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文档简介

1、沉 淀 反 应,文 金 生,沉淀反应 可溶性抗原如血清、毒素、细菌浸出液等与相应抗体结合，当两者比例合适、在一定温度和电解质存在时，形成肉眼可见的沉淀物或沉淀线，称为沉淀反应。 双向免疫琼脂扩散和对流免疫电泳。,一、双向免疫琼脂扩散 实验目的：检测待测血清中有无HBsAg 实验原理：可溶性抗原与相应抗体在半固体琼脂内进行扩散，当两者比例合适时，就出现白色沉淀线（阳性反应）。 沉淀线的形态、清晰度及位置反应抗原或抗体的特异性和浓度等。利用已知抗原或体检测未知抗体或抗原。,一、双向免疫琼脂扩散 实验材料：1盐水琼脂，诊断血清【抗HBsAg（乙型肝炎病毒表面抗原）的抗体】，阳性血清（含HBsAg），

2、生理盐水，待检血清甲、乙。 载玻片，打孔器，湿盒，微量加样器，吸头，温箱。,一、双向免疫琼脂扩散 实验方法： 1、融化1盐水琼脂； 2、制备半固体琼脂凝胶； 3、打孔； 4、加样（每孔加满）； 5、标记，放湿盒，37温箱24h后观察结果。,实验结果分析,一、双向免疫琼脂扩散 结果： 生理盐水与诊断血清（抗体）之间无沉淀线，待检血清、阳性血清与诊断血清间形沉淀线成融合性，说明待检血清和阳性血清抗原相同。,二、对流免疫电泳 【实验目的】检测待检血清中有无HBsAg 【实验原理】 蛋白质抗原在碱性缓冲液中带负电荷，在电泳时从负极向正极移动。抗体属球蛋白，在碱性缓冲液只带微弱的负电荷，而且相对分子质量

3、较大，电泳力较小，在琼脂电渗力作用下反而由正极向负极移动。这样就使抗原和抗体定向对流，在两孔间相遇时发生反应，并在比例合适处形成肉眼可见的白色沉淀线。,对流免疫电泳实验原理,【实验材料】 1电泳缓冲液：pH 8.6巴比妥缓冲液。 2抗体：诊断血清（抗HBsAg抗体）。 3抗原：阳性血清、待检血清。 41琼脂盐水。 5电泳仪、电泳槽、载玻片、打孔器、移液器、移液头。,【实验方法】 1制板 2打孔 3加样 4电泳 将加好样品的琼脂板置电泳槽上，抗原侧置阴极端，抗体孔侧置阳极端。搭好桥后，接通电源，控制电压610 V/cm板长，电泳约3060 min。 5关闭电源，取出琼脂板，观察结果。,【实验结果】 将玻片对着强光源，先观察生理盐水孔与诊断血清间无沉淀线，阳性血清孔与诊断血

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