课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数.ppt

1、尿素分子的立体结构,CO（NH2）2+H2O CO2+2NH3,脲酶,课题2,土壤中分解尿素的细菌的分离与计数,一、研究思路,美国黄石国家公园的一个热泉,（一）筛选菌株,水生耐热细菌Taq ( Thermus aquaticus ) 耐高温的Taq DNA聚合酶 美国微生物学科布鲁克1966年发现耐热细菌,1、实验室微生物的筛选原理（P21）,人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。,（一）筛选菌株,一、研究思路,2、选择培养基,在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养基。,（一）筛选菌株

2、,一、研究思路,加入青霉素的培养基 细菌不生长，酵母菌、霉菌等真菌能生长 不加含碳有机物的无碳培养基 分离自养型微生物,1.在培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是是什么物质？,碳源是葡萄糖，氮源是尿素,2.分析该配方的培养基对微生物是否具有选择作用？如果有，又是如何进行选择的？,有筛选作用。尿素是培养基中的唯一氮源，因此，原则上只有能够利用尿素的微生物才能够生长。,阅读22页本课题使用的培养基配方,（二）微生物计数,1、显微镜直接计数法,1mm,一、研究思路,每一个大方格边长为 1mm ，则每一大方格的面积为1mm2，盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间的高度为0.1mm，所以计数

3、室的容积为0.1mm3。,1mm,下面以一个大方格有25个中方格的计数板为例进行计算：设五个中方格中总菌数为A，菌液稀释倍数为B，那么，一个大方格中的总菌数是多少? 1ml菌液中的总菌数?(1ml=1cm3=1000mm3）,5AB104,5A,缺点： 不能区分死菌与活菌,2、统计菌落数目稀释涂布平板法,（二）微生物计数,平板菌落数统计注意事项,1、几个菌落粘连一起，只要肉眼能区分，就算几个； 2、不管菌落大小，只要肉眼看得见，就应该计数； 3、菌落数目过多时，可以合理采用样方法。,某班级菌落数统计表格,平板,组别,恰当的稀释度、正确的涂布操作是成功地统计菌落数目的关键。,（取样0.1mL,稀

4、释倍数106）,思考1：如何根据平板上的菌落数推测出每mL样品中的菌株数？,统计某一稀释度下平板上的菌落数，计算出平板上的菌落数的平均值，然后按公式每mL样品中的菌株数=（CV）M进行计算。,思考2：统计的菌落数往往比活菌的实际数目高还是低，为什么？,低。因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。因此，统计结果一般用菌落数而不是活菌数来表示。,思考3：为了增强实验结果的说服力和准确性，我们在实验设计时应该怎么做更合理？,实例分析1,第一位同学只涂布了一个平板，没有设置重复组，因此结果不具有说服力。 第二位同学考虑到设置重复组的问题，涂布了三个平板，但是其中1个平板的计数结果与

5、另外2个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，因此，不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值。,想一想：哪位同学的结果更接近真实值？你认为这两位同学的实验需要改进吗？如果需要，如何改进？,（三）实验基本原则,1、平行重复原则,一、研究思路,实例分析2,想一想：A同学和其他同学所得实验结果差异 如此之大，请分析原因可能有哪些？,实例分析2,想一想：你能通过设置对照，帮助A同学排除 上述两个可能影响实验结果的因素吗？,一种方案： 可以由其他同学用与A同学一样的土样进行实验。 如果结果与A同学一致，则证明A无误； 如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题。,实例分析,想一想：你能通过设置对照，帮助A同学排除 上述两个可能影响实验结果的因素吗？,另一种方案： 将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。,实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的！,实例启示,设置对照实验的目的是什么？,排除实验操作、培养条件等无关变量对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。,（三）实验基本原则,1、平行重复原则,2、对照原则,3、单一变量原则,一、研究思路,实验名称：土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 实验原理： 实验目的： 材料用具： 方法步骤：1、分组编号 2、处理（遵循实验设计的基本原则） 对照原则、单一变量