凝集试验PPT课件.ppt

1、凝集试验,1,概念,颗粒性抗原与相应抗体，或表面包被抗原（抗体）的颗粒状物质与相应的抗体（抗原）在电解质存在的条件下相互结合，出现肉眼可见的凝集团现象。,2,类型,直接凝集试验 玻片法测ABO血型（3） 试管法 间接凝集试验 正向间接凝集试验测RF（4） 反向间接凝集试验测HBsAg（1） 间接凝集抑制试验测HCG（2）,3,1.红细胞 2.聚苯乙烯胶乳颗粒,载体颗粒：,反向间接凝集反应,4,直接凝集试验（玻片法）-测ABO血型,5,原理,天然的颗粒性抗原（如细胞、细菌等）与相应抗体在适宜条件下反应，出现肉眼可见的凝集物，称为直接凝集反应。 玻片法属于定性试验。,6,7,主要的试剂和器材,抗A

2、血型定型试剂 抗B血型定型试剂 搅拌棒 玻片,8,步骤,取玻片1块，左上角和右上角分别标上“A”和“B” 用采血针采指尖血（左手无名指尺侧），将血滴在玻片的两端。 在两血滴上分别滴上抗A标准血清和抗B标准血清，用搅拌棒搅匀。 手持玻片，前后旋转摇动，促使血清与红细胞充分混合，用肉眼观察有无凝集。,9,结果观察和判断,有凝集时红细胞相互聚集成团，出现大小不等的颗粒。,10,注意事项,玻片应洁净、干燥、中性，以防止和减少非特异性凝集。 室温低于10时，易出现冷凝集而造成的结果。,11,正向间接凝集试验测RF,12,原理（胶乳凝集试验）,类风湿因子（RF）是一组抗变性IgG的自身抗体，它能与人或动物

3、的变性IgG结合，而不与正常人IgG发生凝集反应。 将处理过的人IgG与胶乳颗粒共价交联，使其吸附于胶乳颗粒载体上，称为致敏胶乳颗粒。当待检血清中有RF时，则与致敏胶乳颗粒上的变性IgG发生反应，出现凝集现象。,13,（正向）间接凝集反应原理示意图,（变性IgG）,14,主要的试剂和器材,类风湿胶乳诊断试剂 RF阴性对照 RF阳性对照 反应板 搅拌棒,15,步骤,取阳性血清、阴性血清各1滴于反应板上，然后分别加类风湿胶乳诊断试剂1滴。 用搅拌棒充分混匀后，轻轻摇动反应板23min，观察结果。,16,结果观察和判断,在室内的光线下观察，有清晰的凝集颗粒出现，且液体澄清者为RF阳性 若需做半定量测

4、定，可将血清作倍比稀释，重复上述测定，以出现凝集的血清最高稀释度为RF的效价（滴度）。,17,反向间接凝集试验-测HBsAg,18,原理,将抗体致敏的红细胞与样本中相应抗原作血凝试验，观察红细胞凝集现象，用以判断样本中相应抗原的有无及其效价。,反向间接凝集反应原理示意图,19,主要的试剂和器材,HBsAg诊断血球 HBsAg稀释液 HBsAg待检血清 96孔V型凝集板,20,步骤,待检血清的倍比稀释：在凝集板的12个孔中依次加入25l HBsAg稀释液，用加样枪吸取HBsAg待检血清25l，将血清在12孔中依次倍比稀释成1:2，1:4，1:8，1:16，1:32，1:64，1:128，1:25

5、6，1:512，1:1024，1:2048，1:4096。 在上述各孔中依次加HBsAg诊断血球25l，混匀1min，置37温浴1h，观察结果。,21,结果观察和判断,红细胞凝集强度分级 ：红细胞沉积于孔底； ：红细胞沉积于孔底，周围有散在少量凝集； ：红细胞形成片层凝集，面积较小，边缘较松散； ：红细胞形成片层凝集，面积略多于； ：红细胞形成片层凝集，均匀布满孔底，或边缘 皱缩如花边状。 出现“+”以上凝集强度判断为阳性结果，以出现“+”凝集程度的血清最高稀释度为该血清HBsAg的效价。,血凝反应强度示意图,22,注意事项,器材必须十分洁净，否则对结果影响较大。 不能使用溶血、污染细菌的待检

6、血清，且待检血清中不能含红细胞。 试验的灵敏度与致敏红细胞浓度有关，以0.25时的灵敏度最高，但不易观察结果，一般选用0.5浓度为宜。 加致敏红细胞悬液前应先摇匀，以免影响灵敏度。 混匀不少于1min，以免因混合不均出现不清晰的凝集模式。,23,间接凝集抑制试验测HCG,24,原理,将含有可溶性抗原的待检样本先与相应抗体（限量）混合，充分作用后再加入抗原致敏的胶乳颗粒，因抗体已与样本中的可溶性抗原结合，无多余的抗体与胶乳颗粒发生反应，故不再出现凝集现象，称胶乳凝集抑制试验。 本试验以检测绒毛膜促性腺激素（HCG）的免疫妊娠试验为例。,25,26,主要的试剂和器材,妊娠试剂抗血清（抗HCG） 妊娠胶乳试剂 HCG待测尿液 反应板 搅拌棒,27,步骤,将待检尿液（HCG阳性）和阴性尿（用HBsAg稀释液代替）分别取1滴于反应板上。 各加1滴妊娠试剂抗血清，用搅拌棒搅匀，手持反应板，前后旋转摇动1min（充分）。 在上述液体上各加1滴胶乳抗原，用搅拌棒搅匀，再轻摇1015min，观察结果。,28,结果观察与判断,阴性对照应出现明显的均匀一致的凝集颗粒，液体澄清，否则试验无效。 阳性对照应出现均匀一致的胶乳状。 待检样本如出现明显的凝集为HCG阴性；如不出现凝集，呈均匀胶乳状为HCG阳性