microRNA反转和定量引物设计原理、实验方法_第1页
microRNA反转和定量引物设计原理、实验方法_第2页
microRNA反转和定量引物设计原理、实验方法_第3页
microRNA反转和定量引物设计原理、实验方法_第4页
microRNA反转和定量引物设计原理、实验方法_第5页
全文预览已结束

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

1、microRNA的引物设计以ssc-miR-222-3p为例设计引物，其成熟体序列为： AGCTACATCTGGCTACTGGGTCT反向引物：每个反向引物的都带有一段固定的序列，可以形成一个茎环， 固定的序列为：5，-CTCAACTGGTGTCGTGGAGTCGGCAATTCAGTTGAG-3，在这个序列后加上八个碱基，这八个碱基是ssc-miR-222-3p从后面数八个碱基的反向互补序列，就是CTGGGTCT 的反向互补：AGACCCAG ，最后得到的反向引物的序列为5，-CTCAACTGGTGTCGTGGAGTCGGCAATTCAGTTGAG AGACCCAG -3，正向引物：每个正向引

2、物也带有一段固定的序列，固定的序列为：ACACTCCAGCTGGG在这个序列后加上于成熟体除后面六个外剩下的碱基序列，成熟体除掉后面六个碱基后序列为：AGCTACATCTGGCTACT5，-ACACTCCAGCTGGG AGCTACATCTGGCTACT -3，URP：统一反向引物，也是一段固定的序列，TGGTGTCGTGGAGTCGU6引物F-CTCGCTTCGGCAGCACA ，R-AACGCTTCACGAATTTGCGT使用方法：1逆转的引物：所有要做的miRNA反向引物的混合，每个10微升2PCR的引物：50微升的体系，30微升的水，10微升的正向引物，10微升的URP2hsa-miR

3、-124（hsmq-0032 引物）推荐退火温度：60hsa-miR-124 扩增曲线示意图 hsa-miR-124 融解曲线示意图3hsa-miR-125b(hsmq-0034 引物)推荐退火温度：60hsa-miR-125b 扩增曲线示意图 hsa-miR-125b 融解曲线示意图4hsa-miR-137(hsmq-0035 引物)推荐退火温度：60hsa-miR-137 扩增曲线示意图 hsa-miR-137 融解曲线示意图5hsnRNA U6 引物测试推荐退火温度：60hsnRNA U6 扩增曲线示意图 hsnRNA U6 融解曲线示意图6. 电泳结果取5l PCR 产物进行电泳,胶浓度（3）,所有检测都为两个阳性,一个NTC其中泳道1 为hsa-miR-16、泳道2 为hsa-miR-124、泳道

人人文库> 全部分类> 行业资料 > 管理策划

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论