DNA的粗提取与鉴定课件.ppt

1、粗提取与鉴定,DNA,实验材料的选取,材料：鱼卵、猪肝、菜花（花椰菜）、香蕉、鸡血、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、在液体培养基中培养的大肠杆菌 原则上，凡是含有DNA的生物材料都可以考虑，但是，选用DNA含量相对较高的生物组织，成功的可能性更大,鸡是真核生物，真核生物的DNA都在染色体上。 鸟类的血细胞核大，DNA多 不需要破除细胞壁 问题：鸡血细胞液在取材之后，到实验前，是否需要特殊处理吗？ 柠檬酸钠抗凝,一、实验原理,、DNA在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度不同，在0.14 mol/L的NaCl溶液中的溶解度最低。利用这一原理，可以使溶解在氯化钠溶液中的DNA析出。,、DNA不溶于酒精溶液，

2、但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液。利用这一原理，可以进一步提取出杂质较少的DNA。,、DNA遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色。因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。,二、目的要求,初步掌握DNA粗提取和鉴定方法，观察提取出来的DNA物质。,三、材料：,鸡血细胞液（5-10ml），体积分数为95%的酒精溶液（冷却），蒸馏水，质量浓度为0.1g/ml的柠檬酸钠溶液，物质的量浓度分别为2mol/l和0.015mol/l的氯化钠溶液，二苯胺试剂,取质量浓度为0.1g/ml的柠檬酸钠溶液（抗凝剂）100ml，置于烧杯中，将新鲜鸡血180ml注入，同时用玻璃棒搅拌，以免凝血，然后倒入离心管中用1000r

3、/min的离心机离心2min，此时，血细胞沉淀于离心管的底部，除去上清液，就可以得到鸡血细胞液。,问：提取鸡血中的DNA时，为什么要除去血液中的上清液？,四、方法步骤：,1、制备鸡血细胞液,鸡血细胞液,答：上清液是血清，不含有血细胞，而DNA存在于鸡血细胞中，所以要把上清液除去。,加入浓度为0.1g/ml的柠檬酸钠溶液（抗凝剂）：防止鸡血细胞液凝固。,新鲜鸡血,2、提取鸡血细胞的细胞核物质,将制备好的鸡血细胞液5-10ml，注入烧杯中，加入蒸馏水20ml，同时用玻璃棒沿一个方向快速搅拌，使血细胞的细胞膜和核膜加速破裂，过滤，取其滤液。,鸡血细胞液,加入蒸馏水20ml。 目的是：使细胞吸水涨破，

4、释放出细胞中的DNA。,将物质的量浓度为2mol/l的氯化钠溶液40ml加入到滤液中，搅拌使其混合均匀，这时DNA在溶液中呈溶解状态。,3、溶解细胞核内的DNA,DNA溶解液,加入浓度为2mol/L的氯化钠溶液40ml,沿烧杯内壁缓缓加入蒸馏水，同时轻轻搅拌，这时会有丝状物出现，随着蒸馏水的加入逐渐增多，一直到氯化钠浓度约为0.14mol/l时，不再继续增加。,5、滤取含DNA 的黏稠物,4、析出含DNA的黏稠物,加入蒸馏水。 目的是：降低NaCI的浓度，析出DNA。,获得DNA的黏稠物(白色乳状),在烧杯中注入物质的量浓度为2mol/l的氯化钠溶液20ml，使黏稠物尽量多溶解于溶液中。,6、

5、将DNA的黏稠物再溶解,用纱布过滤，取其滤液，DNA溶于滤液中,7、过滤含有DNA的氯化钠,加入浓度为2mol/l的氯化钠溶液20ml,获得含DNA的滤液,在溶液中加入冷却的酒精溶液50ml，溶液中出现杂质较少的丝状物（它的主要成分就是DNA）。,8、进一步提取含杂质较少的DNA,加入冷却的酒精溶液50ml,含DNA的滤液,杂质较少的丝状物,9、DNA的鉴定,取两支20mL的试管，各加入浓度为0.015molL的氯化钠溶液5mL，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解。然后，向两支试管中各加入4mL的二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min，待试管冷却后，观察并且比

6、较两支试管中溶液颜色的变化。,加入0.015氯化钠溶液5mL,不加入丝状物,加入4mL的二苯胺试剂,蓝色,加入0.015氯化钠溶液5mL,加入丝状物,加入4mL的二苯胺试剂,例：下图为“DNA的粗提取与鉴定”的实验装置，请回答问题。,(1)实验材料选用鸡血细胞液，而不用鸡全血，主要原因是鸡血细胞液中 含量较高。 (2)在图A所示的实验步骤中加蒸馏水20 mL的目的是 ，通过图B所示的步骤取得滤液，再在滤液中加入2 mol/L的NaCl溶液的目的是 ；图C所示实验步骤中加蒸馏水的目的是 。 (3)为鉴定实验所得丝状物的主要成分是DNA，可按图D所示进行实验，滴加 溶液。,(4)a试管为对照组，b

7、试管为实验组。 a试管现象 ； b试管现象 。 在沸水中加热的目的是 ，同时说明DNA对高温有较强的 。 a试管在实验中的作用是 。 b试管中溶液颜色的变化程度主要与 有关。,加快颜色反应速度,DNA,使血细胞吸水涨破，放出DNA,使滤液中的DNA溶于浓盐溶液,使DNA析出,二苯胺,溶液不变蓝,溶液变蓝,耐受性,对照,加入丝状物的多少,步骤：,提取血细胞核物质(蒸馏水涨破),溶解(2 mol/L的NaCl),过滤(含核物质滤液),析出(滴蒸馏水，降NaCl浓度至0.14 mol/L),过滤（DNA的黏稠物）,再溶解(2 mol/L的NaCl),过滤（含DNA的滤液）,进一步提纯(体积分数为95%的冷却酒精),鉴定,制备鸡血细胞液,方案二：直接在滤液中加入嫩肉粉，反应10-15min 嫩肉粉的主要成分是木瓜蛋白酶 蛋白酶能分解杂质蛋白，但对DNA没有影响，从而使提取的D