细菌的分离培养、生化反应 PPT课件.ppt

1、实验二,1.细菌分离培养 2理化因素作用 3菌落，色素，溶血现象 4细菌生化反应,细菌人工培养接种法,分离培养法：1平行划线法 2分区划线法 纯种接种法： 1斜面培养基接种法：纯培养和保存菌种 2 液体培养基接种法：增菌 3半固体穿刺接种法：保种和观察细菌动力和生化反应,外界因素对细菌的影响,消毒与灭菌 消毒：指杀死病原微生物，但不包括芽胞。 灭菌：是指杀灭物体上所有微生物，包括 繁殖体和芽胞。 无菌：物品中没有活的微生物存在。 防腐：是指防止或抑制微生物生长繁殖。 消毒剂：高浓度 防腐剂：低浓度,（一） 热力灭菌法 分类：干热灭菌法 湿热灭菌法 1 干热灭菌法 A 焚烧： B 烧灼： C 干

2、烤：160180，2h D 红外线灭菌：,2.湿热灭菌法 A 巴氏消毒法： 61.1-62.8，30 min 71.7，15-30sec B 煮沸消毒法： 100，5min -10min C 流通蒸气消毒法： 100，15-30min D 间歇蒸汽灭菌法： 100，15-30min，37过夜（3次） E 高压蒸气灭菌法: 15磅（121.3），15-30min,湿热比干热灭菌好的原因： 1 细菌蛋白质在有水的情况下易于 凝固变性 2 湿热穿透力强 3 湿热蒸气有潜热存在，水蒸气凝固 成水释放潜热，迅速提高被灭菌物 体的温度,二）光线与射线的消毒作用 1 日光与紫外线 机理：损坏DNA构型(DN

3、A吸收紫外线形成胸腺嘧啶二聚体)细菌死亡或变异 265-266nm(240-280nm) 特点：穿透力弱 2 电离辐射：包括X射线和射线 机制：干扰DNA的合成；破坏细胞膜； 产生过氧化氢等 特点：穿透力强，不升高温度,三）滤过除菌法 用滤菌器除去液体及空气中的细菌 用于不耐热的血清、毒素、抗生素 （四）超声波的消毒作用 可裂解细菌，尤其对G+更敏感 主要用于粉碎细胞，提取细胞组分或制备抗原等,菌落:经过1824h培养后，单个细菌分裂繁殖成一堆肉眼可见的细菌集团。,色素：某些细菌能产生不同颜色的色素，有助于鉴别细菌。 溶血现象：有些细菌产生溶血素，当接种于血平板培养基上可在菌落周围形成溶血环，

4、有助于鉴别细菌。细菌性溶血素指由细菌产生的任何血液毒素。溶血素是一种可使红血球细胞溶解的毒素,琼脂平板划线分离法,1以接种环沾取少许标本先涂布于平板培养基一角，然后将接种环置于火焰上灭菌，待冷却 2与涂菌液处开始作为第一区划线，划线时接种环与培养基表面呈45度角，划线毕，接种环灭菌 3然后于第二区处再划线，且在开始划线时与第一划线相交接数次，以后划线不必再交接 4待第二区完时如上法灭菌，接种划线，依次至最后一区，接种环灭菌，这样每一区的划线内的细菌处逐渐减少，即可获得单个菌落。划线接种完毕，平板倒置，做好标记，于37度温箱培养,紫外线对细菌的作用,波长265-266nm杀菌力最强，细菌DNA吸收了紫外线引起相邻2个T形成二聚体，干扰DNA的复制。穿透力弱。 1用接种环沾取大肠杆菌液，放到普通琼脂平板上，每板放两环，然后用扩散棒来回涂布整个平板表面 2将涂布细菌的平板放入接种箱内。打开平板并用玻璃盖遮住平板的一半，在紫外线下直接照射30分钟 3照射完毕，盖好琼脂平板，放37度温箱孵育24小时，观察结果,染料对细菌的影响,原理：1%龙胆紫阳离子可以菌蛋白