 养,接 种,培 养,接 种,灭 菌,配制培养基,三级菌种,一级菌种,二级菌种,(二、三级菌种制作过程大同小异),一.二、三级菌种培养基的配制,（一）配制原则 1选择适宜的营养物质。 2营养物质间配制的比例要恰当。 3选择

15、经济实用、来源广泛的原料。 4适宜的pH值和含水量。,（二）培养基常用的配方,木屑培养基 阔叶树木屑 78% 麸皮(或米糠) 20% 蔗 糖 1% 石膏粉 1% 料水比 1:1.11.3,棉籽壳培养基 棉籽壳 78% 麸皮(或米糠) 20% 蔗 糖 1% 石膏粉 1% 料水比 1:1.11.3,（三）培养基配制步骤,称料,拌料,调节pH值,分装培养料,清洁（洗或擦）瓶、袋外壁,封口,1.不溶性主、辅料混拌均匀,2.可溶性辅料溶于水后拌入主辅料,3.注意检查含水量（手测法等）,比实际要求的pH值调高1左右,容器：菌种瓶、菌种袋,要求：上紧下松，外紧内松，中间一个洞,二.二、三级菌种培养基的灭菌,

16、1灭菌方法及要求 高压蒸汽灭菌：压力1.5kg/cm2，温度126-128，时间1-2h（谷粒和经过堆制发酵的粪草培养基应达到2-2.5h）。 常压蒸汽灭菌：100，保持10-12h（攻头，控中，保尾）,卧式高压蒸汽灭菌锅,2灭菌效果检验 随机取几瓶（袋）置于25-30温度下空白培养4-6天，会出现以下情况： 全部感杂 少数感杂 全部没有杂菌 3、高压蒸汽灭菌锅的使用方法 示范操作！,分析原因,？,三.二、三级菌种的接种,概念：菌种移至新培养基上的过程关键：无菌操作,接种,接种环境消毒灭菌 酒精棉球消毒双手 操作器具消毒灭菌 开启的管口、瓶口靠近灯焰 拔出的棉塞勿触及任何地方 动作快、准、稳,

17、无菌 操作 要点,注意：1、严格挑选待接的菌种质量； 2、勿接入表面老菌丝及老种块。,四.二、三级菌种的培养,菌种的培养实际就是对菌丝体的培养,培养条件,场所清洁,空气清新,光线暗,温度约25,空气湿度60%70%,培养条件,勿堆放过挤,及时剔除污染瓶（袋）,栽培种的菌袋缺氧时可刺孔增氧,控制菌龄（菌丝长满7-01天后使用）,五.二、三级菌种的质量鉴定,菌丝白（或呈该菌种应有的颜色）均匀、粗壮、有菇香味接种后萌发快,无杂色、无黄水、无结皮、无原基、无干缩脱壁等现象,菌种出售必须贴有菌种质量合格标签，标明菌种种类、级别、品种、生产单位和接种日期。,合格菌种,菌种制作过程中，只要做到,选择正确的配方和